香连片质量标准检验方法探讨
【关键词】 香连片；盐酸小檗碱；含量测定；黄连；木香；薄层色谱鉴别
［摘 要］ 目的：建立香连片质量标准。方法：用薄层扫描法测定了盐酸麻的含量，对黄连、木香药材进行了薄层色谱鉴别。结果：加样回收率98.64% (RSD=3.78,n=3),标准曲线r=0.999 3,重复性RSD=1.75%(n=3),稳定性上，在3 h内斑点基本保持不变。结论：本方法稳定、可靠，重现性好，可作为制该产的质量控制方法之一。
［关键词］ 香连片；盐酸小檗碱；含量测定；黄连；木香；薄层色谱鉴别
香连片是恩施自治州各药厂的主导产品,湖北施恩堂制药有限公司(原恩施制药厂)和利川香连药业有限责任公司(原利川恩施制药厂)生产该产品已有近20年的(均由香连丸改剂型而生产)。香连片由黄连(吴茱萸制)和木香加工制成，载于《药典》1995年版［1］；香连片能清热燥湿，行气止痛,有解痉，抗病原微生物及增强免疫功能等作用,对痢疾杆菌包括志贺氏、福氏、宋氏及斯氏等多种菌株均有一定的抑制作用。临床主要用于湿热痢疾、里急后重、肠炎菌痢、泄泻腹痛。在药品质量检验上，过去主要以产品报批时送省以上药品检验机构为主，为了有效的控制其质量，我们对该品中的黄连、木香进行了薄层色谱鉴别，用薄层扫描法测定了盐酸小檗碱含量。结果表明，该方法简单易行，准确度高，不仅适宜地方药检部门抽检，也便于生产厂家对每批产品进行自检，现将该药的质量标准研究报道如下。
1 仪器、药品与试剂
CS930双波长薄层扫描仪，CQ250超声清洗仪(上海船舶设备研究所)；UV8三用紫外分析仪(上海分析仪器厂)；微量进样器(上海医用激光仪器厂)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；日本岛津LC4A高效液相色谱仪；盐酸小檗碱及盐酸巴马亭对照品(中国药品生物制品检定所)。香连片(湖北施恩堂制药有限公司生产，批号：050308，050414，050522，050609和050717)。薄层层析用硅胶(青岛海洋化工厂)，其他试剂为分析纯。
2 黄连、木香薄层色谱鉴别
取香连片10片，除去糖衣，研碎，加氯仿10 ml，回流提取20 min，滤过，挥去氯仿，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香挥发油0.1 ml，加乙醇10 ml，混匀，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－醋酸乙酯(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。按处方取不含黄连、木香的其他药材照本品制备工艺和供试品溶液的制备方法制成阴性对照，证明阴性无干扰，结果重现性好，薄层结果见图1，斑点Rf约0.35,T:18 ℃,RH:70%。
3 含量测定
3.1 分离提取方法选择
取香连片20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称出适量(约相当于盐酸小檗碱60 mg)，置索氏提取器中，加盐酸－甲醇(1∶100) 适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液(必要时浓缩)移至50 ml量瓶中，用盐酸－甲醇(1∶100) 少量洗涤容器，洗液并入提取液中，并稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法试验，精密量取5 ml，置已处理好的氧化铝柱(内径约0.9 cm，中性氧化铝5 g，湿法装柱，用乙醇30 ml预洗)上，用乙醇25 ml分次洗脱，收集洗脱液，置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置50 ml量瓶中，加0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，摇匀，照分光光度法试验，在345 nm的波长处测定吸收度，按盐酸小檗碱(C2OH18ClNO4) 的吸收系数(E1cm 1%)为728，按此此方法分别测定5批产品，结果详见表1。表1 样品中盐酸小檗碱含量（略）
选取样品中盐酸小檗碱含量(C2OH18ClNO4)为6.1%～6.4%，按片型测算，大片每片含盐酸小檗碱49.8 mg～53.6 mg，小片不得少于18.4 mg～19.7 mg。超过了《药典》(1995年版)规定的香连片含总生物碱的标准,即每片以盐酸小檗碱计，大片不得少于48 mg，小片不得少于17 mg。
3.2 测定波长的选择及主要扫描参数
用CS930薄层扫描仪分别对盐酸小檗碱对照品及供试品溶液色谱中相应位置上的色谱斑点进行光谱扫描及色谱测定，结果供试品和对照品光谱扫描图一致，并在510 nm波长处有最大吸收，在630 nm～700 nm波长处几乎无吸收，不含麻黄的阴性对照色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱相应位置上无斑点，在510 nm波长处亦无吸收，故确定λS=510 nm,λR=650 nm,SX=3。
3.3 稳定性试验
精密吸取供试品溶液3 μl,对照品溶液2 μl,分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描测定样品面积积分值，以后每隔30 min扫描测定一次，供试品斑点峰面积值经数据处理RSD=1.86%,结果表明，在3 h内斑点基本保持不变。
3.4 重复性试验
精密称取样品5份，照含量测定方法提取、分离、扫描、测定，结果经数据处理RSD=1.75%。
3.5 样品加样回收率试验
精密称取已知含量的香连片，共5份，加热溶解，再精密称取盐酸小檗碱对照品250 mg于200 ml量瓶中加水使溶解，精密吸取对照品溶液30 ml于上述供试品溶液中，照含量测定项下方法提取，分离，扫描测定含量，回收率，结果见表2。表2 回收率试验结果取样量(略)
4 小结
小檗碱的薄层色谱分离以［2］方法居多，而其薄层扫描含量测定报道［2～4］也以氨水碱化的展开剂为主，实验证明，氨水碱化的展开剂在分离晾干后，薄层板上还会残留氨，残留氨能与茚三酮反应产生红色背景，干扰小檗碱的测定，改用氢氧化钠铺制的碱性板可克服上述缺点，具有简便、重现性好、精密度高的优点［3］，5批次样品含量测定结果显示，各批次含量较为稳定，为香连片的质量控制提供了有效的方法。
由于黄连采用甲醇、乙醇提取点样，提取液中干扰成分多，黄连斑点难以分开，经多次反复实验，采用氯仿－醋酸乙酯对供试品溶液进行预处理，黄连斑点经分离清晰可见，黄连薄层色谱鉴别重现性好；我们对样品在不同温度、湿度条件下考察，经近5批次样品鉴别，均能检出与对照品相同的斑点。
文献：
［1］中华人民共和国卫生部.中国药典［M］.一部，1995：548.
［2］姜书贤，宋云宝，吕真丽，等.黄连制品中1伪小檗碱和d伪小檗碱的分离和测定［J］.中国药科大学学报，2004，21(9)：124.
［3］彭荣秀,陆金昕，苏友筠,等.薄层扫描法测定国产中药小檗碱含量［J］.河北医学，2003，39(5)：796.
