EphA2、VEGF在非小细胞肺癌中的表达及意义
作者：王小莉, 陈金华, 龚兴牡
【摘要】 目的 探讨Eph受体酪氨酸激酶A2 (EphA2)和血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌中的表达及其意义。方法 用免疫组化SP法检测EphA2和VEGF在63例非小细胞肺癌中的表达情况。结果 在NSCLC中EphA2和VEGF呈高表达。EphA2的表达与NSCLC病理分型、分化程度无关，但是与临床分期及淋巴结转移密切相关。VEGF的表达与分化程度、淋巴结转移、临床分期有显著性差异。EphA2与VEGF表达呈正相关。结论 EphA2可与VEGF结合作为判断NSCLC恶性程度及预后的指标，及早期诊断指标和的新靶点。
【关键词】 非小细胞肺癌; Eph受体酪氨酸激酶A2;血管内皮生长因子；免疫组织化学
Abstract：Objective To investigate the expression of EphA2 and VEGF in NSCLC and its significance.Methods The expression levels of EphA2 and VEGF were determined by immunohistochemical analysis in 63 cases of NSCLC.Results The expression of EphA2 and VEGF were significantly higher in NSCLC. EphA2 levels did not appear to relate to histological type or differentiation but did relate to clinical stage and metastases. Tumor differentiation, lymph node metastasis and clinical stage correlated with the expression of VEGF. EphA2 level positively correlated with VEGF level.Conclusion These data suggest that EphA2 may provide a molecular maker to identify and predict patients who have isolated brain metastases. Moreover, the high levels of EphA2 and VEGF in NSCLC may provide an opportunity for therapeutic targeting.
Key words：Non?small cell lung cancer; Erythropoietin producing hepatoma cell; Vascular endothelial growth factor; Immunohistochemical
0 引言
酪氨酸蛋白激酶受体在细胞的生长及分化中起重要作用。近来研究表明,作为酪氨酸蛋白激酶受体（RTK）最大亚族Eph受体激酶家族中的一员, EphA2在多种人体肿瘤组织中过表达且其过表达促进肿瘤向恶性表型。我们采用免疫组化的方法旨在研究EphA2蛋白在肺癌中的表达及相关性,并探讨其与肺癌临床病理特征的关系及其意义。
1 材料和方法
1.1 材料 63例NSCLC组织取自吉首大学附属病理科2000～2005年期间保存的手术后石蜡标本。其中男48例，女15例，平均年龄58岁(38～75岁)，按组织学分型：鳞癌37例，腺癌20例，大细胞癌6例。根据WHO肺癌分级程度：高分化24例，中分化20例，低分化19例。按国际抗癌联盟(UICC)2002年肿瘤TNM分期标准:Ⅰ期18例，Ⅱ期34例，Ⅲ～Ⅳ期11例。所有患者均未接受放化疗。
1.2 试剂 VEGF、EphA2抗体、免疫组化检测盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.3 免疫组化SP法 步骤均按照SP试剂盒的说明进行，VEGF的工作浓度为1∶100，EphA2为1∶100。
1.4 结果判定 EphA2蛋白以细胞胞浆内有棕黄色细颗粒为阳性，肿瘤细胞无阳性反应为阴性(-)，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5个视野计数200个细胞/视野，共计1 000个，阳性细胞数<1%为阴性(-)，阳性细胞数1%～10%为弱阳性(+)，11%～50%为中度阳性(++)，>50%强阳性(+++)。VEGF染色判定按切片中着色细胞数量的比率分类：<10%为阴性，≥10%为阳性。
1.5 随访 58例患者获随访，3.3～52.5 (24.58±14.10)个月,生存时间从第1次术后开始,最近的一次随访时间是2006年2月1日。
1.6 统计学处理 应用SPSS10.0统计软件对数据进行统计学处理，采用χ2检验和秩和检验。相关性采用Spearman等级相关分析。生存分析采用Kaplan?merier方法和Log?rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 EphA2和VEGF表达之间的关系 EphA2、VEGF阳性反应主要为细胞浆内出现棕黄色颗粒。63例NSCLC组织中EphA2的表达阳性率为71.2%(45/63)，其表达与NSCLC病理分型、分化程度无关，但是与临床分期及转移密切相关。VEGF在NSCLC组织表达阳性率为79.4%(50/63)，其表达与肺癌组织不同分化程度、淋巴结转移、TNM分期有统计学差异(P<0.01),见表1。
表1 63例NSCLC中EphA2和VEGF表达之间的关系（略）
※Spearman等级相关分析
2.2 EphA2和VEGF病理因素的关系 68例NSCLC组织中EphA2和VEGF表达均阳性共有42例，经Spearman等级相关分析显示表达呈显著正相关(r=0.496, P<0.01)，见表2。
表2 63例NSCLC中EphA2、VEGF表达与病理因素之间的关系（略）
*为秩和检验, #为卡方检验
2.3 EphA2表达与患者生存的关系 本组63例中58例获随访，术后1、3和5年的生存率分别为75.9%、45.6%和10.2%。EphA2强表达组(++～+++)生存时间为(34.9±30.5)个月,弱表达组(-～+)生存时间为(43.2±25.9)个月, EphA2强表达组与弱表达组比较,患者生存时间缩短(P=0.04)。
3 讨论
肿瘤细胞的侵袭与转移的发生与细胞粘附，细胞与细胞、以及细胞与基质间的信号传导通路异常有关。
酪氨酸激酶受体是信号传导中最重要的传导通路之一，几乎所有的生长因子刺激细胞增值的信号，以及大部分细胞因子的信号、抗原结合淋巴细胞表面受体诱导细胞各种反应，都离不开酪氨酸激酶受体通路[1]。新生血管形成是包括不同系列分子信号传导在内的复杂过程。RTK的配体在血管形成中起着非常重要的媒介，其配体有3个家族：VEGF，血管生成素，Eph受体作用蛋白，它们通过内皮细胞RTK的表达起作用，共同在血管新生中起着重要的作用。
EphA2是具有酪氨酸激酶活性的受体，是外界刺激信号传递给细胞核，转化成细胞效应的信号通路的关键组成，参与细胞生长、增值、转化及胚胎发育和肿瘤形成，具有重要的生理功能。许多研究表明EphA2在人类肿瘤中如：乳腺癌、结肠癌、肺癌、胃癌是高表达的[2]。在本研究中发现EphA2与NSCLC病理分型、分化程度无关，但是与临床分期及转移密切相关，特别是存在脑转移的患者EphA2明显高于无脑转移，说明EphA2与肺癌的恶性程度密切相关。
VEGF能够促进血管形成和新基质形成，从而为肿瘤生长、侵袭和转移提供基础。王靖华等[2]应用免疫组化研究显示VEGF参与了肺癌新生血管并促进肿瘤转移，可以作为肿瘤转移和预后指标。在本研究中发现VEGF在NSCLC组织表达的阳性率为79.4%，坏死区域及肿瘤浸润边缘呈强表达，与淋巴结转移、分化程度及TNM分期相关，提示VEGF阳性表达在肺癌患者中转移率高，分化程度差，有着较差的病理生物学行为，从而有助于判断预后。
Cheng等[4]经实验证实VEGF通过诱导EphA1而激活EphA2，从而诱导肿瘤的新生血管形成。Kataoka等[5]研究表明EphA2在结肠癌中有助于诱导肿瘤的新生血管形成。EphA2及VEGF受体同属于受体型RTK家族成员，具有类似的分子结构，而且在恶性肿瘤的血管形成中密切关联。本实验表明，EphA2和VEGF在NSCLC中的表达与肿瘤的恶性程度有关，而且两者之间呈正相关。
由此推断：EphA2在NSCLC的新生血管形成中可能起非常关键的作用。NSCLC中对肿瘤的恶性生物学作用，可能是通过影响EphA2进行信号转导而发挥作用。
综上所述，EphA2和VEGF在NSCLC中高表达，两者均与其恶性生物学行为有关，且两者密切相关，这种现象提示EphA2蛋白在肿瘤的血管生成方面发挥了一定的作用。目前已有报道证实,阻断EphA2受体的活性可以抑制肿瘤的血管生成。因此, EphA2有望成为抗肺癌的新靶点,因为在抑制肿瘤细胞生长的同时,也直接影响了肿瘤的血管生成。
【】
［1］ 曾益新. 肿瘤学[M].第2版.北京.人民卫生出版社，2003.139?140.
[2] Kinch MS, Moore MB, et al. Predictive value of the EphA2 receptor tyrosine kinase in lung cancer recurrence and survival[J]. Clin Cancer Res,2003,9(2):613?618.
[3] 王靖华,李桂圆,陈龙邦，等.VEGF、p53、MMP?2在非小细胞肺癌的表达及与肿瘤血管生成和淋巴结转移关系的研究[J].肿瘤防治研究，2003，30（1）：39?41.
[4] Cheng N, Brantley DM, Liu H, et al. Blockade of EphA receptor tyrosine kinase activation inhibits vascular vascular endothelial growth factor?induced angiogenesis[J].Mol Cancer Res，2002, 1(1):2?11.
[5] Kataoka H, Igarashi H, et al. Correlation of EphA2 overexpression with high microvessel count in human primary colorectal cancer[J]. Cancer Sci, 2004,95(2):136?141.
