顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定疏毛吴茱萸挥发性化学成分

　　3.1.2疏毛吴茱萸挥发性成分测定的单因素实验对于HS-SPME-GC-MS分析样品来说，在同一温度下，待测组分解吸完全程度与解吸时间直接相关。解吸不完全不仅会影响方法的灵敏度，而且会污染后续样品，但长时间高温解吸会缩短萃取纤维的寿命。而在一定的时间内，温度升高可使解吸加快，但会缩短SPME萃取纤维的使用寿命。一般老化温度可作为解吸温度，常选250℃[12~15]，为了更直观快捷的找到最适宜解吸时间，选择所有疏毛吴茱萸挥发性化学成分在GC-MS的TIC图谱中的总峰面积大小为指标，对该方法萃取疏毛吴茱萸挥发性成分的解吸时间进行优化。分别在250℃下解吸1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 min，并且计算TIC图谱中所有峰的总面积如图1所示。从图1可以看出在一定范围内解吸时间加长可以使样品所有峰的总面积增大，但是当时间超过5 min时挥发性成分接近亚平衡状态时，如果样品在相同的条件下解吸，也可以对被分析物进行较准确的测定，所以为了缩短分析时间和更好的维护SPME萃取纤维，以5 min为最佳吸附时间。

　　3.1.3样品的精密度考察在优化条件下，称取0.5 g(每次称样量之间误差在2 mg内)对疏毛吴茱萸样品的挥发性进行6次重复，对主要的挥发性成分进行精密度考察，以RSD表示。结果见表4和图2。

　　3.2疏毛吴茱萸挥发性成分的定性分析采用上述优化后的固相微萃取条件，即在5 ml装有磁力搅拌器的顶空瓶中加入0.5 g的疏毛吴茱萸待测样品，使用PDMS 100 μm 萃取头，在60℃的萃取温度、萃取30 min，GC 解吸5 min，用于GC-MS分析，利用GC-MS方法测定疏毛吴茱萸挥发性化学成分进行定性分析和定量分析结果如图3及表4所示。图1不同解吸时间下TIC图谱中所有峰的总面积对比图图2HS-SPME提取的挥发性成分的色谱叠加图(6次重复)从表2可以看出，疏毛吴茱萸中共分离出85个色谱峰。根据计算机检索(质谱数据库NslT147)和相关的文献报道的结果，共鉴定出77种挥发化学成分。根据面积归一法测其相对含量，共占其色谱流出组分总量的99.43%。图3疏毛吴茱萸挥发性成分的总离子流图本实验所鉴定出的疏毛吴茱萸挥发性化学成分主要有萜类、倍半萜类及其氧化物等物质。疏毛吴茱萸挥发性化学成分主要是月桂烯(3.70%)、反式-罗勒烯(1.71%)、顺式-罗勒烯(14.47%)、β-榄香烯(9.79%)、石竹烯(9.46%)、大根香叶烯(19.77%)、α-布藜烯(3.37%)，α-金合欢烯(7.31%)、γ-榄香烯(2.00%)、环十二烷己酮(2.68%)等。其中含量最高的是大根香叶烯，含量约占香气总量的19.77%，表明该物质是疏毛吴茱萸中最主要的挥发性成分。表4疏毛吴茱萸挥发性的化学成分

　　4结论

　　正交设计是多因素分析的有利工具，它可以很方便地从众多因素中选出主要影响因素及最佳水平组合，从而用较少的实验次数获得较多的信息，为选择最佳实验条件提供可靠的方法。本次实验得到最佳水平组合为使用PDMS 100 μm 萃取头、在60℃的萃取温度、萃取30 min。可以通过较少次数的实验取得最佳萃取效果的组合。解吸时间的考察，我们没有采用正交设计实验而采用了单因素实验是考虑到解吸时间直接影响到解吸程度的大小，解吸不完全不仅会影响方法的灵敏度，而且会污染后续样品使实验准确性很难把握，但长时间高温解吸会缩短萃取纤维的寿命;而在一定的时间内，温度升高可使解吸加快，但会缩短SPME 萃取纤维的使用寿命，单因素实验结果表明5min就可以达到完全解吸。顶空固相微萃取与气质连用是一种快速、简单、需样品量少的测定疏毛吴茱萸挥发性成分的分析方法。本研究确定了疏毛吴茱萸挥发性成分的提取方法并进行GC-MS分析。优化后的固相微萃取主要条件是：萃取头PDMS 100 μm，萃取温度60℃,萃取时间30 min，解吸时间5 min。共鉴定了77种挥发性物质，其中大根香叶烯是含量最高的挥发性物质。

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