不同产地翼首草中总皂苷的含量比较

                作者：杨荣平，向春艳，张小梅，秦伟瀚，励娜

【摘要】  目的比较不同产地翼首草中总皂苷的含量。方法采用紫外分光光度法，以齐墩果酸为对照品，香草醛冰醋酸和硫酸溶液为显色剂，测定波长为535 nm。结果在25.35～45.63 μg范围内，齐墩果酸的吸光度与含量线性关系良好,相关系数r=0.999 9。平均回收率为91.94%，RSD为0.87%(n=9)。结论不同产地翼首草中总皂苷含量差异不大，但根中总皂苷的含量可能比全草中高。

【关键词】  翼首草; 总皂苷; 紫外分光光度法; 含量测定

　　翼首草为川续断科植物匙叶翼首草Pterocephalus hookeri (C. B. Clarke) Hoeck的干燥全草，是藏医常用植物药，主产于西藏、青海、甘肃、四川等地。具有解毒除瘟，清热止痢，祛风通痹的功效。其主要成分为熊果酸(又名乌索酸，ursolic acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)等三萜皂苷类化合物[1]，此外还含有生物碱、多糖等化学成分。本实验采用紫外分光光度法，详细考察了影响总皂苷提取的6个主要因素，确定了最佳制备方法，并对13批不同主产地和不同药用部位的翼首草中的总皂苷含量进行了比较。

　　1 仪器与试药

　　UV-1601紫外-可见分光光度仪(日本岛津);BS 224S 电子天平(十万分之一，德国赛多利斯);AEG-45SM电子分析天平(日本岛津);HH-S型水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742-200516);齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505)，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每毫升含齐墩果酸0.845 mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2 供试品溶液制备方法的考察

　　2.2.1 提取溶媒和水解方式的考察[2]取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇30 ml，甲醇30 ml，再加浓盐酸3 ml，于80℃水浴回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10 ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，得供试品溶液A，B。

　　取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇30 ml，甲醇30 ml，于80℃回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣分别加HCl(3→10)10 ml水解2 h,按供试品溶液A制备，从“用醋酸乙酯”起依法操作，得供试品溶液C，D。

　　精密吸取供试品溶液A、B、C、D各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07%，5.38%，1.47%，1.69%。结果表明，提取溶媒为无水乙醇，加3ml浓盐酸，回流提取和水解同步进行时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.2 无水乙醇用量的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇10，20，30，40 ml，浓盐酸3 ml，于80℃回流2h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.69%，5.83%，6.06%，5.48%。结果表明，无水乙醇用量为30 ml时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.3 提取温度的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，分别于80，90，100℃水浴回流2h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07%，6.31%，6.20%。结果表明，提取温度为90℃时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.4 水解时间的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃分别回流1，2，3，4 h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.84%，6.30%，6.59%，6.41%。结果表明，水解时间为3h时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.5 萃取次数的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，分别用醋酸乙酯振摇提取2，3，4，5次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.85%，6.26%，6.60%，6.63%。结果表明，振摇提取4次和5次所得总皂苷含量相差不大，因此选择振摇提取4次。

　　2.2.6 药材粉碎度的考察 取翼首草粉末(分别过2，3，4，5号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量为6.59%，6.37%，6.31%，6.30%。结果表明，药材粉碎过2号筛所得总皂苷含量最高。

　　总结供试品溶液制备方法：取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，每次10 ml，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10 ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。

　　2.3 标准曲线的制备精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30，36，42，48，54 μl于具塞试管中，水浴蒸干，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.6 ml，70%硫酸溶液5 ml，摇匀，于70℃水浴加热40 min，取出，冰水浴冷却1 h，室温放置1 h，以相应试剂为空白，于535nm处测定吸光度。以齐墩果酸的含量(μg)为横坐标(X)、齐墩果酸吸光度(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算得直线回归方程为：Y=0.014 1X+0.042 0(r=0.999 9)。结果表明，齐墩果酸在25.35～45.63 μg范围内，线性关系良好。