维药蜜膏剂蜂蜜炼蜜工艺前后5-羟甲基糠醛的含量变化研究

             作者：希尔艾力·吐尔逊，吐鲁洪·卡地尔，斯拉甫·艾白，祖里皮亚·塔来提

【摘要】  目的探讨维吾尔药传统蜜膏剂蜂蜜炼蜜工艺前后样品5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化，定量炼蜜工艺中5-HMF含量，从而为蜜膏剂蜂蜜炼蜜工艺前后样品5-HMF的含量规范化提供依据。方法采用Waters高效液相色谱仪测定①不同时间、不同温度蜂蜜炼蜜样品;②制剂中心炼蜜样品;③新疆各地州制剂中心炼蜜样品;④蜜膏剂炼蜜工艺自制不同时间点炼蜜等样品含量。结果温度80～130℃及时间0～90 min之间蜂蜜内5-HMF含量变化在15.21～2 507.97 mg·kg-1之间，制剂中心炼蜜样品及各地州制剂中心炼蜜前后样品5-HMF含量分别在2.4～102.8 mg·kg-1和1.68～154.86 mg·kg-1之间，蜜膏剂炼蜜工艺制备不同时间点炼蜜前后样品5-HMF含量在7.56～113.19 mg·kg-1 (R)和4.62～104.19 mg·kg-1 (Y)之间，5-HMF在0.006 4～0.448 μg(r=0.999 8，n=8)范围内5-HMF峰面积与进样量具有良好的线性关系，平均回收率为99.35 %(n=6)，RSD为1.67 %。结论蜂蜜炼蜜前后，加热使5-HMF含量显著提高，时间的延长也使样品中5-HMF含量增加，不同样品测定结果认为炼蜜温度以蜂蜜沸点为主，炼蜜时间为微沸20 min以内为主，蜜膏剂炼蜜时5-HMF含量在200 mg·kg-1范围之内，实验结果为制定蜜膏剂炼蜜工艺及质量标准提供了一定的依据，该方法测定5-HMF含量具有很有代表性，操作简单、准确的优点，炼蜜工艺质量控制显著。

【关键词】  维药蜜膏剂;5-HMF;炼蜜工艺;HPLC

　维吾尔药蜜膏剂是维吾尔医药独有的一个剂型，并且应用历史长达2500年，制备方便，口感好，营养价值高等特点是维吾尔医药常用的剂型，蜜膏剂是方中一种或几种药物研末，过箩，用炼蜜蜜成的膏状制剂，蜂蜜是维吾尔药蜜膏剂(Majunat)的主要辅料。蜂蜜在炼蜜时加热温度和加热时间是对蜂蜜质量有关的主要因素，5-羟甲基糖醛是控制蜂蜜加热温度和时间有关的主要指标。5-羟甲基糠醛(hydorxymethylfurfural，HMF)是一种蜂蜜加工过程的一个产物，新鲜蜂蜜中5-HMF含量很低。但在蜂蜜的热处理过程中，由于有酸类化合物的存在，蜂蜜中的糖类化合物会发生脱水反应而生成5-HMF，进而提高蜂蜜中的5-HMF 含量。维药蜜膏剂炼蜜方法是蜂蜜倒入瓷器或表面有油漆的容器内，微火加热，用木头勺去掉泡沫，全部泡沫过滤完后，冷却，即可应用。目前存在蜂蜜炼蜜的质量差异，同时导致炼蜜工艺的不统一、不规范，炼蜜中有害成分增加，影响维药的蜜膏剂的质量。维药蜜膏剂蜂蜜的炼蜜方法全凭操作者的经验，工艺参数未有定量化的研究，没有内在质量的规定，同时与中药丸剂的炼蜜方法也有区别，至今未见维药蜜膏剂炼蜜有关的文献报道。因此，本实验采用高效液相色谱仪对不同温度、不同时间31个炼蜜样品，不同地区、不同人、不同维吾尔医单位10批样品，一个单位不同批次10批样品以及实验室自制样品来源进行5-HMF含量定量分析，从而蜜膏剂蜂蜜炼蜜的工艺标准的规范化提供依据。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器Waters高效液相色谱仪，包括检测器：Waters2996二极管陈列检测器，泵Waters 600，Waters 717plus 自动进样器;色谱柱：Waters Symmetry C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)。BS110S电子天平(北京塞多利斯仪器系统有限公司);LS-3120超声波发生器(美国科学系统公司);油浴锅，电子温度计。

　　1.2试剂样品由新疆维吾尔医药研究所维药药剂学国家三级实验室制备;蜂蜜样品天山野花蜜简称R(批号：080510)(市售);新疆伊犁养蜂场蜂蜜简称Y(批号：080515)(新疆维吾尔自治区维吾尔医医院制剂中心提供样品);甲醇为色谱级，其它试剂均为分析纯;5-HMF对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号111626 - 20040)。

　　2方法与结果

　　2.1含量测定

　　2.1.1色谱条件色谱柱Waters Symmetry C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(10∶90);检测波长：285 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温25 ℃。理论塔板数按5-HMF峰计算应不低于3 500。

　　2.1.2对照品贮备液的制备精密称取5-HMF对照品20 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.8 mg的溶液。作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液ml置250 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每毫升含3.2 μg)。此溶液可在温度低于4℃冰箱中保存。

　　2.1.3供试品溶液的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。精密称取2.0 g，置25 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

　　2.1.4线性关系的考察 精密吸取上述5-MHF对照品溶液(每毫升含5-HMF 3.2 μg)2，20，40，60，80，100，120，140 μl注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得标准曲线方程为：Y = 20 528 X+4 220，r=0.999 8，结果表明，在0.0064～0.448 μg范围内，5-MHF峰面积与进样量具有良好的线性关系。

　　2.1.5精密度实验精密称取同一批蜂蜜样品(批号：080510)2.0 g，按供试品制备方法制备供试品溶液，取同一供试品溶液10μl，重复进样5次,记录5-HMF的峰面积值,计算RSD为0.84 %，表明精密度良好。

　　2.1.6稳定性实验精密称取同一批蜂蜜样品(批号：080510)按供试品制备方法制备供试品溶液，分别在同一天的不同时间进样5次(每隔2 h)在上述条件下依次测定。结果表明，8 h内供试品溶液基本稳定，5-MHF峰面积的RSD为2.04%。A.5-HMF对照品B.样品a.5-HMF图1高效液相色谱图

　　2.1.7重复性实验 精密称取同一批供试品6份(批号：080510)，按供试品制备方法制备供试品溶液，各取10 μl进样，测定含量，5-HMF峰面积的RSD为0.88 %。表明重复性良好。

　　2.1.8加样回收率实验取供试品(批号：080510)1.0 g，精密称定(n=6)，分别加入浓度为3.2 μg·ml-1的5-HMF 8 ml，按“2.1.3” 项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液及进样10 μl测定含量，计算回收率，结果见表1。结果表明本方法的回收率良好。表1加样回收率实验结果

　　2.2样品制备及含量测定

　　2.2.1蜂蜜不同温度、不同时间炼制样品的制备分别取蜂蜜500ml，倒入瓷器容器内，置于油浴锅加热，容器内蜂蜜分别温度达到80，90，100，110，120，130℃时恒温，每个温度分别加热时间为10，20，30，60，90 min，滤去蜂蜜白沫子，过滤，装入三角烧瓶内备用， HPLC法测定5-HMF含量。结果见表2。

　　2.2.2蜜膏剂用蜂蜜制剂中心炼蜜样品的制备新疆维吾尔自治区维吾尔医医院制剂中心为我区通过GPP认证，并生产规模及产品品种数量最全的制剂中心，按照本中心蜜膏剂炼蜜时不同批次取炼蜜前后样品，HPLC法测定5-HMF含量。结果见表3。