玉郎伞多糖对大鼠不同脑区腺苷酸环化酶的影响

                 作者：梁霜，黄仁彬，王乃平，付书婕

【摘要】  目的从腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）水平来探讨玉郎伞多糖（yulangsan polysaccharide, YLSPS）抗抑郁的作用机制。方法采用放射免疫方法测定大鼠前额皮层、下丘脑、海马AC的活性。结果YLSPS（150～600 mg/kg）可激活正常大鼠前额皮层AC活性，YLSPS（600 mg/kg）可抑制正常大鼠下丘脑、海马AC的活性（P<0.05）。结论激活大鼠前额皮层AC可能是YLSPS抗抑郁活性的重要机制之一。

【关键词】  玉郎伞多糖； 腺苷酸环化酶

　　抗抑郁药的作用机制至今尚未明确，受体后神经细胞信号转导过程是近年抗抑郁剂研究的焦点。玉郎伞多糖（yulangsan polysaccharide，YLSPS）是从蝶形花科植物疏叶崖豆Millettia pulchra Kurz var. laxior （Dunn） Z.Wei的块根中提取的有效成分，由葡萄糖和阿拉伯糖组成［1］。本课题组前期研究表明，YLSPS可显著缩短行为绝望动物模型的累计不动时间，提高慢性应激小鼠脑内单胺类神经递质浓度，为更深入探讨YLSPS抗抑郁作用机制，本研究采用放射免疫法测定YLSPS对慢性应激小鼠不同脑区AC活性的影响。

　　1  材料与仪器

　　1.1   动物SD雄性大鼠，体质量150～200 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（桂）2003-0003。

　　1.2  药物YLSPS，由本室自行提取（玉郎伞经醇提后的药渣用热水提取，乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素（DEAE-52）柱层析分离纯化，分离得到的YLSPS经Sephadex-75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法证实为高纯度多糖，纯度95%，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成，红外光谱显示有典型的多糖吸收峰）。盐酸氟西汀胶囊（fluoxetine，FLU，批号：071201，上海中西制药有限公司）。实验前将各试药用蒸馏水配成所需浓度，4℃冷藏备用。

　　1.3  仪器与试剂GC-1200γ放射免疫计数器（中国科学技术大学科技实业总公司中佳光电仪器分公司）； TGL-16G-A低温离心机（Shang Hai An Ting Ke Xue Yi Qi Chang）；FJ-200高速均质分散机（上海标本模型厂）。环磷酸腺苷放射免疫分析试剂盒（北京普尔伟业生物科技有限公司，批号：20081024）。

　　2  方法

　　2.1  动物分组和给药

　　将大鼠随机分成5组：空白组、氟西汀组（FLU组）、YLSPS低剂量组（YLSPSL组）、YLSPS中剂量组（YLSPSM组）、YLSPS高剂量组（YLSPSH组），每组10只。每日上午8时灌胃给药，1次/d，连续21 d。

　　2.2  取材和样品处理 

　　将大鼠断头，在冰台上迅速分离前额皮层、下丘脑、海马，称重。取组织50 mg，加入2 ml冷的50 mmol/L pH 4.75醋酸缓冲液（27.22 g NaAc·3H2O溶于1 000 ml蒸馏水，即为0.2 mol/L NaAc。用冰醋酸配制0.2 mol/L醋酸，然后取410 ml 0.2 mol/L HAc和590 ml 0.2 mol/L NaAc混匀，测pH值调到pH4.75，然后每1 000 ml溶液加入5.95 g EDTA二钠盐溶解即得200 mol/L pH4.75醋酸缓冲液，用时1∶4稀释）的试管内（冰浴），均浆，加入2 ml无水乙醇，混匀，静止5 min，3 500 r/min冷冻高速离心15 min，将上清液收集在青霉素小瓶内，再用75%乙醇2 ml洗沉淀，匀浆分散，混匀，3 500 r/min冷冻高速离心15 min，合并上清液，60℃烤箱中吹干，残渣放于4℃保存。测时用1 ml醋酸缓冲液溶解，取0.1 ml测量。