黄酮类化合物柚皮苷抑制HaCaT 细胞RANTES产生的研究
结果见Tab.2，HaCaT细胞在用TNFα联合INFγ刺激48小时后，上清液所含RANTES的浓度明显增加，HaCaT细胞的形态产生了明显的变化，阿维A在 5×10-3 mmol·L-1，柚皮苷0.5、0.25 mmol·L-1预处理30min后可明显抑制RANTES的产生。注：对照组相比 **P＜0.01 ***P＜0.0012.3RANTES mRNA的表达实时定量RTPCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，RANTES、GAPDH的mRNA基因转录扩增片段均在相应的分子量位置(Fig. 1)。
根据实时荧光定量基因扩增的动力曲线，各组目的基因RANTES以及内参GAPDH的mRNA相对量的比值见Fig.2。正常培养HaCaT细胞及经TNFα+INFγ、TNFα+INFγ+阿维A、TNFα+INFγ+柚皮苷处理细胞均有RANTES、GAPDH表达；RANTES在细胞因子处理的细胞中显著表达，细胞因子未处理细胞微弱表达；而经阿维A、柚皮苷处理的细胞明显降低。Fig.1RANTES mRNA经RTPCR表达产物的琼脂糖凝胶电泳图
3讨论
RANTES由多种细胞分泌而来，作用于白细胞，使其趋化至炎症区域并将其活化[1，2]。曾有学者通过体外实验证实,正常人角质形成细胞受到适量的TNFα与IFNγ的联合刺激，其分泌至上清液中的RANTES水平明显增高[5] 。本实验中，我们证实了联合使用TNFα与IFNγ能诱导人角质形成细胞RANTES的明显增高。
柚皮苷全称为柚皮素7O新橙皮糖苷，属二氢黄酮类化合物，是橘红、骨碎补、枳实、枳壳等中药的主要有效成分[6]，具有显著的抗氧化作用、抗炎、抗内毒素作用。本实验中，通过ELISA直接RANTES的含量，证明了柚皮苷能抑制被TNFα与IFNγ诱导的HaCaT细胞的RANTES的产生。同时分析了编码RANTES基因的转录，应用荧光定量PCR技术，该技术为实时（RealTime）荧光定量PCR，检测对象为反应进程中模板DNA拷贝数的即时变化而非终产物含量。因而能够通过对Ct值（扩增曲线进入指数期时的反应循环数）的准确判读，按指数扩增的规律计算出初始模板拷贝数。样本的Ct值与该样本起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。同时MTT法测定柚皮苷在1mmol·L-1的情况下几乎不影响HACAT细胞的活力，说明抑制RANTES的诱导产生不是由于柚皮苷对细胞的潜在毒性而致。推测柚皮苷抑制RANTES基因的转录以及表达可能通过一定的信号通路，有待进一步研究。
【参考文献】
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