鸡血藤多糖提取工艺研究
作者：赖红芳，黄秀香，吴志鸿，韦瑞松
【摘要】 目的优化鸡血藤多糖的提取工艺。方法利用正交法研究微波和超声波辅助法提取鸡血藤多糖的最佳工艺。结果微波辅助提取的最优条件是：固液比为1∶40，提取时间为5 min，提取次数为4次，微波功率为80 W，多糖提取率为5.59%;超声波辅助提取的最优条件是：超声功率为90 W，超声时间为20 min，超声温度为60℃，固液比为1∶40，多糖提取率为8.49%。结论超声波提取法的提取得率比微波提取法的高，两者都具有提取速率快,能量消耗小等特点。
【关键词】 鸡血藤; 多糖; 微波辅助提取; 超声波辅助提取; 正交实验; 提取工艺
鸡血藤为豆科植物密花豆Tholobus suberectus Durm的干燥藤茎。其性温，味苦、甘，归肝肾经，有补血活血，通络的功效，用于月经不调，血虚萎黄，风湿痹痛等症[1]。鸡血藤中主要含有黄酮类、 酚类、三萜及甾醇等类化合物[2～6]，具有抗氧化、抗肿瘤、扩张血管、调节免疫等多种药理作用。同时鸡血藤还是广西特色妇科中药花红片的主味药材之一，具有重要的用途。
微波辅助提取技术[7]是中草药有效成分提取的一项新技术，具有以下优点：能量利用率高、省时、操作方便、可有效地保护药用植物中的有效成分等。超声波辅助法[8]也是近几年来用于提取天然产物有效成分的一项新技术,它具有快速、高效、安全、有效得率高、节能等特点。
通过查阅相关文献，关于鸡血藤多糖的提取、分离均未见相关报道。目前，提取多糖的方法不少，水浸提法是提取植物多糖常用的方法，但这种方法提取效率较低。为此，结合预实验结果，本实验研究了微波和超声波在鸡血藤多糖提取中应用的可行性,用正交法对其工艺进行优化，寻求最佳的提取工艺条件，并对两种提取方法进行比较，为研究鸡血藤多糖及其药理作用提供了理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器分析天平[AE240S,梅特勒-托利多(上海)有限公司];UV-2102PCS型紫外分光光度计(尤尼科仪器有限公司);QW-HU微波萃取器(广州科威微波能有限公司);KQ2200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);RE-52A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 试剂硫酸、苯酚、95%的乙醇均为分析纯，葡萄糖对照品(天津市化学试剂三厂，AR)，实验用水为蒸馏水。
1.3 材料鸡血藤购于宜州药材市场，经河池学院邓晰朝副教授鉴定为豆科植物密花豆Tholobus suberectus Durm 的干燥藤茎鸡血藤。
2 方法
2.1 原料的预处理将购买回来的鸡血藤块状物用微型植物粉碎机粉碎，过20目筛，用无水乙醇浸泡两次脱脂，所得残渣置烘干箱中用60℃烘干，烘干的残渣用于多糖的提取。
2.2 鸡血藤多糖微波辅助提取工艺准确称取2.000 g 处理过的鸡血藤粉末, 置于250 ml锥形瓶中，按照微波提取的设定条件进行微波提取。将提取液过滤, 以上述条件再进行提取，减压抽滤，并将两次滤液用旋转蒸发仪浓缩小于50 ml，将浓缩液移入50 ml的容量瓶，定容，摇匀。再取2 ml溶液再定容成50 ml，摇匀，即得到鸡血藤多糖溶液。
2.3 鸡血藤多糖超声波辅助提取工艺精密称取2.000 g处理过的鸡血藤粉末，置于250 ml圆底烧瓶中，按照超声波提取的设定条件进行超声波提取。将提取液过滤, 以上述条件再进行提取，减压抽滤，并将两次滤液用旋转蒸发仪浓缩小于50 ml，将浓缩液移入50 ml的容量瓶，定容，摇匀。再取2 ml溶液再定容成50 ml，摇匀，即得到鸡血藤多糖溶液。
2.4 鸡血藤多糖的测定-硫酸-苯酚法[9]
2.4.1 葡萄糖标准曲线的制作准确称取105℃下干燥至恒重的标准葡萄糖20.00 mg置于100 ml容量瓶中定容。即可得到浓度为0.20 mg/ml的葡萄糖标准溶液。从已配制的0.20 mg/ ml的葡萄糖标准溶液中分别吸取2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0 ml于50 ml容量瓶中，定容摇匀。再分别量取2.0 ml于比色管中，加入6%苯酚溶液1.0 ml和浓硫酸5.0 ml定容成10 ml，静置10 min，摇匀，室温放置20 min后于490 nm测定吸光度。用蒸馏水加入6%苯酚溶液1.0 ml和浓硫酸5.0 ml定容成10 ml，同上述操作，作为空白液。以横坐标为葡萄糖浓度(mg/ ml)，纵坐标为吸光度，得标准曲线。测定结果的回归方程为A=0.043 9X+0.012 1，r=0.998 8。
2.4.2 鸡血藤粗多糖的提取与精制[10]称取预处理过的鸡血藤粉末 50 g，加入 500 ml水 90℃ 水浴提取 2 次，水浴 2 h/次，合并二次提取液。用旋转蒸发仪减压浓缩至 200 ml后，加入少量活性炭进行脱色，过滤 ，滤液加 5 倍量 95% 乙醇混合放置过夜，抽滤后的沉淀用 100 ml水溶解重复醇沉1次。过滤沉淀用 95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，在烘箱中 60℃ 烘干，即得鸡血藤粗多糖。
2.4.3 换算因子的测定[11]精密称取鸡血藤粗多糖30.00 mg于100 ml容量瓶中，加少量蒸馏水溶解井稀释至刻度，摇匀。精密吸取配置好的多糖溶液4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 ml于50 ml容量瓶中，从中分别吸取2 ml于比色管中，再加入1 ml新配置的6%苯酚和5 ml浓硫酸，振荡，静置30 min后测量其吸光度。按下式计算换算因子f：f =W/(C·D)式中:W-称取多糖的质量(μg) ;C-多糖中葡萄糖的质量浓度(μg·ml-1);D-鸡血藤多糖的稀释倍数。测得f=2.1。
2.4.4 多糖含量的测定精确量取鸡血藤多糖溶液2 ml置于50 ml比色管中，同标准曲线操作，测吸光度，根据回归方程算出样品溶液中葡萄糖的浓度(C)，按下式计算样品中鸡血藤多糖含量。多糖提取率(%)=CDf /W×100%式中：C-鸡血藤多糖溶液中葡萄糖的质量浓度(μg· ml-1);D-多糖溶液的稀释倍数;f-换算因子;W-鸡血藤样品的质量(μg)。