黄芪药材中黄芪甲苷含量的荧光分光光度法测定
【摘要】 目的建立荧光分析法测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量方法。方法利用大茴香酸在硫酸介质中与黄芪甲苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量。结果最大激发波长Ex为320 nm，最大发射波长Em为387nm。测定样品的平均回收率为97.22%，RSD=2.31%（n=5）。结论该方法灵敏度高，选择性好，结果无干扰，可广泛应用于黄芪药材的质量控制。
【关键词】 荧光分光光度法； 黄芪； 黄芪甲苷
Determination of Astragaloside IV in Radix Astragali by Spectrophotofluorimetry
YANG Lianmei，HU Rong，LIU Yangqing，LI Guilan, ZHAO Huihui
（Yangzhou University,Yangzhou 225001,China；Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024,China；Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029，China）
Abstract：ObjectiveTo determine the content of Aragaloside IV in Radix Astragali by spectrophotofluorimetry.MethodsThe fluorescence characteristics of astragaloside anisic reaction product were used to dertermine aragaloside IV by spectrophotofluorimetr. ResultsThe reaction product of astrogaloside and anisic acid had excitation and emission maxima at 320and 387nm ，respectively.The recovery of measurement was 97.22%（RSD =2.31，n=5）.ConclusionThe method has advantages of high sensitivity, low detection limit and no interference. It also can be used for quality control of Aragaloside IV in Radix Astragali .
Key words： Spetrophotofluorimetry； Astragalus membranaceus（Fisch）Bge； Astragaloside IV
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch．）Bge．var．mongholicu（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪A．membranaceus（Fisch．）Bge的干燥根，具有补气固表、利尿脱毒，排脓，敛疮生肌等功效［1］。黄芪为常用中药，在中药制剂中以黄芪为君药的产品非常多，因此如何控制黄芪的质量至关重要。黄芪甲苷是黄芪主要有效成分之一，也是黄芪皂苷中具有代表性的单体，在抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等多方面具有显著作用［2］。黄芪甲苷仅在200 nm处有末端吸收，对HPLC色谱法紫外检测器检测不利，噪音对结果影响较大，灵敏度也较低［3］。2005年版《中国药典》采用蒸发光散射检测器测定，具有分离度好，应用范围宽，流动相无干扰等优点，但操作繁琐，价格昂贵，不利于制药公司及基层医疗单位普及。本文根据浓硫酸条件下黄芪甲苷与大茴香酸反应产物具有荧光的特性，采用荧光分光光度法测定不同产地、不同生长年限黄芪药材中黄芪甲苷的含量［4］，以期为黄芪的质量控制提供客观的定量评价依据。
1 仪器与试药
Perkin Elmer instruments LS45 Luminesence Spectrometer（美国PerkinElmer 公司LS45型荧光分光光度计），HX-200A型高速中药粉碎机，万分之一电子天平 FA/JA 1004型。72%的硫酸溶液，2%大茴香酸的无水乙醇溶液，石油醚、氯仿、正丁醇（三者均为天津市东丽区天大化学试剂厂产品），甲醇（天津市科密欧化学试剂开发中心产品），无水乙醇（天津市耀华化学试剂有限责任公司产品），以上试剂均为分析纯。
黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所（批号110781-200613）。黄芪药材采集或购于山西，内蒙两省，经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍副教授鉴定为蒙古黄芪。
2 方法和结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品5 mg置5 ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，即得。
2.2 供试品溶液的制备黄芪药材用高速中药粉碎机粉碎（细粉过60目筛），精密称定0.2g，水煎煮3次（40，30，20 min）共1.5 h，合并水煎液。分别用石油醚，氯仿，正丁醇萃取4次，每次萃取剂用量为水煎液体积的50%，合并正丁醇相，总体积为30 ml，正丁醇相挥干，用甲醇溶解备用。测定时，移取供试品溶液1 ml置10 ml容量瓶中，加入2%大茴香酸溶液0.6 ml，72%硫酸溶液0.8 ml，60℃水浴中反应20 min，迅速冷却后用无水乙醇定容至刻度，摇匀，在荧光分光光度计下测定荧光强度，黄芪甲苷反应产物最大激发波长Ex=320 nm，最大发射波长Em=387 nm，同时测定无黄芪甲苷对照品的试剂空白的荧光强度。
2.3 线性关系的考察精密量取对照品溶液（1.0 mg·ml-1）10，25，50，75，80 μl，照“2.2”项下制备方法操作，以对照品溶液浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标，得回归方程为Y=91.465X+5.702 4，r=0.999 7，结果表明黄芪甲苷在1.0～8.0 μg·ml-1，其浓度与荧光强度呈良好的线性关系。
2.4 精密度实验精密量取同一供试品溶液，照“2.2”项下制备方法操作，连续6次测定其荧光强度，RSD为0.10%，表明仪器精密度良好。