拉米夫定治疗前后YMDD变异与HBV?DNA水平相关性分析

【摘要】  目的：通过对慢性乙型肝炎(CHB)患者血液中HBV?DNA、谷丙转氨酶(ALT)、r?谷氨酰转移酶(r?GT)的检测，了解CHB患者经拉米夫定(3TC)前后HBV?YMDD变异情况，分析HBV?YMDD变异与HBV?DNA、ALT、r?GT相关情况，探讨3TC治疗CHB的效果以寻找最佳治疗方案。方法：对71例治疗前CHB患者，检测HBV?YMDD变异株；选择64例HBV?YMDD的CHB患者经治疗1年后，检测HBV?YMDD变异株；选择36例患者经治疗后仍然是YMDD；13例经治疗后由YMDD变为YIDD；5例治疗后由YMDD变为YVDD的；9例经治疗后由YMDD变异为YMDD+YVDD混和型的CHB进行检测HBV?DNA、ALT、r?GT含量。结果：71例CHB用3TC治疗前已有7例存在变异现象，其中2例是YVDD型；3例是YIDD型；2例是YMDD+ YVDD混合型；64例治疗前为YMDD型的患者，用3TC治疗后36例没有变异、5例变异为YVDD、13例变异为YIDD、9例变异为YMDD+YVDD、1例变异为YMDD+YIDD；36例治疗前后DNA没有变异的CHB，治疗前后的HBV?DNA、ALT、r?GT含量差异有显著意义；13例治疗后由YMDD变为YIDD，治疗前后的HBV?DNA含量差异有显著性，而ALT、r?GT含量在治疗前后差异无显著意义；5例治疗后由YMDD变为YVDD和9例经治疗后由YMDD变异为YMDD+YVDD混和型，治疗前后HBV?DNA、ALT、r?GT含量差异无显著意义。结论：CHB用3TC治疗前已经存在着9.85%变异率。64例YMDD用3TC治疗1年后，有43.75%发生变异，变异的类型以YIDD为主。HBV?YMDD没有变异时，经3TC治疗CHB后患者的HBV?DNA 、ALT、r?GT含量比治疗前有较大降低，效果明显。YMDD变异为YIDD时，经治疗后患者血液中的HBV?DNA含量比治疗前有较大降低，而血液中ALT、r?GT含量比治疗前降低不大。YMDD变为YVDD时，其血液中的HBV?DNA量高于治疗前，ALT、r?GT含量比治疗前降低不大。YMDD变为YMDD+YVDD混和型时，经治后CHB患者血液中的HBV?DNA量比治疗前稍高，ALT、r?GT含量比治疗后降低不大。

【关键词】  拉米夫定；HBV?YMDD变异株；HBV?DNA；谷丙转氨酶；、r?谷氨酰转移酶

    核苷类药物拉米夫定(3TC)治疗慢性乙型肝炎(CHB)过程中，HBV?DNA聚合酶活性区(P基因区)的YMDD基序中的甲硫氨酸密码子(M)易变为异亮氨酸(YMDD→YIDD)或缬氨酸(YMDD→YVDD)，这两种变异均导致3TC与聚合酶亲和力的下降或消失［1］，从而影响治疗效果。为探讨惠州地区CHB患者在3TC治疗前和治疗后YMDD变异情况，分析治疗1年后YMDD变异与患者血液中HBV?DNA、谷丙转氨酶(ALT)、r?谷氨酰转移酶(r?GT)含量相关性，我们对治疗前后的71例患者CHB进行了HBV?YMDD变异株和HBV?DNA、ALT、r?GT含量检测，现报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  病例选择
 
　　调查对象为2005年6月至2006年8月在惠州市中心人民传染科住院及门诊就诊的CHB患者71例，其中男59例，女12例，年龄18岁~67岁，平均年龄36岁。诊断标准符合2000年9月(西安)第十次全国病毒性肝炎与肝病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案［2］。对71例CHB患者用3TC(100 mg/d)治疗前HBV?YMDD变异株检测，分析比较经治疗1年后的HBV?YMDD变异株与HBV?DNA、ALT、r?GT含量情况。

　　1.2  血清HBV?YMDD变异株检测

　　应用 PCR熔解曲线法，采用Light Cycler荧光PCR仪和分析软件，检测HBV?YMDD突变型核酸，检测试剂盒由深圳匹基生物工程股份有限公司提供。具体操作过程严格按说明书进行。

　　1.3  血清HBV?

　　DNA定量测定  应用PCR熔解曲线法，采用Light Cycler荧光PCR仪和分析软件，测定HBV?DNA 含量，试剂盒由深圳匹基生物工程股份有限公司提供，严格按说明书操作，检测灵敏度为1　000拷贝/ml。

　　1.4  ALT、r?GT含量的检测 

　　ALT采用赖氏法检测，r?GT采用酶法检测，都是使用OLMPusAu 600仪器检测，试剂由中生北控生物科技股份有限公司提供。

　　1.5  统计学处理 

　　描述性分析，P检验。

　　2  结果

　　2.1  71例CHB用3TC治疗前的HBV?YMDD检测结果 

　　YMDD型64例占90.14%(64/71)；YVDD型2例占2.82%(2/71)；YIDD型是3例占4.23%(3/71)；YMDD+ YVDD混合型2例占2.82%(2/71)。

　　2.2  64例YMDD型的CHB经3TC前HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平检测的结果 

　　见表1。表1  64例YMDD型的CHB患者治疗前HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平结果(略s)

　　见表2。 表2  64例YMDD型CHB用3TC治疗1年后的变异结果变异类型(略)

　　见表3。表3  36例没有发生变异，治疗前后HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平的结果(略)

　　2.5  13例CHB患者用3TC治疗后DNA由YMDD变为YIDD，其HBV?DNA、ALT、r?GT 

　　见表4。表4  由YMDD变异为YIDD治疗前后 HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平的结果(略)

　　2.6  5例CHB患者经3TC治疗后DNA由YMDD变为YVDD的HBV?DNA、ALT、r?GT结果 

　　见表5。表5  由YMDD变异为YVDD治疗前后HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平的结果(略)

　　2.7  9例患者经3TC治疗后DNA由YMDD变异为YMDD+YVDD混和型的HBV?DNA、ALT、r?GT结果 

　　见表6。表6  由YMDD变异为YMDD+YVDD治疗前后HBV?DNA定量和ALT、r?GT水平的结果(略)

　　3  结论

　　检定的71例CHB患者，在使用3TC治疗前有7例患者出现变异，变异率为9.85%，其中2例是YVDD型，3例是YIDD型，2例是YMDD+ YVDD混合型。国内报道显示，HBV在抗病毒治疗前变异率为20.6%， 其中2例是YVDD型，3例是YIDD型［3］，说明在用3TC治疗前患者体内的HBV?YMDD已存在着变异现象，导致变异原因有待于研究。本研究结果：64例YMDD型，经治疗后有28例(43.75%)发生变异，其中13例(20.31%)为YIDD，5例(7.81%)为YVDD，9例(14.06%)为 YMDD+YVDD，1例(1.57% )为YMDD+YIDD。研究结果与国内齐青松、杨茜、陈仁彬等同类研究［4］相比，变异率有上升趋势，变异的类型以YIDD为主。研究的36例患者经3TC治疗后，YMDD没有发生变异的CHB，血液中HBV?DNA、ALT、r?GT含量比治疗前降低较大，说明HBV?YMDD没有变异时，用3TC治疗CHB效果明显。研究的13例患者经3TC治疗后，YMDD变异为YIDD的CHB，其血液中的HBV?DNA含量比治疗前有较大降低，而血液中ALT、r?GT含量比治疗前降低不大。认为当YMDD变异为YIDD时，3TC可使HBV?DNA含量明显降低，但对ALT、r?GT无较大降低作用，其结果也没有发现升高。这与报道的发生YMDD变异的病例服药后，ALT水平高于服药前［5］意见不一致。研究5例患者经3TC治疗后，YMDD变异为YVDD的CHB，其血液中的HBV?DNA量高于治疗前，ALT、r?GT含量比治疗前降低不大，说明HBV?DNA由YMDD变为YVDD时，用3TC治疗CHB后，HBV?DNA量升高，对ALT、r?GT无较大降低作用。9例患者经3TC治疗后，YMDD变异为YMDD+YVDD混和型CHB，其血液中的HBV?DNA量比治疗前稍高，ALT、r?GT含量比治疗后降低不大。说明HBV?DNA由YMDD变为YMDD+YVDD混和型时，用3TC对HBV?DNA量、ALT、r?GT量影响不大。

【】
  　　［1］乙型肝炎生物治疗［M］.上海：上海技术出版社,2001.

　　［2］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志,2000,8:324?329.

　　［3］郭海波，李梦，叶晓光.未经抗病毒治疗慢性乙肝患者YMDD变异检测信HBV基因分型［J］.生物工程杂志，2004，24(6)：107?108.

　　［4］齐青松，杨茜，陈仁彬，等.拉米夫定治疗乙型肝炎后病毒YMDD变异与HBV?DNA基线水平有关系［J］.江西医学院报，2006，46(4)：85?86.

　　［5］张岩，白雪帆，李新红，等.拉米夫定治疗期间患者体内HBV?DNA聚合酶基因变异有分析［J］.医学研究生学报，2004，5(17)：423?429.