应用仪器法与纸片协同法检测超广谱β
【关键词】 大肠杆菌；克雷伯氏菌；β
［摘 要］ 目的：探讨VITEKAMS 检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱ESBLs的可靠性，为临床合理选择抗生素提供依据。方法：用VITEKAMS专用药敏卡GNS506进行ESBLs检测，并以头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南为底物，用纸片协同试验作对照。结果：仪器检测57株肺炎克雷伯菌中有29株ESBLs为阳性，阳性检出率为50.88%，与纸片协同法结果一致。检测110株大肠埃希菌中，仪器检出率为40%，纸片协同法除仪器法检出阳性菌株ESBLs阳性也阳性外，对仪器检测的66株阴性菌中，仍有21株为阳性，检出率为59.09%。结论：VITEKAMS检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株，存在一定的局限性，建议根据感染菌株的特点改进ESBLs检测药敏卡，使用敏感的物质作底物，以提高仪器对ESBLs检出的灵敏度。
［关键词］ 大肠杆菌；克雷伯氏菌；β内酰胺酶类；检测
近年来,细菌的耐药性日益成为全球医药界关注的焦点。由于β内酰胺酶(ESBLs)可通过质粒传递给其他细菌，而致耐药菌株的形成，易造成感染的暴发流行。因此，探讨简便、可靠的检测产ESBLs菌株的方法，对于临床合理使用抗生素，提高疗效非常重要。为此我们于2003年5月至2004年3月应用全自动细菌生化分析仪（VITEKAMS）与纸片协同试验，对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的检测结果进行了比较分析，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 菌株来源 菌株来自本单位2003年5月至2004年3月期间所分离的菌株。其中大肠埃希菌110株，肺炎克雷伯菌57株。
1.2 仪器和试剂 细菌鉴定和药敏试验使用生物梅里埃公司的VITEKAMS，鉴定卡为GNI+，药敏卡为GNS506，均为生物梅里埃公司产品。药敏纸片，头孢噻肟(30 μg)，头孢他啶(30 μg)，氨曲南(30 μg)，购自浙江省军区后勤检疫所；头孢曲松(30 μg)，阿莫西林/棒酸(奥格门汀 20 μg/10 μg)，购自生物梅里埃公司。
1.3 细菌分离培养 按照《全国临床检验操作规程》进行，用VITEKAMS专用卡GNI+鉴定。VITEKAMS对ESBLs的检测，采用GNS506专用药敏卡，按说明书操作，在仪器专家系统的判断下，自动给出被测菌是否为产ESBLs菌株。纸片协同试验按照有关［2，4］介绍操作和结果判定。
2 结果
2.1 检测结果 仪器检测的57株肺炎克雷伯菌中，29株呈ESBLs阳性，纸片法检测也为阳性，结果一致，检出率50.88%。仪器检测的110株大肠埃希菌中，44株ESBLs阳性，检出率40.00%。纸片法对110株大肠埃希菌的检测，除仪器法检测的菌株ESBLs阳性也呈阳性外，而对66株仪器报告的ESBLs阴性菌株，仍有21株为阳性，检出率为59.09%，二者差异显著（χ2=4.01，P<0.05）。
2.2 药敏试验结果比较 纸片协同试验检测为ESBLs阳性的65株大肠埃希菌对4种底物的耐药性比较见表1。
在纸片协同法检测ESBLs阳性的65株大肠埃希菌中，仪器检测为阴性的菌株对氨曲南的耐药率明显高于仪器检测为阳性的菌株；对头孢噻肟的耐药率差异有显著性，对其他两种底物耐药率差异不明显。
表1 纸片协同法为ESBLs阳性的大肠埃希菌耐药性比较（略）
注:S：敏感，I：中介，R：耐药，I在统计学处理时视为敏感。
2.3 不同底物两菌产ESBLs的检出情况 检测结果显示，产ESBLs的大肠埃希菌最好的底物为头孢曲松，检出率为100%，头孢他啶最差；检测产ESBLs的肺炎克雷伯菌，4种底物均显示较好的效果，以头孢噻肟和氨曲南最好。见表2。
表2 4种底物对ESBLs的检出情况（略）
3 讨论
1983年德国首次报道［1，2］产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的臭鼻克雷伯菌后，国内外相继有ESBLs流行情况的报道。据国内报道［2～4］，双纸片协同试验检测ESBLs的特异性为100%；国外报道［5］VITEKAMS检测ESBLs的特异性为100%，敏感性为99.5%。本次研究结果，仪器与纸片法检测肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性结果一致，检出率为50.88%；检测大肠埃希菌产ESBLs，仪器法阳性检出率40.00%，纸片法为59.09%。这可能是由于菌株产酶量过高或过低，使VITEK检测卡中含与不含棒酸的反应孔浊度比达不到仪器判断的标准而造成漏检，而纸片协同法可通过调整纸片间的距离来提高灵敏性。
从研究结果看，仪器检测为ESBLs阴性的21株大肠埃希菌对氨曲南的耐药率明显高于仪器检测为阳性的44株菌，按NCCLS筛选标准［4］，对这批菌用氨曲南检测ESBLs的成功率要高于其他底物，可能VITEK检测卡中加入该底物，能提高对这批菌的检出率，其他影响因素尚待进一步研究。研究结果提示，头孢曲松为本次检测ESBLs的最佳底物，与国内报道［2］一致，但与国外报道［5］的头孢他啶为检测最佳底物不同。而且仪器检测阴性的大肠埃希菌在纸片协同法中，用头孢他啶和头孢噻肟为底物的检出率低于仪器检测阳性的菌株，这可能是这批菌在以头孢他啶和头孢噻肟为底物的检测卡上造成漏检的主要原因之一。在检测肺炎克雷伯菌产ESBLs的试验中，4种底物的检出效果均较好，因此，在仪器鉴定卡上不易漏检［6～11］。
通过比较研究我们认为，用现有的VITEK鉴定卡ESBLs存在明显的漏检现象，仪器厂家应根据临床使用中发现的问题，不断改进ESBLs检测药敏卡，使用敏感的物质作底物，提高仪器对ESBLs检出的灵敏度。
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