PTEN和PCNA在胃癌中的表达及其临床意义

【摘要】  目的：检测PTEN蛋白和PCNA蛋白在胃癌组织中的表达，并研究其临床病理意义。方法：用免疫组织化学S—P法检测PTEN和PCNA蛋白在80例胃癌组织中的表达，并取30例同期胃炎黏膜标本作为对照。结果：胃炎黏膜PTEN蛋白阳性表达表达率为100.0%(30/30)，胃癌组织PTEN蛋白阳性表达率为40.0%(32/80)；高、中分化腺癌的PTEN蛋白阳性表达率高于低分化腺癌的；Ⅰ期、Ⅱ期胃癌的PTEN蛋白阳性表达率高于Ⅲ期、Ⅳ期的；无淋巴结转移组胃癌的PTEN阳性表达率高于淋巴结转移组的；胃癌组织PCNA标记指数为(86.7±12.3)%，高于胃炎黏膜的PCNA标记指数；PTEN蛋白表达阴性的胃癌细胞PCNA的标记指数高于PTEN蛋白表达阳性者。胃癌患者生存年限>5 a PTEN蛋白阳性表达率高于生存年限<5 a者。结论：PTEN蛋白的表达缺失与胃癌的发生、分化、转移和预后密切相关，胃癌PTEN蛋白表达与PCNA表达呈负相关。

【关键词】  胃肿瘤；抑癌基因；PTEN蛋白；PCNA；免疫组织化学

　　胃癌是我国发病率和病死率均较高的恶性肿瘤，其发生是一个多基因多阶段的变化过程，其中癌基因突变激活及抑癌基因失活起重要作用。近年研究表明，抑癌基因PTEN突变和缺失与人类多种肿瘤的发生及发展密切相关。但PTEN与胃癌的关系如何，报道不多。增殖细胞核抗原(PCNA)作为DNA聚合酶辅助蛋白，直接参与细胞DNA的复制，它在静止期的细胞内含量很少，从G1晚期开始增加，S期达到高峰。PCNA的表达可以反映细胞的增殖活性。本实验用免疫组织化学SP方法检测了80例胃癌组织中PTEN和PCNA基因蛋白的表达情况,分析了胃癌组织PTEN蛋白的表达及其与转移和预后的关系。

　　1  材料与方法

　　1.1  组织标本及临床病理资料  收集我院1999年至2001年间普外科手术切除的胃癌标本80例，男48例，女32例；年龄32岁～75岁，平均年龄58岁。胃窦癌52例，胃体癌18例，贲门癌10例。低分化腺癌18例，中分化腺癌42例，高分化腺癌12例，黏液细胞癌8例。淋巴结转移50例，无转移30例。胃癌组织PTNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期25例，Ⅲ期28例，Ⅳ期11例。各期、各组患者年龄、性别无差别。所有患者均无肿瘤家族史，术前均未接受过化疗或放疗。所有患者均进行了5 a的追踪随访。取同期本院胃镜下活检胃黏膜标本30例作为对照，全部为慢性浅表性胃炎。

　　1.2  免疫组化  免疫组化染色采用S—P法，第一抗体PTEN和PCNA以及S—P试剂盒均购自福州迈新公司，抗体均为即用型。切片均进行微波抗原修复。用已知阳性片做阳性对照，用PBS液代替一抗作阴性对照。操作按照试剂盒说明书进行。

　　1.3  结果判定  PTEN免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状，定位于细胞质内；参照文献［1］进行判定：计数500个细胞，按照染色强度计分，0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。按阳性细胞所占百分比计分：0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞≤10%，2分为阳性细胞11%～50%，3分为阳性细胞51%～75%，4分为阳性细胞>75%。染色强度与阳性细胞计分乘积0分～2分记为(-)，3分～5分记为(+)，6分～9分记为(++)，10分～12分记为(+++)。PCNA以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞；连续计数500个肿瘤细胞，以平均每100个瘤细胞中PCNA阳性细胞数作为PCNA标记指数。

　　1.4  统计学处理  采用χ2检验和Spearman等级相关检验。

　　2  结果

　　2.1  胃癌组织中PTEN蛋白的表达  80例胃癌组织中有32例PTEN蛋白阳性表达，其中(+)18例，(++)10例，(+++)4例，阳性表达率为40.0%；多数阳性表达不强。而30例胃炎黏膜组织全部有PTEN蛋白阳性表达，阳性表达率为100.0%，而且阳性强，其中(+++)22例，(++)8例。二者阳性表达率比较，差异有高度显著性(χ2=6.42,P<0.01)。

　　2.2  胃癌组织中PCNA蛋白的表达  80例胃癌组织中PCNA标记指数为(86.7±12.3)%；30例胃炎黏膜组织中PCNA标记指数为(41.8±10.2)%，二者标记指数比较，差异有显著性(χ2=5.12,P<0.05)。

　　2.3  胃癌组织中PTEN和PCNA蛋白表达的相关性  PTEN蛋白表达阳性的32例中， 平均PCNA标记指数为(58.8±11.2)%，PTEN蛋白表达阴性的48例中，平均PCNA标记指数为(95.8±12.4)%。经统计学处理发现，PTEN和PCNA表达呈负相关性(γ=-0.621,P<0.05)。

　　2.4  PTEN蛋白表达与胃癌临床病理联系  PTEN蛋白表达与胃癌患者年龄、性别、肉眼分型、病理类型及浸润深度等临床病理特征无明显关系。PTEN蛋白在高、中分化腺癌和低分化腺癌PTEN阳性表达率分别为50.0%(27/54)和19.2%(5/26)，差异具有显著性(χ2=6.23,P<0.05)。PTNM分期Ⅲ、Ⅳ期胃癌的PTEN蛋白阳性表达率为17.9%(7/39)，Ⅰ期、Ⅱ期胃癌的PTEN蛋白阳性表达率为61.0%(25/41)，二者差异有高度显著性(χ2=6.71,P<0.01)。胃癌组织的PTEN阳性表达率在淋巴结转移组为30.0%(15/50)，在无淋巴结转移组为56.7%(17/30)，差异具有显著性(χ2=4.73，P<0.05)。

　　2.5  胃癌组织中PTEN蛋白表达与预后关系  80例胃癌患者后生存年限>5 a者35例，23例PTEN蛋白表达阳性，表达率为65.7%；生存年限<5 a者45例，9例PTEN蛋白表达阳性，表达率为20.0%。经统计学处理，两表达率差异有显著性(χ2=5.93，P<0.05)。

　　3  讨论

　　抑癌基因PTEN是1997年发现的一种抑癌基因，是至今发现的唯一一种能使脂类去磷酸化的抑癌基因，定位于染色体10 q 23.3，编码由403个氨基酸残基组成的蛋白质。PTEN蛋白中与抑癌功能相关的结构域主要是氨基端的磷酸酶结构域和羧基端结构域。PTEN的酶活性中心有3个碱性氨基酸，从而扩大了PTEN结合底物所需的口袋结构的空间，为特异催化酸性底物奠定了结构基础。PTEN基因在人类多种恶性肿瘤的发生、中起作用。PTEN通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡等抑制肿瘤发生发展，其突变和异常表达与多种肿瘤的发生、发展、浸润、转移显著相关，是患者预后不良的标志［2］。国外学者报道，PTEN基因表达缺失可促进胃癌血管生成，并在胃癌的进展和转移中起关键作用［3］；其下调表达在胃癌的发生、进展、生长、分化和血管生成中起重要作用［4］。本组研究发现，80例胃癌组织中PTEN蛋白阳性表达率为40.0%，多数阳性表达不强，而对照组胃炎黏膜组织PTEN蛋白阳性表达率为100.0%，而且阳性强，二者差异有高度显著性；PTEN蛋白表达与胃癌患者年龄、性别、肉眼分型、病理类型及浸润深度等临床病理特征无明显关系；PTEN蛋白阳性表达率随癌组织的分化程度降低而降低；临床分期越晚，PTEN蛋白阳性表达率越低；淋巴结转移组PTEN蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移组；生存年限<5 a者PTEN蛋白表达阳性率低于生存年限>5 a者。这表明，PTEN蛋白低表达，会促进胃癌的发生、影响胃癌的分化、促进胃癌的转移，影响胃癌患者的预后。这结果与上述报道相似，并与国内学者范凯［5］的报道相似。基因的表达缺失可以是基因突变引起，也可以是基因的杂合性丢失(LOH)引起。PTEN基因突变常见于恶性胶质瘤、前列腺癌、子宫内膜癌等多种人类恶性肿瘤，但在胃癌中其突变率较低，且所发现的突变多位于非编码区［2］。Sato等［6］用聚合酶链反应一单链构象多态性方法(PCR?SSCP)分析了10个胃癌细胞系和58例原发胃癌组织，发现PTEN基因突变在胃癌的发生发展中不具有重要作用，推测胃癌中PTEN基因的杂合性丢失(LOH)可能较为常见。李锦毅等［7］用PCR?SSCP检测进展胃癌中的PTEN围基因微卫星位点的LOH情况，结果其LOH的总发生率为28.6%。Li［8］等用免疫组化检测发现：从不典型增生到进展期胃癌，LOH的发生率从13.3%到33.3%。这些研究都表明，胃癌中PTEN表达缺失主要是由PTEN基因的杂合性丢失(LOH)引起。增殖细胞核抗原(PCNA)可以评估肿瘤细胞的增殖活性，有助于研究细胞的增殖状态。本组胃癌组织中PCNA蛋白的标记指数显著比胃炎黏膜组织中的PCNA标记指数高，结果与李菁华［9］报道的相似。而且，本组研究还发现，PTEN蛋白表达阳性的平均PCNA标记指数较低，PTEN蛋白表达阴性的PCNA标记指数较高，二者表达呈负相关性。这结果也与文献报道的相似［5］。本实验证明：PTEN基因蛋白表达是反映胃癌发生、分化、发展、转移和预后的重要生物学标记物之一。PTEN基因蛋白和PCNA蛋白表达呈负相关性。

【文献】
  　　［1］ 许良中，杨文涛.免疫组织化学结果的判定［J］.癌症杂志，1996，6(1)：229?231.

　　［2］ 马鹏，谈晓红，冯义朝，等.PTEN与胃癌的研究进展［J］.延安大学学报(医学版)，2006，4(1)：7?8.

　　［3］ Park GSJ00 YE,Kim HS,et al.Expression of PTEN and its correlation with angiogenesis in gastric carcinoma［J］.Korean J Gastroenterol,2005,46(3):196.

　　［4］ Zheng HC,Li YL,Sun JM,et al.Growth, invasion,metastasis,differentiation,angiogenesis and apoptosis of gasttic cancer regulated by sxpression of PTEN encoding products［J］.World J Gastroenterol,2003,9(8):1662.

　　［5］ 范凯，马坚妹，王朝晖，等.胃癌中hMLH1、hMSH2、PTEN和PCNA表达的相关性及意义［J］.临床与实验病杂志，2006，22(2)：236?237.

　　［6］ Sato K,Tamum G,Tsuchiya T,et al.Analysis of genetisand epigenetic alterations of the PTENgene in gastric［J］.Vimlnws Arch,2002,440(2):160?165.

　　［7］ 李锦毅，郑华川，杨琳，等.胃癌中PTEN异常表达方式与围基因微卫星的杂合性缺失［J］.中华肿瘤杂志，2004，26(7)：389?392.

　　［8］ Li YL,Tian Z,Wu DY,et al.Loss of heterozygosity on 10q23.3 and mutation of tumor suppressor gene PTEN in gastric cancer and precacerous lesion［J］.World j Gastroenterol,2005,11(2):285?392.

　　［9］ 罗彬，云翔.抑癌基因PTEN在胃癌中的研究进展［J］.广东医学，2006，27(10).