了哥王中西瑞香素提取工艺的正交实验设计优选

　　2.2  提取工艺的优化

　　2.2.1  正交实验设计

　　考虑到大量提取时的实际条件，在预实验的基础上，选取提取溶剂的加入量为药材的10倍量，影响了哥王中西瑞香素提取率的主要因素为：乙醇的体积分数、提取时间、提取次数。因此选取上述3个因素为考察因素，每个因素设立3个水平（见表1）采用L9（34）正交设计表，以西瑞香素含量为指标进行实验，实验安排及结果见表2～3。表1  因素水平，表2  正交实验直观分析结果，表3  方差分析结果（略）

　　2.2.2    实验方法及结果 

　　称取了哥王药材9份，每份约10 g，精密称定，按表2的设计浸泡过夜后回流提取，热滤，合并滤液，减压浓缩至干，所得浸膏用甲醇溶解，转移至100 ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml置50 ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，取续滤液按西瑞香素含量测定项下测定。9次实验结果见表2。

　　2.2.3  正交实验结果分析由表2～3可知，直观分析表明，各因素对西瑞香素含量影响程度依次为：A>C>B，最佳的工艺组合为A2B2C3 。方差分析的结果表明，3个因素对西瑞香素含量影响均不显著。以西瑞香素含量为主要考察指标，确定最佳提取工艺为A2B2C3 ，即75%乙醇，提取4次，2 h/次。

　　2.2.4   方法验证实验根据上述结果筛选的工艺进行实验，平行做6份，按照“2.1.3”项下制备供试品溶液，取20 μl续滤液进样分析。结果：平均西瑞香素含量为4.030 mg·g-1 ，与表2结果比较可见本提取工艺合理。

　　3  讨论
   
　　西瑞香素甲醇溶液于200 ～ 400 nm紫外区内进行扫描，于345 nm处有最大吸收，所以本实验采用345 nm为最大吸收波长。

　　根据预实验结果，了哥王药材浸泡过夜提取的更完全。经正交设计实验直观和方差分析发现影响了哥王中西瑞香素提取的因素依次为乙醇体积分数>提取次数>提取时间，最佳提取条件为A2B2C3，即：75%乙醇溶液提取4次，2 h/次。按此最佳工艺条件进行验证实验，结果表明该工艺具有重复性，说明该提取工艺稳定，可为生产提供实验参考。

【参考文献】
  　　［1］陈 扬，孙立新. 中药了哥王研究进展［J］. 沈阳药科大学学报，2009，26（7）：587.

　　［2］熊友香，王显武，尤志勉，等. HPLC测定不同产地了哥王药材中西瑞香素含量［J］.中成药，2009，31（8）：附18.

　　［3］Chen HC, Chou CK, Kuo YH, et al. Identification of a Protein Kinase C (PKC) Activator, Daphnoretin, That Suppresses Hepatitis B Virus Gene Expression in Human Hepatoma Cells［J］.Biochemical Pharmacology, 1996,52:1025.

　　［4］杨振宇，郭 薇，吴东媛，等. 了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究［J］.天然产物研究与开发，2008，20（3）：522.

　　［5］杜智敏，杨振宇，郭 薇. 西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的药物［P］.中国专利：CN101016286，2007-08-15.

　　［6］李艳敏，姜建国，曾治平. 了哥王中西瑞香素含量的HPLC法测定［J］.现代食品科技，2009，25（5）：563.