周期蛋白B1在Barrett食道和食道腺癌中表达及其意义

【摘要】  目的:研究周期蛋白B1(cyclin B1)在Barrett食道、Barrett食道合并不典型增生和食道腺癌中的表达,评定在Barrett食管中周期蛋白B1作为肿瘤进展标记物的临床价值，同时通过检测在Barrett食道粘膜肠上皮化生-不典型增生-腺癌序列不同阶段该指标的表达探讨其与肿瘤发生的关系。方法：应用免疫组化法测定周期蛋白B1，实验样本取自Barrett食管25例，其中18例合并单纯肠化（SE），7例合并不典型增生（DY）, 食管腺癌（CA）12例，10例正常食道粘膜组织作为对照。结果:周期蛋白B1在研究组检测样本中均有高的表达率，而对照正常食管粘膜组织均无表达，相比差异有显著性，且在SE组、DY组、CA组的组织中周期蛋白阳性细胞逐渐增多，差异显著。结论:CyclinBl可能作为一肿瘤进展标记物来评估患者进展为腺癌的危险性，并可能在食管腺癌进程中起一定作用。

【关键词】  Barrett食管;食管腺癌; 周期蛋白B1

    Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)是一种具有重要临床意义的食管疾病。它与食管腺癌的发生密切相关，是一种主要的食管腺癌癌前病变，食管的原发性腺癌中约50%来自BE， BE肠化-不典型增生-腺癌的病理过程已被广为接受［1］。然而大多数BE患者不进展为腺癌，有进展的患者预后又差，现在监测策略为频繁的内镜检查和多块非靶性活检，但是，这种方法可能漏掉不典型增生的部位，而且，给予相对发病率较高的而低进展发生率BE这种较痛苦且较贵的侵入性检查不易被广泛采纳，因此，人们投入很大的兴趣应用生物标记以确定患者进展为此腺癌的危险性，目前，周期蛋白B1（cyclin　B1）作为调控细胞增殖的指标，在癌前病变研究中的应用日渐增多。本研究对BE、BE合并不典型增生和食管腺癌中Cyclin Bl的表达和意义进行了检测和探讨。

　　1  对象与方法

　　1.1  病例和标本 

　　本研究中所有组织切片均取自2005年3月至2007年5月于我院行胃镜检查的病例，诊断经活检病理检查证实。其中，BE 25例 ，食管腺癌12例，10例正常食管粘膜组织作为正常对照。在Barrett食道中18例合并单纯肠化，7例合并不典型增生。

　　1.2  主要试剂 

　　即用型鼠抗人cyclin B1单克隆抗体和免疫组化ABC试剂盒等皆购自福州迈新公司。

　　1.3  方法 

　　cyclin B1免疫组化法:石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化3% HzOz孵育10 min，消除内源性过氧化物酶活性。将切片置于10 μg/ml的saponin溶液室温孵育30 min，以修复抗原。其他步骤按免疫组化ABC试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木精复染，1% HC1分色，树脂封片。

　　1.4  结果判定 

　　阳性细胞率:光镜下每张切片组织中计数10个高倍视野的细胞，阳性细胞比例。以出现棕黄色颗粒作为周期蛋白B1表达阳性。以PBS代替一抗的切片作为空白对照。分别对每张切片的阳性细胞百分率进行分级记分。阳性细胞必须结构清晰、定位好，无背景着色。0分:阳性细胞0%;1分:1％～10%；2分:11％～25%；3分:26％～50%；4分：51％～75%；5分：76％～100%,根据积分确定阳性程度，1分～2分为低表达，3分～5分为高表达。

　　1.5  统计学分析 

　　应用SPSS 10.0统计软件，采用卡方检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2  结果

    10例正常食管粘膜组织中均无周期蛋白B1表达。BE组（SE），合并不典型增生组（DY）、腺癌组（CA）周期蛋白B1的阳性表达率均显著高于正常食管粘膜组织（P＜0.001）, 三组间差异则无统计学意义，但三组间高、低表达构成比不同（P＜0.05），可认为从BE组、DY组到CA组周期蛋白BE阳性细胞逐步增加，见表1。表1  周期蛋白B1在各组中的表达（略）

　　3  讨论

    肿瘤的基本特征是细胞的失控性生长，肿瘤细胞丧失了正常的细胞调节机制，使细胞周期启动、运行、及停止发生异常。而表现为细胞增殖过快、过多，最终导致肿瘤的发生、，因此有学者提出肿瘤本身就是一类细胞周期性疾病［2］。真核细胞的细胞周期包括间期G1、S、G2和有丝分裂期M期，这一增殖周期的调控有赖于两大主要调节成分:细胞周期蛋白(cyclins)和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin?dependent protein kinases，CDKs)。cyclin B1作为G2期的周期蛋白，活化并与CDKs即CDC2( cell division cycle)形成复合物，促使细胞进行G2/M期转变。细胞周期调控机制的破坏会导致细胞失控性生长和肿瘤的发生［3］。近年来的研究表明，cyclin B1在许多肿瘤中异常表达(如过表达、定位改变等)，呈现出癌基因的特性，Cyclin Bl的异常表达可影响细胞周期的进程，促进细胞的增殖，造成细胞周期的调控紊乱［4］，从而诱导细响的恶性转化和肿瘤形成，其与肿瘤发生发展、预后、诊断、的关系受到广泛关注。

    本研究用应用免疫组化法测定周期蛋白B1的表达情况，结果显示cylcin Bl的阳性表达率在BE、BE合并不典型增生和食管腺癌中分别为55.6% (10/18)、 85.7% (6/7)和91.7%（11/12），与正常对照组相比差异有显著性，因而CyclinBl有可能作为肿瘤进展标记物来评估患者进展为腺癌的危险性，以及为食道腺癌早期临床诊断提供了新的依据。cylcin Bl的过度表达在BE肠化生-不典型增生-腺癌序列发生过程中阳性细胞数逐渐增多，提示其可能在食管腺癌进程中起一定作用，但仍待于进一步从细胞水平和分子水平上进行更为深入的研究。

【】
  　　［1］Geboes K. Barrett's esophagus:the metaplasia?dysplasia?carcinoma sequence:morphological aspects［J］. A cta Gastroenterol Belg,2000，63:13?17.

　　［2］Hartwell L H, Kastan MB. Cell cyclin control and cancer［J］. Science,1994,266(5192):1821?1828.

　　［3］赵春玲，宋咏梅，樊飞跃，等.细胞周期蛋白B1与肿瘤［J］.肿瘤，2007,27(4):322?326.

　　［4］Yew Pr.Ubiquitin?mediated proteolysis of vertebrate Gl?and S?phase reg?ulators［J］.J Cell Physiol,2001，187(1):1?10.