三七渗漉提取工艺的研究
作者：谭朝阳,尤昭玲,袁宏佳
【摘要】 目的 优选三七的最佳渗漉提取工艺。方法 采用正交试验法,以三七总皂苷和三七总氨基酸为考察指标,对影响三七渗漉提取工艺的因素进行研究。结果 乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度均对三七提取工艺有显著影响。结论 三七的最佳渗漉提取工艺为用12倍量50%乙醇,渗漉速度为1～3 mL/(min·kg)。
【关键词】 正交试验；三七；提取工艺；三七总皂苷；三七素·
Abstract：Objective To optimize the conditions for the percolation extraction process of Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen. Methods Conditions for the percolation were studied by orthogonal experimental design as guided by the contents of total notoginseng saponin and total amino acids. Results The percolate rate, concentration and quantity of alcohol had significant effects on the process. Conclusion The optimum condition for the extraction of Panax notoginseng was adding 12 times amount of 50% alcohol and percolating at a rate of 1～3 mL/(min·kg).
Key words：orthogonal experiment；Panax Notoginseng (Burk.) F.H.Chen；extraction process；notoginseng saponin；dencichine
三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen为五加科人参属植物,药用主要取其根,具有散瘀止血、消肿定痛的功效。有关三七的提取研究方法报道较多,但多以三七皂苷为考察指标,而对其止血活性成分三七素未涉及。本试验以三七总皂苷及含三七素的总氨基酸为考察指标,对三七渗漉提取工艺进行研究,为三七有效成分的提取及最佳工艺条件的优选提供依据。
1 仪器与试药
TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。三七皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号703-200201)；三七购自湖南三湘饮片实业有限公司。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 三七总皂苷测定方法
2.1.1 标准曲线的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。精密量取对照品溶液10、20、40、60、80、100 μL,分别置10 mL具塞试管中,置水浴中挥干甲醇,加入新制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL,于60 ℃水浴中保温15 min,立即置冰水中冷却5 min,加冰醋酸5 mL,摇匀,放置10 min,以相应试剂为空白,照分光光度法于560 nm波长处立即测定吸收度。以浓度为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线。
2.1.2 样品测定 精密吸取各三七提取液5 mL,加水10 mL,置水浴上蒸去乙醇,移置分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取4次,每次10 mL。合并正丁醇提取液,置水浴上蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,移置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取10 μL,照上述“置10 mL具塞试管中”起,依法测定吸收度,计算总皂苷含量。
2.2 三七总氨基酸测定方法
精密量取各三七提取液10 mL,加水20 mL,加2滴酚酞指示剂,用0.5 mol/L氢氧化钠滴定液滴定至微红色,精密加入10 mL中性甲醛溶液,放置片刻,用0.05 mol/L氢氧化钠滴定液滴定至微红色,并用空白试验校正,每1 mL氢氧化钠滴定液相当于6.558 mg氨基酸(以亮氨酸计)。
2.3 三七渗漉提取条件的优化
2.3.1 试验设计 以乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度为考察因素,每个因素各取3个水平(见表1) 表1试验因素水平表,在平行操作条件下,按L9(34)表做正交试验,以三七总皂苷、三七总氨基酸含量为评价指标,筛选乙醇提取的最佳工艺条件。
2.3.2 试验方法 每份取三七20 g,粉碎成粗颗粒,用相应浓度的乙醇浸泡过夜,按L9(34)正交表安排试验,收集渗漉液,浓缩至100 mL。按“2.1”和“2.2”项下方法分别测定三七总皂苷和三七总氨基酸含量,结果见表2表2正交试验方案与结果,方差分析结果见表3、表4。表3三七总皂苷含量方差分析表 注：F0.05(2,2)＝19,F0.01(2,2)＝99 表4三七总氨基酸含量方差分析表 注：F0.05(2,2)＝19,F0.01(2,2)＝99