肠杆菌科细菌产AmpC酶和ESBLs的状况及对β?内酰胺类药物药敏检测分析
【摘要】 目的：了解肠杆菌科细菌产头孢菌素酶(AmpC)酶和超广谱β?内酰胺酶(ESBLs)的状况及对β?内酰胺酶类药物药敏情况。方法：应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶，用纸片法检测ESBLs。对β?内酰胺酶类药物药敏试验采用K?B琼脂扩散法。结果：AmpC酶阳性为13.3%（149/1157），其中以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯阳性率较高，而ESBLs阳性为43.0%（498/1157）,其中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌阳性率较高，ESBLs和AmpC同时阳性为4.7%（54/1157）。除对亚胺培南未形成耐药外，AmpC阳性菌株对β?内酰胺酶类药物耐药率超过50%，ESBLs则超过70%，这些均显著高于非产酶株。结论：须要计划地使用各种抗生素类药物，防止更多的AmpC和ESBLs阳性菌株的形成。
【关键词】 肠杆菌科细菌
肠杆菌科细菌是临床标本分离的主要致病菌或条件致病菌［1］，由于现时各种抗生素的广泛使用，使其耐药率不断上升，据有关报道，革兰阴性杆菌对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松等应用广泛的抗生素敏感率仅分别为74.8%、54.8%、51.8%［2］，并且有下降的趋势，然而造成肠杆菌科细菌耐药的原因主要是由于菌体产生的头孢菌素酶（AmpC酶）和超广谱β?内酰胺酶（ESBLs）。为此，对了解肠杆菌科细菌产AmpC酶和ESBLs的状况及药敏检测分析对临床控制感染用药有重要的意义，我们对临床分离的1 157株肠杆菌科细菌进行了AmpC酶和ESBLs的状况及药敏检测分析，结果如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
2005年1月至2006年12月我院住院及门诊患者标本中分离出的肠杆菌科细菌1 157株（排除同一患者同一部位重复分离的菌株）。
1.2 抗生素
头孢西丁、头孢噻肟、头孢噻肟+克拉维酸、头孢曲松、头孢他啶、头孢他啶+克拉维酸、头孢哌酮、头孢哌酮+舒巴坦、氨曲南、氨苄西林+舒巴坦、亚胺培南，以上药物均为英国OXOID公司产品，并于使用期内使用。
1.3 对β?内酰胺酶类药物敏感试验
采用K?B琼脂扩散法进行。质控菌株：大肠埃希菌ATCC 25922、肺炎克雷伯ATCC 700603分别作为ESBLs的阴性和阳性，而阴沟肠杆菌029和阴沟肠杆菌029M作为AmpC的阴性、阳性质控菌株。所有结果的判定均依据NCCLS 2005年的规定。
1.4 检测方法
1.4.1 ESBLs的检测
按照NCCLS 1999推荐的纸片法测定ESBLs［3］，采用头孢他啶与头孢他啶+克拉维酸组合，头孢噻肟及头孢噻肟+克拉维酸组合，任意一组药物抑菌环大小后者—前者≥5 mm时，则判定为ESBLs。
1.4.2 AmpC检测
应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶［4］。
2 结果
2.1 1 157肠杆菌科细菌的β?内酰胺酶的检测结果
ESBLs阳性为43.0%（498/1 157）,其中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌阳性率较高，分别为57.7%（250/433）、46.0%（185/402）、20.3%（30/148）。AmpC酶阳性为13.3%（149/1157），其中以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯阳性率较高，分别为48.0%（71/148）、9.2%（40/433）、8.0%（32/402）。 ESBLs和AmpC同时阳性为4.7%（54/1157），其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯、 阴沟肠杆菌分别为26株、22株、6株，结果见表1。
2.2 1 157株肠杆菌科细菌不同产酶菌株的耐药率。表1 1 157株肠杆菌科细菌的ESBL和AmpC测定结果（略）表2 1 157株肠杆菌科细菌不同产酶菌株的耐药率（略）
3 讨论
AmpC酶在分子分类中属C，具有很明显的生物化学特性和种属特性，它的产生主要是由染色体编码形成的，在情况下，AmpC酶处于低水平状态下，而当处于β?内酰胺类抗生素的高抗生素压力下，尤其是亚胺培南和棒酸，AmpC的水平将远远高于自然状态，引起对多种β?内酰胺类抗生素耐药，而且，AmpC酶不被克拉维酸等β?内酰胺酶抑制剂所抑制，对临床对抗感染选择用药做成一定威胁。在本次试验中，AmpC酶阳性株中仅对亚胺培南没有产生任何耐药，而其他β?内酰胺类抗生素和β?内酰胺类抗生素/β?内酰胺酶抑制剂的耐药率均超过50%，部分甚至高达97%。
ESBLs是有质粒介导的几个氨基酸突变而来，它能水解多种β?内酰胺类抗生素，但该酶能被β?内酰胺酶抑制剂所抑制。在本次试验中，共检出498株ESBLs阳性菌株，检出率为43.0%，从结果中得出，除对亚胺培南、头孢西丁、头孢哌酮+舒巴坦、氨苄西林+舒巴坦外，对其他β?内酰胺类抗生素均有较高的耐药率，有些甚至高达98%。
而ESBLs、AmpC均阳性共54株，检验率为4.7%，这些菌株除对亚胺培南形成耐药外，均对其他β?内酰胺类抗生素耐药率超过80%。
本次结果表明，随着各种β?内酰胺酶类抗生素的广泛使用，使AmpC酶和ESBLs阳性的肠杆菌科细菌不断增多，对临床如何利用β?内酰胺类抗生素控制由肠杆菌科细菌引起的感染构成一定的威胁，为此，及时并准确地完成药敏试验，指导临床有效合理地使用各种抗生素肠杆菌科细菌感染，并建议临床对肠杆菌科细菌适当使用各类抗生素，避免仅使用β?内酰胺酶类抗生素，形成对β?内酰胺酶类抗生素的高抗生素压力，防止更多的AmpC酶或（和）ESBLs的产生，这将更有利于临床对肠杆菌科细菌引起的感染治疗。
【】
［1］李家泰，李耘，齐慧敏.2002年至2003年革兰阴性细菌耐药性检测研究［J］.中华检验医学杂志，2005，28（1）：19?29.
［2］王辉，陈民钧，倪语星，等.2003年至2004年中国十家教学革兰阴性杆菌的耐药分析［J］.中华医学检验杂志，2005，28（12）.
［3］National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; the ninth information Standard M 100?S9［S］. pennsylrania: NCCLS,1999：1?103.
［4］赵虎，孔宪涛．AmpC 内酰胺酶的检测［J］．中华检验医学杂志，2003，6(26)：6.
