1，8—二桉油素用作病理组织石蜡切片透明剂的实验研究
【摘要】 目的：对1，8—二桉油素用作病理组织石蜡切片透明剂的可行性进行实验研究，并探索其使用方法。方法：用二甲苯作对照，用1，8—二桉油素做实验研究，采用较硬、中等硬度和较脆的三种常见临床病理组织为实验材料。采取常规的病理组织取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片及染色过程，研究1，8—二桉油素代替二甲苯作为透明剂的可行性。结果：1，8—二桉油素能使酒精脱水组织完全透明，1，8—二桉油素组透明时间略长于二甲苯透明组。1，8—二桉油素组透明组织切片及染色良好。结论：1，8—二桉油素可以取代二甲苯用于病理组织透明。
【关键词】 1，8—二桉油素；石蜡切片；透明
二甲苯是病理制片必须使用的有机溶剂，二甲苯作为病理石蜡切片透明剂效果优良，但随着其对人体的毒性研究进展发现，长期使用二甲苯可对机体构成众多危害［1］。研究证实，吸入二甲苯蒸气可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的呼吸困难，甚至死亡。二甲苯为苯的同系物，可导致红细胞和白细胞升高［2］或降低［3］。易对胎儿产生毒性［4］和引起早期流产［5］。卫生部在《设计卫生标准》中对二甲苯的最高容许浓度做了具体规定［6］，卫生部已把二甲苯中毒定为百种职业病中的一种。为此，我们采用1，8—二桉油素取代二甲苯用于病理组织制片透明，以避免因为使用二甲苯而引起职业病的发生。
1 材料与方法
1.1 材料 1，8—二桉油素(1,8?2Cineole):由华海医用仪器有限公司提供，是加有抗氧化剂的1，8—二桉油素混合物。分子式C10 H180。酒精(alchol)：分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂。石蜡(parnffin)：熔点58 ℃，上海华灵康复器械厂。二甲苯 (Xylene) ： 分析纯，成都化学试剂厂。苏木素(Hematoxylin) ：英国进口，上海化学试剂分装厂提供。伊红（eosin）：The Coleman & Bell co., Norwood, O.,U.S.A. 中性树胶：上海标本模型厂。
1.2 仪器设备 温箱：BHT ARTHUR H.THOMAS CO.U.S.A.摊烤片机：YT?6B型，湖北孝感亚光医用电子技术研究所。包埋机：YT?6B型， 湖北孝感亚光医用电子技术研究所。切片机：Leica RM 2135，德国。
1.3 组织取材 选用病理石蜡切片中属于较硬的乳腺癌组织60块，属于中等硬度的结肠癌组织60块，属于较脆的肝癌组织60块，取材大小为2 cm×1.5 cm×0.3 cm，为病理科通常的取材大小,分为二甲苯组与1，8—二桉油素组，每组中每一种组织30块,一共用于制作切片的组织为180块。
1.4 组织固定、脱水、透明及浸蜡 4%中性甲醛固定8 h［7］。固定结束后，流水冲洗2 h，常规梯度酒精脱水，酒精浓度从70%到100%。二甲苯组用分析纯瓶装二甲苯透明，1，8—二桉油素组用1，8—二桉油素透明。二甲苯和1，8—二桉油素都用两缸透明，以保持透明剂的纯度和浓度,使用60 ℃温箱浸蜡,把预先熔化的石蜡分两缸浸蜡。
1.5 包埋、切片、贴片、烤片及染色 使用与浸蜡相同的石蜡，包埋机包埋。轮转式切片机连续切片，切片厚度为5 μm。载片涂抹粘片剂后贴片。烤片机烤片,温度70℃，时间1 h。苏木素—伊红对比染色，中性树胶封固。
2 结果
2.1 脱水时间 70%~90%酒精脱水时间采用固定时间脱水，二甲苯组与1，8—二桉油素组各个酒精浓度脱水时间无增减。两组梯度酒精脱水时间基本相似，无统计学差别，见表1。
表1 二甲苯组与1，8—二桉油素组梯度酒精脱水时间（略）
注：1，8二桉油素组和二甲苯组比较，P>0.05。
2.2 透明时间 在使用酒精脱水之后，使用1，8—二桉油素组透明时间稍长，见表2。
表2 二甲苯与1，8—二桉油素组织透明时间（略）
注：1，8二桉油素组和二甲苯组比较，P>0.05。
2.3 浸蜡时间 浸蜡分为乳腺癌组织、结肠癌组织和肝癌组织三组，以组为单位浸蜡。二甲苯与1，8—二桉油素组织用相同的浸蜡时间，见表3。
表3 二甲苯与1，8—二桉油素组织浸蜡时间（略）
2.4 组织切片及染色 组织包埋后，使用轮转式切片机进行切片，组织能切取连续切片，切片厚薄均匀。切片容易进行染色，细胞浆和细胞核染色鲜艳，色饱和度满意 ，对比清晰。组织无明显收缩和变形。
3 讨论
1，8—二桉油素是桉油提纯物，桉油是桉树(Euca lyp tus)叶和果实中油腺细胞分泌出来的芳香精油。桉树是桃金娘科( Myrtaceae) 植物，原产于澳大利亚东南角的塔斯马尼亚岛,在我国主要分布于广东、海南、云南、广西和四川等地［8］，桉树叶和果实用水蒸馏即可提取桉油［9］。桉油成分复杂，用以实验的是桉油中含量较高的1，8—二桉叶油素［10］。1，8—二桉油素既可以与酒精以任意比例混合，又可以和蜡液以任意比例混合。1，8—二桉油素有与二甲苯类似的特性。梯度酒精脱水是为了脱去组织中的水分，所以，二甲苯组和1，8二桉油素组各种组织都表现出相同的脱水时间。在透明环节，二甲苯组比1，8—二桉油素组时间稍快，但经统计学分析处理无意义，说明1，8—二桉油素也是一种良好的透明剂，和二甲苯具有同样的透明组织效果。随后的浸蜡实验表明，1，8—二桉油素用和二甲苯同样的浸蜡时间，蜡液就能够充分进入制片组织内，起到良好的切片支持作用，说明1，8—二桉油素和石蜡液相容性好，用1，8—二桉油素对组织透明后，对组织的浸蜡没有负面影响。透明的基本原理是用透明缸内高浓度的透明剂置换出组织内的酒精，所以，影响透明速度的主要是透明剂的纯度、浓度和组织渗透速率。对于透明剂的纯度和浓度，无论何种透明剂，都是使用高纯度和高浓度来实现透明，而且这在实验中是容易做到的，比如选择分析纯试剂和使用两缸甚至多缸透明剂透明，就是为了保证透明剂的纯度和浓度。但是，对于透明剂的组织渗透能力和速率，取决于透明剂本身的化学特性，所以，从根本上说，透明就只能选择有良好渗透速度和渗透能力的化学试剂。陈彩莲［11］等对实验大鼠皮肤的透皮促渗作用研究认为，1，8—二桉油素具有良好的皮肤渗透能力和速率，这恰好能满足1，8—二桉油素用作透明剂的要求。1，8—二桉油素来源充足，而且符合环保要求，是桉树叶和果实用水蒸馏提取物。1，8—二桉油素无毒，还是具有很多疗效的药物［12，13］，是药典收载的药物。1，8—二桉油素化学特性能满足作为病理组织透明剂的要求。实验结果表明，用1，8—二桉油素透明组织，能制作出效果良好的病理组织切片。1，8—二桉油素完全可以取代二甲苯用作病理组织透明剂，从而减少二甲苯引发的职业病，保护劳动者健康。
【】
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