川芎药材质量标准研究

   
　　取本品粉末1 g,加稀盐酸15 mL,超声提取20 min,用乙醚(30、20 mL)提取2次,合并乙醚液,滤过,挥干,残渣加乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液[2]。另取阿魏酸对照品适量,加无水乙醇溶解,制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述2种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(3∶1.5∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,再置氨蒸汽中熏数分钟。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的深蓝色斑点。

　　3  阿魏酸的含量测定

　　3.1  色谱条件[2]
   
　　Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液(21∶79)；流速：1.0 mL/min；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按阿魏酸计算应不低于3 500。

　　3.2  对照品溶液的制备
   
　　精密称取阿魏酸对照品适量,加甲醇溶解制成每1 mL含0.042 5 mg的对照品贮备液。再精密吸取该贮备液3.0 mL,置于5 mL棕色容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

　　3.3  供试品溶液的制备
   
　　取本品适量,研细,称取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入70%甲醇25 mL,密塞,精密称定,加热回流30 min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液,用微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。

　　3.4  对照试验
  
　　按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL,分别注入色谱仪,进行测定。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间的色谱峰(见图1)。因此,可在此系统条件下对阿魏酸进行定量分析。

　　3.5  线性关系考察
   
　　精密吸取阿魏酸对照品贮备液(0.042 5 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分别置于10 mL棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成一组浓度梯度溶液,摇匀,分别精密吸取10 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：Y＝－16.4X＋4 916.6,r＝0.999 5,表明阿魏酸在0.042 5～0.382 5 μg范围内呈良好的线性关系。

　　3.6  精密度试验
   
　　精密吸取同一对照品溶液,按上述色谱条件进行分析,重复进样6次,结果峰面积均值为1 243.6,RSD＝0.74%。

　　3.7  重复性试验
   
　　平行制备川芎药材(批号060102)的供试品溶液6份,照“3.1”项下方法进行测定,结果平均含量为0.65 mg/g,RSD＝1.01%。

　　3.8  稳定性考察
   
　　精密吸取供试品溶液10 μL,分别在0、2、4、6 h各进样1次,测定峰面积,RSD＝1.08%。表明供试品溶液在6 h内稳定。

　　3.9  加样回收率试验
   
　　称取已知含量为0.63 mg/g的川芎药材0.3 g,精密称定,分别精密加入阿魏酸对照品贮备液(0.106 3 mg/mL)1.2、1.2、1.8、1.8、2.3、2.3 mL,照“3.3”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率,结果见表1。表1  阿魏酸加样回收率测定结果（略）

　　3.10  样品测定

    按“3.2”和“3.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件,精密吸取10 μL,注入色谱仪,测定,按外标一点法计算,结果见表2。表2  样品测定结果（略）

　　4  讨论
   
　　本实验对川芎药材进行了薄层色谱鉴别,结果与对照药材、对照品斑点一致,且无杂质干扰斑点,效果较好。在川芎对照药材薄层鉴别中,曾比较《中华人民共和国药典》中的提取方法与乙醚直接超声处理,结果斑点差别不大,所以选择了操作简单的直接超声处理。在阿魏酸对照品薄层鉴别中,比较了甲醇超声和稀盐酸超声后用乙醚萃取,结果直接用甲醇超声提取的供试品有斑点干扰。在展开和显色时,曾用《中华人民共和国药典》[1]的展开和显色条件,但考虑到二氯甲烷有毒,显色剂[1%三氯化铁乙醇溶液-1%铁氰化钾溶液(1∶1)的混合溶液]配制繁琐,而且斑点易发散,后经反复尝试,用环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(3∶1.5∶0.2)展开,喷10%磷钼酸乙醇液后置氨蒸汽中熏,阿魏酸斑点特征明显,效果好。
   
　　在含量测定中,供试品提取曾比较用甲醇直接超声处理、70%甲醇直接超声处理[1]、酸水提乙醚萃取[3]以及5%Na2CO3先使阿魏酸成钠盐,然后用乙醚脱脂,用盐酸酸化使酸游离,再用乙醚萃取[4],结果后两种方法的杂质峰少,但含量较低；用甲醇直接超处时峰形不对称,所以采用简单而且易操作的70%甲醇直接超声处理。在流动相选择时,曾采用当归原药材[1]含量测定项下的乙腈-0.085%磷酸溶液,结果杂质峰多,峰形宽、不对称。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.89,131.

　　[2] 张玉爱,吴泽榕,郑起平,等.HPLC测定养血当归软胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药,2006,28(4)：599.

　　[3] 张 健,金 墚,杨传敏,等.HPLC测小儿运脾合剂中川芎酸的含量[J].中国药房,2005,16(24)：1895.

　　[4] 潘细贵,汪 洋,冯晓东,等.白癜风丸质量标准的研究[J].中国药师, 2006,9(5)：440.