星点设计-效应面法优选黄芩提取工艺的研究
作者：蒋荣珍,欧阳小光,黄斌,罗国琼
【摘要】 目的 优选黄芩的最佳提取工艺条件。方法 以黄芩苷提取率为指标,乙醇浓度、回流时间及溶剂量为考察因素,采用星点设计-效应面优化法优选提取工艺条件,并进行预测分析。结果 最优提取工艺条件为乙醇浓度45%、提取时间120 min、溶剂用量4倍,二项式拟和复合相关系数较高r＝0.975 9,提取率预测值与理论值偏差率为-3.86%。结论 星点设计-效应面法优选黄芩提取工艺方法简单、精密度高、预测性好。
【关键词】 星点设计-效应面法；黄芩；黄芩苷
Abstract：Objective To obtain the optimal extraction process of Prunella vulgaris L. Methods With the dependent variables of ethanol concentration, reflux time and solvent fold, and dependent variable of the amount of baicalin, Central Composite Design/Response Surface Method was applied to optimize the reflux extraction process. Predictions were carried out by comparing the observed and predicted values. Results The optimum conditions of extraction process were 45% ethanol, 2 hours for reflux, 4 fold sovent. Regression coefficients of binomial fitting complex model was 0.9759. Bias between observed values and predicted values was -3.86%. Conclusion The optimum model is simple, precise and highly predictive.
Key words：Central Composite Design/Response Surface Method；Radix Scutellariae；baicalin
星点设计由于其精度高、预测值接近真实值,是国外常用的试验设计方法。近年来,国内仅有少数学者采用星点设计-效应面法替代常用的正交或均匀设计,并应用于药学相关领域。本试验引入星点设计方法,结合效应面法优选黄芩中有效成分黄芩苷回流提取工艺,旨在优化回流提取工艺的同时,为探讨星点设计-效应面法应用于中药提取工艺的可行性提供依据。
1 仪器与试药
Agilent1100系列高效液相色谱仪(VWD检测器、agilent 10.02色谱工作站)；电子分析天平(Sartorius,德国)。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110709- 200304,供含量测定用)；黄芩(购自广西南宁医药公司)。乙腈(色谱纯,美国Fisher),磷酸(色谱纯,天津四友),其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芩苷含量测定
2.1.1 色谱条件
色谱柱为Lichrospher-C18(5 μm,4.6×250 mm)；流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.2)；流速1 mL/min；柱温25 ℃；检测波长280 nm。。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品适量,置10 mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,制成含黄芩苷50 μg/mL的溶液,作为对照品溶液。
2.1.3 样品溶液的制备
精密吸取提取液1.0 mL,置10 mL棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,10 000 r/min离心10 min,即得。
2.1.4 线性及范围
吸取黄芩苷对照品溶液(50 μg/mL)1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 μL,分别注入色谱仪,以峰面积为纵坐标,黄芩苷进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝3.933 3＋2 681.818 2X,相关系数r＝0.999 9,线性范围为0.050～0.750 μg。
2.1.5 精密度试验
精密吸取同一样品溶液10 μL,重复测定6次,黄芩苷峰面积RSD＝1.06%。
2.1.6 重复性试验
精密量取同一提取液6份,按“2.1.3”项下方法制备,分别测定,进样10 μL,各样品黄芩苷浓度RSD＝1.24%。
2.1.7 稳定性试验
精密吸取提取液1.0 mL,按“2.1.3”项下方法制备,分别在0、2、4、8、12 h测定,黄芩苷峰面积RSD＝1.73%。
2.1.8 加样回收率考察
精密吸取已知含量的提取液样品1.0 mL,共6份,分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.73 mg/mL) 2.0 mL,按“2.1.3”项下方法操作。吸取10 μL,注入色谱仪,测定。平均回收率为98.3%,RSD＝2.50%。