HPLC法测定雪隆胶囊中东莨菪素和伞形花内酯的含量
作者：杨燕霞 白杨 刘西京 贾强
【摘要】 目的 测定雪隆胶囊中东莨菪内酯和伞型花内酯的含量。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm），流动相为甲醇四氢呋喃水溶液进行梯度洗脱，检测波长为346 nm。 结果 东莨菪内酯平均回收率为99.3％，RSD为0.81％，伞型花内酯的平均回收率为99. 6％，RSD为1.03％。结论 本法简便、准确、精密度高、重现性好,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 雪隆胶囊 东莨菪内酯 伞形花内酯 高效液相色谱法
雪隆胶囊由水母雪莲花和塞隆骨组成,具有散寒除湿、补益肝肾的功效，主治骨关节炎、寒湿阻络、肝肾不足症、关节疼痛、肿胀、屈伸不利、遇寒加重和腰膝酸软等, 收载于卫生部部颁标准。方中的雪莲花为常用藏药，塞隆骨为国家一类动物药材。文献［1］对雪莲进行了薄层研究，并用分光光度法测定了塞隆骨中L羟脯氨酸的含量。本品中的水母雪莲有清热解毒、消肿止痛的功效，其中含有黄酮、香豆素类等化合物。水母雪莲的超临界提取物中的主要成分为东莨菪内酯、伞形花内酯［2］，体外试验证明，该提取物具有较好的抑菌、抗菌活性作用，对小鼠耳肿胀抗炎活性显著，同时还具有显著的抗滴虫作用［3］。为进一步的提高该制剂的质量，本实验采用高效液相法测定其中主药水母雪莲中的有效成分东莨菪素和伞形花内酯的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪LC210AT泵、SPD2M10A二极阵列检测器、Class2VP VER6. 1工作站(日本岛津)，N1000旋转蒸发仪（日本东京理化EYELA公司），BP211D、ALC210.4电子分析天平（瑞士沙多利斯Sartorius公司），T660H超声波清洗器（德国埃玛Elma公司）。
1.2 试药
东莨菪素和伞形花内酯对照品(购自美国sigma公司，纯度≥96％)；雪隆胶囊(三河方大药业有限责任公司生产,批号050901、050910、050913)；塞隆骨（Osteon myospalacem Baileyi）购自广东清平市场，经深圳市药品检验所刘尧执业药师鉴定；甲醇、乙腈为色谱纯；乙醇为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm, 5 μm）为色谱柱；以甲醇四氢呋喃水溶液(四氢呋喃∶水＝1∶13，用醋酸调pH至2.5)为流动相，梯度洗脱：0→8→13→33→43 min，甲醇（体积比）：40％→40％→60％→100％→100％，四氢呋喃水溶液（体积比）：60％→60％→40％→0％→0%；检测波长：346 nm；柱温：室温；流速：1.0 mL/min。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取东莨菪素对照品适量,加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液,即得。精密称取伞形花内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入甲醇25 mL,称定重量,超声（220 V，50 Hz）处理40 min,滤过，合并滤液，减压回收甲醇至近干，残渣用甲醇定量转移至10 mL量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀。滤过，精密吸取续滤液1 mL，用甲醇定容至10 mL量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性关系考察
取东莨菪素对照品适量,加甲醇分别制成每1 mL含东莨菪素对照品5、10、15、20、25、30 μg的溶液,分别吸取20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标,以质量浓度（ρ）为横坐标,绘制东莨菪素标准曲线,得回归方程A=1.5848ρ＋0.0172(r=0.999 9)。结果表明:东莨菪素质量浓度在5～30 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
取伞形花内酯对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含伞形花内酯对照品7.5、15、22.5、30、37.5、45 μg的溶液,分别吸取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标,以质量浓度（ρ）为横坐标,绘制伞形花内酯标准曲线，得回归方程A=1.1067ρ＋0.2571(r=0.9996)。结果表明:伞形花内酯质量浓度在7.5～45 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 专属性试验
取按处方比例缺水母雪莲的阴性对照样品、东莨菪素对照品、伞形花内酯对照品、供试品按“2.1”项下色谱条件进样测定，色谱图见图1 。结果表明，阴性对照样品的色谱图在东莨菪素和伞形花内酯保留时间的相应位置上无色谱峰出现,表明此方法专属性强,阴性对照无干扰。
A.东莨菪素对照品;B.伞形花内酯对照品;C.雪隆胶囊;D.雪莲阴性对照品