何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
作者：熊平源 胡艺兰 郭凯文 唐朝晖 白惠卿
【摘要】 为了解何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响，采用微量浊度法测定小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性；采用小鼠胸腺细胞检测法测定小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素?1的分泌活性；采用姬姆萨染色法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果表明，各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒作用及泌白细胞介素?1的分泌活性明显增强(P<0.01)； 各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能明显增强(P<0.01)，提示何首乌能促进小鼠腹腔巨噬细胞功能。
【关键词】 何首乌； 吞噬细胞； 细胞毒； 白细胞介素?1
The Effect of the Polygonum Multiflorum Thunb on the Mouse’s Peritoneal Macrophage
Abstract To know the effect of the Polygonum Multiflorum Thunb on the mouse’s peritoneal macrophage. Use the micr?nephelometry method to detect the cytotoxic activity that the mouse’s peritoneal macrophage mediated; use the mouse’s thymocyte?detection method to determine the interleukin?1’s(IL?1) secretory activity of the mouse’s peritoneal macrophage; Use the Giemsa staining method to detect the mouse’s peritoneal macrophage’s phagocytosis function. Every medical experimental group show obviously better secretory activity of the interleukin?1 of the mouse’s peritoneal macrophage and the better cytotoxic activity that the mouse’s peritoneal macrophage mediated （P<0.01）; Every medical experimental group show obviously better phagocytosis function of the mouse peritoneal macrophage （P<0.01）. Polygonum Multiflorum can enhance the function of the mouse’s peritoneal macrophage.
Key words polygonum multiflorum thunb; macrophage; cytotoxic; interleukin?1 (IL?1)
何首乌（Polygonum Multiflorum Thunb）为蓼科植物何首乌干燥块根，主要含有大黄酚和大黄素，其次为大黄酸、大黄素甲醚和大黄蒽酮、淀粉、粗脂肪、卵磷脂等。据本草纲目记载，何首乌主治祛风利湿、和血调经。医学认为，何首乌具有延缓衰老、降低血脂、保护肝脏及抗菌消炎等作用。本研究就何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响进行了探讨。
1 材料
何首乌在中药店购买，3H?TdR为院原子能研究院产品，小鼠S180肉瘤细胞由北京大学医学部免疫学系提供。动物 Ba1b/c品系小鼠，8～12周龄，体重18～22g，雌雄各半，由北京大学医学实验动物中心提供。CO2培养箱为美国NaPCo产品，倒置生物显微镜为重庆光学仪器厂产品。
2 方法与结果
将小鼠随机分成4组，每组15只。正常对照组每只每日用0.25mL无菌生理盐水连续腹腔注射7d。何首乌水提物用生理盐水配成4mg/ml（相当于生药120mg）。药物I组给予何首乌水提物2mg /（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物II组给予何首乌水提物4mg /（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物III组给予何首乌水提物6mg /（鼠.d），连续腹腔注射7d［1］。
2.1 何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性的影响
用3H?TdR标记小鼠S180肉瘤细胞（靶细胞）。将制备好的腹腔Mφ悬液加入96孔培养板中，100uL/孔（浓度为1×106mL-1）培养4h，洗去悬浮细胞，加入10uL LPS继续培养8h，加入3H?TdR标记的小鼠S180肉瘤细胞100uL（效靶比为5：1），同时设靶细胞对照孔，培养20h，吸取上清100uL，检测放射活性，细胞杀伤率［2］。
2.2 何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1β的影响
白细胞介素?1β的测定：采取小鼠胸腺细胞检测法［3］。一式三份，包括阴性对照，β闪烁液计数仪测定3H?TdR掺入值。表1 何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞毒活性的影响（略）注：* 与对照组比较，P<0.01。表2 何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1β的影响（略）注：* 与对照组比较，P<0.01；** 与对照组比较，P<0.001。
2.3 何首乌对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
实验前3天，腹腔注射无钙镁Hank′s液2mL作为巨噬细胞诱导剂。测时脱颈椎处死小鼠，用pH6.5～pH6.7的无钙镁Hank′s液2mL洗出全部腹腔巨噬细胞，取1mL腹腔洗液置于5mL离心管中，加入10%鸡红细胞0.2mL，插入5×20mm2盖玻片条，经37℃30min后取出玻片条，洗涤，固定，姬姆萨染色，油镜下计数巨噬细胞吞噬百分率，并其吞噬指数［4］。
图2结果显示，与对照组比较各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显增强，其中药物I组、药物II组与对照组比较，P＜0.05；药物III组与对照组比较，P＜0.01。
3 讨论
巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成细胞，是执行固有免疫的效应细胞，同时在特异性免疫应答的各个阶段也起重要作用。其主要功能是通过吞噬作用清除体内衰老损伤或凋亡的细胞，以及免疫复合物和病原体等抗原性异物。当巨噬细胞被细菌脂多糖或IFN?γ和GM?CSF等细胞因子激活后，可将胞内活性氧、活性氮和酶类物质释放至胞外，通过细胞毒效应使肿瘤等靶细胞发生损伤和破坏，产生抗肿瘤、抗病毒作用；活化巨噬细胞还可通过分泌大量TNF?α，诱导肿瘤和病毒感染等靶细胞发生凋亡；在抗肿瘤和抗病毒等特异性抗体参与下，也可通过ADCC效应杀伤肿瘤和病毒感染细胞等。此外，活化巨噬细胞也可以通过分泌多种细胞因子如IL?1β、TNF?α、IL?6等参与免疫调节。
有报道称何首乌能促进小鼠脾细胞抗体的分泌和细胞毒T细胞对靶细胞的杀伤功能［5］。不仅如此，本研究结果还表明，何首乌也能增强小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性、IL?1β的分泌活性及吞噬功能,提示何首乌不仅能增强机体的特异性免疫，还能促进机体的固有免疫。
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1 秦凤华，谢蜀生，张文仁，等. 白花蛇舌草对小鼠免疫功能的增强作用. 上海免疫学杂志，1990,10（6）:321～323.
2 张桂梅，冯作化，郝天玲，等.大蒜素对巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响.中药杂志,1996,21（1）：45～47.
3 杨贵珍. 免疫生物工程纲要与技术. 吉林技术出版社,1991,16～18.
4 熊平源，边藏丽. 医学免疫学与微生物学实验教程. 广西师范大学出版社,1997,5～8.
5 秦凤华，谢蜀生，张文仁，等.何首乌对小鼠免疫功能的影响. 免疫学杂志，1990，6（4）：252～254.
