蛭龙活血通淤胶囊对大鼠急性脑梗塞缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响
3结果
3.1神经功能缺损程度治疗后神经功能缺失评分假手术组为0分，蛭龙活血通淤胶囊治疗组为(1.78±1.03)分，步长脑心通治疗组为(1.80±1.15)分，两组均显著低于模型组的(2.90±1.10)分(0.01
3.2组织病理学变化光镜下假手术组大鼠皮层各层细胞排列整齐，神经元结构完整，神经基质无水肿，基底神经节区神经元结构正常，神经纤维无损坏，模型组大鼠病理改变为神经元结构模糊，胞体肿胀，胞核淡染，核固缩，尼氏小体减少或消失等变化;蛭龙活血通瘀治疗组与步长脑心通对照组见大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞结构清楚，核固缩、核溶解程度较局灶脑缺血对照组明显减轻，病变范围明显缩小。
3.3凋亡细胞和Bcl-2、Caspase-3蛋白表达检测结果光镜下TUNEL染色阳性的凋亡细胞为圆形或椭圆形，细胞核或胞浆中有棕色颗粒，核染色质浓聚呈边聚观象，似月牙形，有时可见细胞膜皱褶，以及芽生形成膜包裹的凋亡小体。阳性细胞呈簇状或散在分布于梗塞灶边缘区域。假手术组脑组织TUNEL染色只有零星的细胞凋亡，而模型组凋亡细胞略有增多，蛭龙活血通淤治疗组与步长脑心通对照组较模型组凋亡细胞明显减少(P<0.01)。光镜下Bcl-2阳性细胞核膜和胞浆呈棕黄色。假手术组可见少量表达，模型组较假手术组增多(P<0.01)，多分布在缺血周围区域，而病灶中心未见阳性细胞。蛭龙活血通淤治疗组与步长脑心通对照组表达最多，与模型组及假手术组比较有显著性差异(P<0.01)。光镜下Caspase-3阳性细胞胞浆、胞核均着色，呈均匀弥漫棕黄色染色，多分布于缺血周围区域，蛭龙活血通淤治疗组与步长脑心通对照组Caspase-3阳性细胞的表达均明显少于模型组(P<0.01)。结果见表1。 表1各组神经功能评分及神经细胞凋亡指数
4讨论
近年来细胞凋亡与脑梗塞的关系越来越受到人们的重视。有研究表明缺血性脑损伤引起的细胞死亡有凋亡(apoptosis)和坏死(necrosis)两条途径[2]，坏死发生在脑缺血较早期的缺血中心区，而凋亡多发生在脑缺血后的半暗区。脑梗塞发生、发展过程与细胞凋亡的发生机制目前尚未清楚。目前研究较多的有Bcl-2家族和Caspase家族[3，4]，其与细胞凋亡过程密切相关，研究表明抑制神经细胞凋亡就可能减少脑缺血后迟发性神经元损伤，从而抢救缺血后半暗区，就有可能阻止脑梗塞范围扩大，减轻脑损害，保护脑组织。
大脑中动脉闭塞(MCAO)模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型[5]。其中线栓法MCAO模型，具有不开颅、效果肯定且可准确控制缺血及再灌注时间的优点，便于分析神经元对缺血的敏感性、耐受性，及研究再灌注损害和治疗时间窗的选择，本实验研究亦采用此法的改良方法[6]制作大鼠缺血再灌注模型。本实验通过DNA末端标记法(TUNEL)证实了急性脑梗塞再灌注过程中凋亡细胞的存在，研究结果表明蛭龙活血通淤胶囊可有效促进相关基因Bcl-2，抑制相关蛋白Caspase-3的表达，对脑神经细胞凋亡有明显抑制作用，减轻脑神经细胞损伤，对缺血再灌注脑组织有保护作用。同时HE染色显示模型组缺血区脑神经细胞广泛坏死，再灌注损伤区形成软化灶，灶内组织溶解，正常结构消失，细胞多为小核深染的细胞。软化灶周边细胞相对正常。蛭龙活血通淤胶囊组与步长脑心通组缺血软化灶相对模型组则较小。
蛭龙活血通淤胶囊是以黄芪、水蛭、地龙、桂枝等药为主而成的纯中药制剂，现代药理研究证实黄芪能明显扩张脑血管，改善微循环，保护红细胞变形能力、促进血液流动、减轻血栓形成，保护脑组织缩小梗塞范围，抑制血小板黏附聚集及释放，促进神经元生长作用[7]。水蛭则可以抗血栓[8];抑制血小板聚集[9];降低血脂和改善血液流变学[10];减轻脑水肿[11]。地龙[12]可对体内的凝血系统和纤溶系统具有广泛的影响，使体外的血栓形成时间延长，既抗凝又不影响止血，有利于血栓的防治。本研究结果阐明蛭龙活血通淤胶囊具有减轻脑组织水肿，抑制神经细胞的凋亡及坏死等脑缺血保护作用，为临床脑血管病的防治提供理论依据，当然，其作为复方制剂治疗脑梗塞，其具体机制更为复杂，尚待进一步研究。
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