头孢哌酮/他唑巴坦的体外抗菌活性研究
作者：张守钗，陈苏婉，邓晓慧，孙爱慧，刘小康
【摘要】 目的：观察头孢哌酮与他唑巴坦联用后对临床分离的291株致病菌的体外抗菌活性。方法：采用琼脂二倍稀释法测定头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)对临床分离致病菌的体外抗菌活性，并与头孢哌酮、头孢哌酮钠/舒巴坦钠(2∶1)和哌拉西林钠/他唑巴坦钠(8∶1)进行比较。结果：头孢哌酮钠与他唑巴坦钠联用可不同程度地提高头孢哌酮钠单用的体外抗菌活性，与头孢哌酮钠/舒巴坦钠(2∶1)的抗菌活性相似，略优于哌拉西林钠/他唑巴坦钠(8∶1)的抗菌活性。结论：头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)有较强的抗菌活性，他唑巴坦增强了头孢哌酮对β?内酰胺酶的稳定性。
【关键词】 抑菌浓度；头孢哌酮钠；他唑巴坦钠；β?内酰胺酶抑制剂
In Vitro Antibacterial Activity of Cefoperazone/Tazobactam
Abstrect :Objective To study the in vitro antibacterial activity of cefoperazone in combination with tazobactam against 211 strains of clinically isolated pathogenic bacteria．Methods The antibacterial activity of cefoperazone /tazobactam(4∶1) against 291 strains of clinically isolated pathogenic bacteria in vitro were detected by two fold agar dilution method and compared with cefoperazone, cefoperazone /sulbactam(2∶1) and piperacillin /tazobactam(8∶1). Results The antibacterial activity of cefoperazone in combination with tazobactam was superior to cefoperazone and piperacillin /tazobactam(8∶1)，and similar to cefoperazone/sulbactam(2∶1). Conclusion The stability of cefoperazone /tazobactam(4∶1) to β?lactamases was improved and the antibacterial activity of cefoperazone were enhanced by tazobactam.
Key words ：MIC；Cefoperazone；Tazobactam；β?1actamase inhibitor
随着β?内酰胺类抗生素在临床上大量和不合理应用，致使细菌对β?内酰胺类抗生素耐药率逐渐增高，其最主要的机制是此类细菌产生了能水解该类药物的β?内酰胺酶，从而使药物失去活性而耐药。
目前，在临床上常联用β?内酰胺酶抑制剂来解决细菌产β?内酰胺酶引起耐药的问题，不失为一简便而有效的方法。本研究用临床分离的291株致病菌对头孢哌酮钠联用他唑巴坦钠后的体外抗菌效果进行了试验，并与头孢哌酮钠单用、头孢哌酮钠/舒巴坦钠和哌拉西林钠/他唑巴坦钠进行比较。
1 材料与方法
1.1 试验药物
头孢哌酮钠，规格：2.0 g/瓶，含量96.71% , 批号：60705701，珠海联邦制药股份有限公司中山分公司生产；头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1),规格：2.0 g/瓶，含量76.79%，批号：070103，海南通用三洋药业有限公司生产；头孢哌酮钠/舒巴坦钠(2∶1)，规格：1.5 g/瓶，含量63.41%, 批号：0602021，丽珠集团丽珠制药厂生产；哌拉西林钠/他唑巴坦钠(8∶1)，规格：2.25 g/瓶，含量效价84.99%，批号：05118301，珠海联邦制药股份有限公司中山分公司生产。
以上试验药物均用无菌注射用水溶解、稀释, 试验前新鲜配制。
1.2 试验菌株
试验菌株由四川抗生素研究所提供，共291株，均为产β?内酰胺酶菌株。金黄色葡萄球菌28株，表皮葡萄球菌20株，粪肠球菌25株，大肠埃希菌48株，肺炎克雷伯菌53株，铜绿假单孢菌40株，阴沟肠杆菌32株，鲍曼不动杆菌45株；质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923，为本实验室保存菌。所有菌株在试验前均经琼脂平板作单菌落分纯，取处于对数生长期的新鲜菌体适当稀释用于试验。
1.3 培养基及培养条件
葡萄球菌和肠球菌在MH培养基(含2%NaCl)，35℃培养24 h，其他菌株均采用MH培养基，37℃恒温培养箱孵育18 h～20 h。
1.4 产β?内酰胺酶菌株鉴定
用Nitrocefine试剂来测定。用微量进样器抽取Nitrocefin溶液10 μl滴在新鲜菌苔上静置1 h,如果菌苔颜色由黄色变为红色，则此株菌为产酶菌株，颜色不变，则不产酶。经此法检测结果，291株菌均为产β?内酰胺酶菌。
1.5 最低抑菌浓度(MIC)测定
采用NCCLS(National Committee for Clinical laboratory Standard 2000)推荐的琼脂二倍稀释法测定最低MIC［1］，用多点接种仪将含一系列浓度琼脂平皿表面定量接种细菌，每点细菌含量约为105 CFU，药物终浓度为0.015 mg/L、0.03 mg/L、0.06 mg/L、0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L、32 mg/L、64 mg/L、128 mg/L、256 mg/L,于37℃恒温培养箱孵育18 h～20 h，其中葡萄球菌和肠球菌在35℃恒温培养箱孵育24 h，次日观察结果，以未见细菌生长的平皿所含药物最低浓度为该药物对细菌的最终MIC，用大肠埃希菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923作质控，用不含抗生素培养基作生长对照。根据所测每株菌MIC值统计出MICrange、MIC50和MIC90。
2 结果
四种药物对291株临床分离的产酶致病菌的体外抗菌活性比较见表1。由表1可见头孢哌酮钠与他唑巴坦钠联用可不同程度的提高头孢哌酮钠单用的体外抗菌活性。头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)对产酶菌的抗菌活性与头孢哌酮钠/舒巴坦钠(2∶1)大部分相同，与哌拉西林钠/他唑巴坦钠(8∶1)相比MIC50、MIC90的值略低。表1 四种药物对291株临床分离的产酶致病菌的体外抗菌活性比较(略)
3 讨论
头孢哌酮钠（cefoperozone CPZ）属第三代头孢菌素，主要通过抑制细菌细胞壁的合成而发挥抗菌作用，具有抗菌谱广、抗菌作用强、在胆汁中浓度高的特点。对多数革兰阳性菌和革兰阴性菌具有抗菌活性,尤其对铜绿假单胞菌有良好作用, 在临床上得到广泛应用。但由于其对多数β?内酰胺酶的稳定性相对较差，不同程度地被质粒和染色体介导的β?内酰胺酶所水解［2］。本组资料显示头孢哌酮钠对大部分产β?内酰胺酶细菌抗菌活性较差，对产酶的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和粪肠球菌MIC50分别为32 mg/L、64 mg/L、32 mg/L，MIC90都为128 mg/L。对产酶的G?杆菌的抗菌活性也很低，对产酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌MIC50均在32 mg/L~64 mg/L之间，MIC90均在128 mg/L以上。由此可以看出，头孢哌酮钠对目前引起临床感染的常见产酶细菌已经十分不敏感，给临床带来严重的影响，因此研究和开发新的抗生素以解决细菌产酶而导致的耐药问题势在必行。为了使抗生素能继续发挥作用，如在临床上，常在原药的基础上联用β?内酰胺酶抑制剂来解决细菌产酶耐药的问题，不失为一快捷、而有效的方法。
目前临床上常用的β?内酰胺酶抑制剂主要有克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦。其中，他唑巴坦是舒巴坦的衍生物，是一种竞争性不可逆β?内酰胺酶抑制剂，它可保护β?内酰胺类抗生素不被细菌产生的β?内酰胺酶所破坏，与β?内酰胺类抗生素合用，能增强抗生素的抗菌活性，扩大其抗菌谱，减少不良反应，又可发挥抑酶增效作用［3］，抑酶作用优于克拉维酸和舒巴坦［3］。
本组资料显示头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)复合制剂对产酶的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和粪肠球菌MIC50分别为8 mg/L、16 mg/L、8 mg/L，均为头孢哌酮钠单用的1/4，MIC90分别为32 mg/L、32 mg/L、64 mg/L，分别是头孢哌酮钠单用的1/4、1/4、1/2，较头孢哌酮钠单用MIC都有所下降。对产酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌MIC50、MIC90分别为头孢哌酮钠单用的1/4~1/16和1/2~1/8。以上结果提示头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)复合制剂对产酶细菌的抗菌活力有明显的增强作用。
【】
［1］National committee for clinical Labarotory Stands. performance standards for antimicrobial susceptibility testing ninth informational supplement［J］. NCCLS documents,2000：17?99．
［2］汪复,张婴元.实用抗感染治疗学［M］.北京:人民卫生出版社, 2004：180?181.
［3］朱延军,胡军,鲁映青,等.一种新型β?内酰胺酶抑制剂?他唑巴坦［J］.国外医药?合成药生化药制剂分册,1999,20(5):297.
［4］Lister PD,prevan AM,Sanderscc.Importance of beta? lactamase inhibitor phamacokinetics in the phamavo? dynamics of inhivitordrug combinations:studies with piperacillin?tazobactam and piperacillin?sulbactam［J］. Antimicrob Agents Chemother,1997,41:721?727.
