HPLC测定结核灵片中狼毒乙素的含量

　　2.8  回收率试验
    
　　取同一批结核灵片(批号070701) 粉末1 g，精密称定，共6份，分别置50 mL量瓶中，精密加入狼毒乙素对照品储备液（121.3 μg/mL）2 mL，按“2.1”项下方法制备溶液，并进样测定，计算平均回收率为100.20%, RSD为0.29%（n=6）。见表1。
 
　　A.狼毒乙素对照品; B.供试品; C.阴性对照样品

　　图1  结核灵片高效液相色谱图（略）

　　Figure 1  HPLC chromatograms of Zieheling pills

　　表1  狼毒乙素加样回收率试验结果（略）

　　Table 1  Results of  recovery test

　　2.9  含量测定及含量限度
   
　　分别精密称定6批结核灵片各3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，结果见表2。因狼毒是毒性中药材，有必要确定含量限度，建议每片结核灵片含狼毒乙素为0.028 8 ～0.043 2 mg/片。

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　Table 2  Assay results of  samples
　　
　　3  讨论

　　3.1  狼毒药材的化学成分主要包括黄酮、二萜、香豆素类等［2］，其中狼毒乙素对结核杆菌有明显的抑制作用［3］，因此选择狼毒乙素作为结核灵片含量测定的指标成分。

　　3.2  曾以甲醇作溶剂，但提取效果不理想；也尝试用流动相作溶剂，提取效果理想，但狼毒乙素受结核灵片中的其他成分干扰，达不到良好的分离效果。

　　3.3  实验中还考察了不同柱温(10、20、30、40 ℃)对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响无明显区别，因此确定以柱温为室温。

【参考文献】
  　　［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂（第十三册）［M］.北京：化学工业出版社，1997:160.

　　［2］ 董钰明，李海燕. 中药狼毒化学成分、药理作用及有效成分含量测定的研究概况［J/OL］. 中国科技论文在线，www.paper.edu.cn.

　　［3］ 赵奎君，徐国钧，金蓉鸾，等.HPLC法测定月腺大戟根中狼毒甲素及狼毒乙素的含量［J］.中草药，1995，26(2):66-67.