梓醇对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用及其抗氧化机制研究

【摘要】  目的观察梓醇对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用, 并探讨其抗氧化作用。方法腹腔注射阿霉素(ADR)建立大鼠心肌损伤模型，给于梓醇(2，5，10 mg/kg)治疗，测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH ) ,谷草转氨酶(AST) , 肌酸激酶(CK) 的活性, 心肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD) , 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 的活性以及脂质过氧化物(MDA)含量。结果梓醇可明显减少ADR引起的LDH、AST、CK释放, 减轻心肌损伤，增强GSH- Px、SOD 活力，降低MDA含量，其疗效呈一定剂量依赖性。结论梓醇对大鼠阿霉素心肌损伤有明显疗效,其机制可能与其清除氧自由基、抑制氧化应激等作用有关。

【关键词】  梓醇; 心肌损伤; 氧自由基; 抗氧化; 阿霉素

　阿霉素(adriamycin, ADR ) 是疗效肯定的抗肿瘤药, 但临床和实验发现长期使用可产生严重的心脏毒性, 其机制之一是阿霉素产生自由基导致心肌损伤[1]。梓醇(catalpol)为一种环烯醚萜类小分子化合物，富含于中药地黄中，动物实验证实其具有拮抗细胞凋亡、抗炎、抗氧化应激等多种生物学作用[2～5]。已有研究表明梓醇可抑制氧化应激引起的PC12细胞损伤，对神经系统具有保护作用[6]，但梓醇对氧化应激引起的心脏损伤未见报道。鉴于阿霉素的毒性是其产生自由基致使心肌损伤这一机制, 本实验研究梓醇通过其抗氧化作用对阿霉素心肌病的保护作用。通过测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH) ,谷草转氨酶(AST), 肌酸激酶(CK)的活性, 心肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及脂质过氧化物(MDA)含量, 以探讨梓醇对ADR 所致大鼠心脏毒性的保护作用，从而进一步证实梓醇通过清除和抑制自由基而保护心肌组织。

　　1 材料

　　梓醇(catalpol)购自中国药品生物制品检定所;SD 大鼠由辽宁医学院动物中心提供, 雄雌各半, 体质量(220±20)g;ADR 为浙江海正药业股份有限公司生产, 用前生理盐水配成所需浓度。LDH，AST，CK试剂盒由北京中生试剂厂提供, 在CB171, TRACE 半自动生化分析仪中检测。SOD，GSH-Px及MDA测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;蛋白质测定用考马斯亮蓝法, 所用仪器为日立721型分光光度计。

　　2 方法

　　2.1 给药方案大鼠50只, 随机分为5组，每组10只。正常对照组, ip等体积生理盐水;ADR组:腹腔注射ADR，每次2.5 mg/ kg，4次/周，连续2周，累积剂量为20 mg/ kg[7];其余3 组为ADR+梓醇合用组：ADR 剂量同ADR组，ADR + 梓醇 2，5，10 mg/kg组。梓醇按上述剂量, 用生理盐水配制相应浓度，于给予ADR前1周给药，每天1次ip给药，共计20d。

　　2.2 血清中LDH、AST、CK的测定于最后一次给梓醇24 h 后，实验鼠用氨基甲酸乙酯麻醉(1g/kg)，颈动脉取血，分离血清，冰箱保存, 24 h 内于自动生化分析仪上测定LDH, AST , CK活性。

　　2.3 心肌中SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的测定采血后大鼠解剖，立即取心尖部肌肉，以0.15 mol/L KCl 为介质，于玻璃研磨器中制成10%匀浆，冷冻离心(0～4℃, 4 000 r/min) 10 min，取上清液测定蛋白质后按试剂盒说明分别测定SOD活性、GSH-Px活性及MDA含量。

　　2.4 统计学分析数据均以±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析及LSD法进行统计学处理，认为P<0.05有显著性差异，P<0.01有非常显著性差异。

　　3 结果

　　3.1 梓醇对心肌LDH、AST、CK活性影响见表1。显示ADR 组LDH、A ST、CK 活性均比正常对照组高(P<0.01)，说明该剂量已对大鼠心脏构成损伤，“心肌酶谱”大量外流。梓醇干预后“心肌酶谱”逐渐回落，存在剂量依赖性，显示了梓醇保护心脏的保护作用　表1 梓醇对给予ADR 后大鼠血清中LDH、AST、CK 活性的影响

　　3.2 梓醇对心肌SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的影响见表2。显示ADR组SOD、GSH-Px 活性下降(P<0.01)，MDA含量上升(P<0.01)，说明ADR通过生物转化生成超生理量的自由基，消耗了自由基清除酶，使酶含量降低，自由基清除障碍，过氧化反应增强，攻击膜结构，产生大量的MDA，因而其含量上升。当动物给予梓醇后情况向相反方向转化, SOD、GSH-Px 逐渐上升，MDA 含量回落，说明梓醇通过清除自由基，抑制过氧化反应，从而提高自由基清除酶活性。