益肾养元合剂质量标准研究
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱： Agilent Eclipse XDBC18 （4.6 mm×150 mm,5 μm），流动相：甲醇4%(体积分数)醋酸溶液（体积比20∶80）；流速：1.0 mL/min，检测波长：320 nm，柱温：室温，进样量：20 μL。理论塔板数以二苯乙烯苷峰计应不低于2 000。
3.2 溶液的制备
3.2.1 对照品溶液的制备 精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加流动相至刻度，即得。
3.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
3.2.3 阴性对照溶液的制备 取不含何首乌的阴性样品，按“3.2.2”项方法制成阴性对照溶液。
3.3 专属性试验
分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性对照对二苯乙烯苷的测定无干扰，说明方法专属性强。见图3。
A.对照品； B.样品； C.阴性
图3 HPLC图（略）
Figure 3 HPLC chromatograms
3.4 线性关系的考察
精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为1.291、2.581、5.163、10.325、20.650、41.300 μg/mL的溶液，分别吸取20 μL，按上述色谱条件测定，以峰面积(A)对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=83.0053ρ+2.6012，表明二苯乙烯苷进样量在25.82～826 μg范围内呈良好的线性关系（r＝1.000 0）。
3.5 稳定性试验
精密吸取同一批供试品溶液各20 μL，按上述色谱条件，每隔1 h测1次峰面积，结果其RSD值为1.20%，表明二苯乙烯苷在7 h内稳定。
3.6 重复性试验
取同一批样品（批号：F03001B）共6份，分别按上述方法测定二苯乙烯苷的含量，结果其RSD值为0.25%,表明方法重现性良好。
3.7 回收率试验
分别精密吸取已知含量的本品1批（批号：F03001B，含量为0.215 3 mg/mL）1 mL 6份，分别精密加入二苯乙烯苷对照品溶液（0.211 8 mg/mL）1 mL，按“3.2.2”项方法制得供试品溶液，测定二苯乙烯苷含量，计算平均回收率为102.0%，RSD为0.83%。结果见表1。
3.8 样品的测定
取3批样品（批号：C08001A、C08002A、C08003A），分别按“3.2.2”项方法进行测定，结果样品中二苯乙烯苷的含量分别为：0.182 1、0.196 8、0.154 7 mg/mL。
4 讨论
4.1 本文采用的方法尽可能与药典中相应的药材薄层鉴别方法一致，并依据产品的实际情况进行了展开条件的优化。何首乌采用药典中的苯乙醇展开系统时，背景影响大，特征荧光斑点易被掩盖；经摸索发现，采用本文的方法，荧光斑点清晰，阴性无干扰。根据文献［2，3］中的狗脊药材的鉴别方法操作，发现特征斑点荧光较弱，易受干扰，经摸索发现，用质量分数5%NaOH乙醇溶液进行显色，其特征点荧光强度加强，利于观察，较原方法提高了特征斑点检出的灵敏度。
表1 回收率试验结果（略）
Table 1 Recovery results
4.2 薄层色谱法鉴别时,分别用自制板及预制板同时展开、不同的温度或湿度环境下展开，层析结果表明：自制板与预制板的层析结果差别无显著性，不同的温度和湿度的环境下展开均可检出何首乌、金樱子、狗脊等药材特征斑点。本方法采用同一供试品溶液进行了4种药材的薄层鉴别（补骨脂的鉴别条件与药典一致，本文不再报道），操作非常简便。
4.3 由于二苯乙烯苷化学性质不稳定，需避光操作，原标准采用萃取和蒸干的操作［3］ ，操作步骤多，操作过程中二苯乙烯苷易损失，本文采用直接稀释法进行样品处理，操作简单、快速、准确。曾使用流动相甲醇水（体积比25∶75）［4］，但有一小峰与主峰分离较差，采用本文所述的流动相，分离度符合药典要求。
4.4 曾考察了Dikma kromasil、Apollo C18和Agilent Eclipse XDBC18 3种色谱柱对同一批号样品（批号：F03001B）的影响,结果3种色谱柱的测定结果基本一致，表明本法的耐用性好。
【参考文献】
［1］ WS3－B－3971－98.国家药品标准:卫生部药品标准第二十册［S］.1998:290.
［2］ 李光喜.首乌补汁的薄层色谱鉴别［J］.广东药学院学报，2003，19（1）:10-11.
［3］ 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编(内科气血津液分册)［M］.北京：化学工业出版社，2002：573.
［4］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［M］．北京：化学工业出版社，2005．122.