高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量

　　2.4  供试品溶液的制备
   
　　取淫黄胶囊10粒内容物,研细,取细粉约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇20 mL,称定重量,超声处理(功率200 W,频率59 kHz)45 min,放置,冷至室温,称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液4 mL置水浴上蒸干,加水10 mL溶解,以乙酸乙酯萃取3次,每次10 mL,合并乙酸乙酯萃取液,减压回收溶剂至干,残渣加50%乙醇溶解并定容至25 mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。

　　2.5  阴性干扰试验
   
　　按处方制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/mL)、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图(见图1)。结果表明,在淫羊藿苷色谱峰位置处阴性无干扰。

　　2.6  精密度试验
   
　　精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/mL)20 μL,注入液相色谱仪,重复进样5次。结果峰面积积分值RSD＝1.03%,表明精密度良好。

　　2.7  稳定性试验
   
　　取同一份供试品溶液(批号20050509),分别于0、2、4、6、8 h时进样20 μL,按上述色谱条件测定,峰面积积分值RSD＝1.39%。结果表明,供试品溶液中淫羊藿苷至少在8 h内稳定性良好。

　　2.8  重复性试验
   
　　取同一批淫黄胶囊(批号20050509)5份,分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μL,按上述色谱条件测定,计算淫羊藿苷含量,结果RSD＝2.92%。

　　2.9  加样回收率试验
   
　　取已测定含量的淫黄胶囊(批号20050509)内容物,研细,称取6份,各约0.1 g,精密称定,分别精密加入淫羊藿苷对照品储备液(208.0 μg/mL)5 mL,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.10  样品测定
  
　　取淫黄胶囊样品3批,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μL,按上述色谱条件测定,采用外标法计算淫羊藿苷含量,结果见表2。结合《中华人民共和国药典》标准规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量不低于0.5%[1],暂定本品每1 g含淫羊藿苷不低于8 mg。表2  淫羊藿苷含量测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　在供试品溶液制备中,曾分别比较了不同提取方式(回流法提取、超声法提取)及其不同提取时间(15、30、45、60 min)对淫黄胶囊样品中淫羊藿苷的提取效率,结果两种方式提取的效果基本一致。文中所选用的超声法提取操作简便,超声45 min可将样品所含的淫羊藿苷提取完全。因该超声提取法同时提取出较多杂质,本试验根据淫羊藿苷的溶解性质[2],再将提取液以乙酸乙酯提取、纯化,结果能使供试品溶液中杂质大大减少,在保证被测成分提取完全的同时,减少了样品对色谱柱的污染。对于流动相,将《中华人民共和国药典》[1]中淫羊藿药材含量测定项中的流动相调整为乙腈-水(25︰75,V/V),即可得到满意的色谱分离效果。本试验所建立的供试品溶液制备方法简便、易行,含量测定方法准确、可靠,可用作淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.268.

　　[2] 杨 云,冯卫生.中药化学成分提取分离手册[M].北京.中国中医药出版社,1998.329.