足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺一氧化氮的影响

          作者：庞军，甘炜，唐宏亮，芦玥，莫巧明，刘振威，王开龙，李建敏

【摘要】  目的为研究推拿抗衰老的机理，采用推拿及艾灸亚急性衰老大鼠足少阳胆经，研究对大鼠胸腺指数及胸腺NO、SOD的影响。方法利用D-半乳糖制作亚急性衰老大鼠模型。将32只普通级SD大鼠随机平均分为4组：空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组。采用硝酸还原酶法测定大鼠胸腺NO、SOD的含量并测定大鼠胸腺指数。结果推拿组和艾灸组大鼠胸腺指数较衰老模型组高;衰老模型组胸腺NO含量较空白对照组明显上升，胸腺SOD含量较空白对照组明显降低;推拿组与艾灸组胸腺NO含量较衰老模型组明显下降，胸腺SOD含量较衰老模型组明显升高。结论NO与衰老之间有一定的相关性，衰老时胸腺NO浓度升高，推拿具有延缓衰老的作用。

【关键词】  推拿; 衰老; 大鼠; 胸腺一氧化氮

　过去研究的较早、较多的是自由基对机体的不利影响，认为自由基是有害无益的，近10年来的众多研究证明，自由基对健康的作用具有双重性。生物体内的氧自由基有其特殊的生理意义，低浓度自由基为维持健康所必须，过量自由基则对于不饱和脂肪酸、蛋白质分子、核酸分子、细胞外可溶性成分以及膜脂质等具有十分有害的破坏性作用。近年来，人们逐渐认识到，除氧自由基外，体内还存在另一种非常重要的一氧化氮(NO)自由基，其在体内发生自由基反应，在机体的衰老变化中起一定作用，若体内NO生成不足，则NO介导的生理过程无法完成，而过量的NO则会通过与蛋白质、脂肪、核酸生物分子的相互作用损伤机体组织，破坏细胞和机体稳态，对机体产生毒性。在以往的研究报道中，鲜有推拿抗衰老的文章，更未见推拿延缓衰老研究涉及此方面的报道。本研究通过对亚急性衰老大鼠进行足少阳胆经推拿及艾灸，观察干预前后各组大鼠胸腺NO含量的变化，探讨报道推拿抗衰老的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物分组与造模动物选用广西中医学院实验动物中心提供的SD大鼠32只，普通级，12周龄，体质量(220±20)g，雌雄各半，实验条件下，饲养适应一周后，称重，随机分为4组，即：空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组，每组8只，进行编号。各组大鼠苦味酸标记后，同环境雌雄分笼饲养，每4只为1笼，正常喂水及同等定量给食。造模采用D-半乳糖颈背部皮下注射致亚急性衰老大鼠模型，用生理盐水稀释成D-半乳糖溶液，按照125mg/kg的比例颈背部皮下注射，定期根据大鼠体质量变化响应调整剂量，造模持续到实验结束。空白对照组不造模。

　　1.2 治疗方法自造模开始，推拿组根据《实验针灸学》[1]取大鼠双侧环跳穴、阳陵泉穴及两穴之间的区域。操作者事先在电子天平上持自制按摩棒练习至每次按压力度为220～260 g，助手抓取固定大鼠，待大鼠安静下来后，用自制按摩棒以2.156～2.548 N的力度按压所选定区域，按压方法为按5 s，松3 s，每侧选取区域每次操作时间为90 s。艾灸组取大鼠双侧环跳穴、阳陵泉穴及两穴之间的区域，局部皮肤剪去被毛，抓取方法同推拿组。艾灸操作者待大鼠安静下来后，一手持水温计使其底端的液泡位于选取区域旁边，另一手持自制香烟型艾条(直径约0.8 cm)，距穴位2 cm处悬灸，待水温计读数为40～42℃时开始计时，每侧选取区域每次操作时间为90 s。空白对照组和衰老模型组不进行推拿和艾灸治疗，但亦经过抓取、固定等过程。以上各组动物每周连续处理6 d，休息1d。实验历经12周。

　　1.3 指标的测定实验结束，空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组所有大鼠采用1%的戊巴比妥钠1～2 ml腹腔注射麻醉大鼠，固定，取胸腺剥离，生理盐水冲洗，滤纸吸干，电子天平称重，胸腺重量(mg)除以体质量(g)为胸腺指数。剪下一叶胸腺，加入预冷的生理盐水制成10%组织匀浆，检测胸腺中NO浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活力，具体步骤均按测试盒说明进行(均由南京建成生物工程公司提供);另一叶胸腺迅速投入4%多聚甲醛中固定4～6 h，梯度酒精由低到高脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋，组织切片于光学显微镜下镜检，观察胸腺组织细胞形态学的变化。

　　1.4 数据处理所有实验数据均采用SPSS11.0版软件进行处理、分析。计量资料数据以±s表示，组间比较，方差齐者采用t检验，方差不齐者采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 胸腺指数结果见表1表1 足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺指数的影响表1结果显示，衰老模型组与空白对照组比较，胸腺指数呈下降趋势，推拿组、艾灸组胸腺指数低于空白对照组，高于衰老模型组。但各组大鼠胸腺、脾脏指数差异均无统计学意义(P﹥0.01)。说明大鼠在持续注射D-半乳糖后胸腺有一定程度的萎缩，推拿和艾灸都能提升胸腺指数，延缓胸腺萎缩。

　　2.2 胸腺SOD、NO的变化结果见表2。

　　由表2可知，衰老模型组胸腺NO与空白对照组、推拿组、艾灸组比较明显升高(P﹤0.05)，胸腺SOD明显降低(P﹤0.05)，说明衰老模型组胸腺清除自由基能力降低，自由基对机体损害作用增强。推拿组和艾灸组胸腺SOD、NO与空白对照组比较有明显的升高(P﹤0.05)，说明推拿和艾灸能加强机体内源性抗氧化能力，增强机体代谢自由基的能力，使机体的氧化/抗氧化系统的状态趋向于空白对照组。推拿组与艾灸组胸腺SOD、NO的值之间无明显差异(P﹥0.05)，说明推拿和艾灸这两种方法在影响胸腺SOD、NO方面没有显著差别。

　　表2 足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺SOD、NO的影响(±s)

　　2.3 胸腺组织细胞形态学的变化

　　2.3.1 空白对照组皮质与髓质分界清晰，皮质染色深，胸腺细胞排列整齐，网状细胞较少，髓质染色浅，淋巴细胞较少而稀，上皮网状细胞较多而显著，可见胸腺小体。

　　2.3.2 衰老模型组胸腺组织中脂肪明显增加，局部出现纤维化，细胞排列紊乱，皮质与髓质界线难于区分，皮质较薄，胸腺细胞明显减少。

　　2.3.3 推拿组胸腺组织接近于空白对照组，皮质与髓质之间区分明显，皮质较厚，胸腺细胞数量明显增加。

　　2.3.4 艾灸组胸腺组织接近于空白对照组，皮质与髓质之间区分明显，皮质较厚，胸腺细胞数量明显增加。