降钙素基因相关肽对缺氧缺血新生大鼠脑组织中内皮素的影响

【关键词】  缺氧缺血

    ［摘  要］ 目的：建立新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型，探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对缺氧缺血性新生大鼠脑组织匀浆中内皮素（ET）的影响及CGRP对脑损伤的保护作用。方法：将7日龄新生大鼠分为3组，正常对照组(假手术组);生理盐水组给予生理盐水3  μg/(kg・d)，腹腔内注射，连续3 d;药物组给CGRP3 μg/(kg・d)，腹腔内注射，连续3 d，断头取脑，用放射免疫分析法检测新生大鼠脑组织匀浆中ET的含量变化。结果：生理盐水组ET（112.55±20.70)pg/ml显著性升高，与正常对照组（53.02±12.39)pg/ml比较，差异有显著性P<0.01；药物治疗组ET（61.01±14.44)pg/ml CGRP与正常对照组比较，差异无显著性P>0.05。结论：ET参与缺氧缺血时的病理生理过程；CGRP能降低新生大鼠缺氧缺血脑损伤后ET的含量，CGRP对缺氧缺血脑损伤有保护作用。

　　［关键词］ 新生大鼠；缺氧缺血；内皮素；降钙素基因相关肽

　　Influence of Calcitonin Generelated Peptide on Endothelin Concentration　in the Infant Rats of Hypoxicischemic JIE Yu li，TANG
Lanfen

　　　Abstract：Objective To establish Hypoxicischemic（HIE） model of infant rats and observe the changes of ETin brain tissue of infant rats with HIE.Methods Infant rats were distributed randomly into 3 groups with 15 infant rats for each group:normal control，salt group and HIE with given CGRP cured.Results The levels of ET of salt group were much higher than those of group normal control.The levels of ET of group given CGRP were declined，there was no significant with group normal control.Conclusion ET was involved in the development of hypoxicischemia in neonatal rats.CGRP could protect the neonatal rats from hypoxicischemic brain damage.

　　Key words：The Infant Rats;Hypoxicischemic;Endothelin;Calcitonin generelated peptide

    缺氧缺血性脑病（hypoxicischemic encephalopathy,HIE）是医学儿科临床上由于新生儿窒息引起的脑部合并症，严重威胁新生儿生命和健康，目前尚无理想的治疗方法，研究表明降钙素基因相关肽（Calcitonin generelated peptide，CGRP）是一种有前途的神经保护剂。因此，本文通过建立新生大鼠HIE模型，应用CGRP治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤，检测新生大鼠脑组织匀浆中内皮素(endothelin.ET)的含量变化，旨在了解CGRP对缺氧缺血新生大鼠脑组织ET的影响，并探讨其保护作用，为医学儿科临床上由于新生儿窒息引起的脑部合并症的治疗探索有效的途径。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验对象  新生7日龄SD大鼠，性别不限，体重10 g～20 g，共45只，由本校实验动物中心提供。

　　1.2  HIE动物模型制备［1］  不分性别的7日龄SD大鼠，乙醚浅麻醉后，颈部正中切开皮肤，结扎左侧颈总动脉，缝合皮肤，术后休息2 h，将动物模型暴露于含有8%氧气和92%氮气混合气体的密闭容器中2 h，制成HIE模型。HIE模型检验依据动物脑组织病理改变。

　　1.3  实验分组  新生7日龄SD大鼠共45只，随机分组，每组15只，正常对照组（假手术组）：暴露左侧颈总动脉，不结扎，也不低氧处理；药物治疗组：于缺氧缺血后即给予CGRP 3 μg/(kg・d)腹腔内注射，连续3 d；生理盐水组：于缺氧缺血后即给予生理盐水3 μg/(kg・d)腹腔内注射，连续3 d。各组分别在规定的时间内断头取脑。

　　1.4  指标检测  脑组织ET含量测定：取脑组织吸去血迹，尽快放入1 mol/L醋酸1 ml中略作碾磨。然后在100 ℃水中煮沸10 min匀浆，4 ℃ 3 000 r/min离心15 min，取上清液-20 ℃保存。采用放射免疫分析方法直接测定。

　　1.5  数据处理  采用均数±标准差（±s）表示，方差分析，q检验。

　　2  结果

　　2.1  疗效比较  生理盐水组ET含量最高，与正常对照组比较，差异有显著性P<0.01；药物组ET与正常对照组比较，差异无显著性P>0.05。见表1。
表1：新生大鼠脑组织ET的含量变化（略）

　　2.2  病理检查  正常对照组：外观显大鼠脑膜血管无扩张，脑组织无肿胀、出血及坏死。光镜下显示脑各部位结构及细胞层次清楚，细胞结构完整。生理盐水组：外观显大鼠脑膜血管扩张，脑组织明显肿胀。光镜下显示神经细胞肿胀，间质水肿明显，大脑皮层散在出血点及坏死灶。药物治疗组：外观显大鼠脑组织轻度肿胀。光镜下显示神经细胞及间质均为轻度水肿，细胞结构完整，未见出血。

　　3  讨论

　　HIE是新生儿最常见的中枢神经系统病变。可引起脑发育迟缓，脑性瘫痪，癫痫等后遗症。随着分子生物学的，现认识到HIE可激活一系列生物反应，引起神经元内多种物质的表达变化，从而进一步导致脑组织的损伤［2］。ET是一种具有强烈缩血管作用的血管活性肽，其基因表达有三种异构形式：ET1，ET2和ET3，人脑的多种功能区尤其下丘脑都有其基因表达［3］，它广泛分布于中枢神经系统的血管内皮细胞和神经细胞内，具有收缩脑血管、调节脑血流等作用，ET1与缺血性脑血管病有密切关系，近年来临床和动物实验显示，在缺氧缺血性早期ET增高［4］。由于ET不能透过血脑屏障，因此脑内出现的ET只能是脑组织自身合成的。ET作为体内一种神经多肽递质，参与体内多种生理功能的调节，同时也参与许多疾病和应激状态下的病理生理过程。围产期窒息时，由于缺氧缺血和机体的应激反应等原因促进了ET的合成与释放增加，导致细胞代谢障碍，脑血管通透性增加，血脑屏障被破坏，导致脑水肿。ET1增加对脑水肿及梗死的形成、发展和预后将产生不良影响。本实验的结果显示：缺氧缺血组ET含量明显升高，用降钙素基因相关肽治疗后，ET明显降低，病理切片显示神经细胞及间质均为轻度水肿，细胞结构完整，未见出血，脑水肿有所改善，由此可见ET的含量与脑水肿有关联，与冯建华等［5］的结果一致，说明ET在缺氧缺血脑水肿中起重要作用，同时提示CGRP能提高脑细胞的缺氧缺血耐受性，对脑细胞损伤有保护作用。

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　　［1］  吴婉芳，徐放生.建立新生儿缺氧缺血性脑病动物模型［J］.新生儿科杂志，1992，7（6）：265267.

　　［2］  Jones NM，Bergeron M.Hypoxic preconditioning induced changes in HIF1 target genes in neonatal rat brain［Ｊ］．J cereb Blood Flow Metal 2001，21(9):11051114.

　　［3］  董宗祈.内皮素的研究进展［J］.实用儿科杂志，1998，13（4）：237238.

　　［4］  Wan ZT，Wang YX,Yang SW，et al.Plasma endothelin and nitric oxide and hemodynamic changes in cerebral blood flow in neonatal hypoxicischemia ercepalopathy［Ｊ］.Shiyong Erke Linchuang Zazhi (J Appl Clin Pediatr) 2002，17(3):166168.

　　［5］  冯建华，洪文澜.内皮素抗血清对低氧缺血脑损伤新生鼠的保护作用［J］.中华儿科杂志，2000，38（6）：380382.