乳腺癌组织中雌激素受体亚型ERβ的表达及其与临床病理指标的关系

                 作者：李云涛 李海平 范忠林 刘俊峰

【摘要】  目的 研究乳腺癌组织中雌激素受体亚型ERβ的免疫组织化学表达情况及其与临床病理指标的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测327例乳腺癌组织中ERβ和ERα及VEGF与c?erbB2的表达水平，对其进行比较研究，并结合月经状况、肿瘤大小、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移等进行分析。结果 ERβ在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率为20.49％（67/327），其表达与ERα的表达无相关性（r=－0.051,P=0.137），但与VEGF和c?erbB2的表达呈正相关（r=0.564,P=0.000；r=0.288,P=0.000）。腋窝淋巴结转移数大于3个者其原发肿瘤的ERβ阳性率为31.8％，明显大于无转移者（χ2=4.436，P=0.035）和转移数小于等于3个者（χ2=6.369，P=0.012），后两组比较无统计学差异（χ2=0.744，P=0.388）。 结论 ERβ与乳腺癌的有一定关联，可作为判断乳腺癌生物学行为的重要指标。

【关键词】  乳腺癌；ERβ；ERα；VEGF；c?erbB2

    内源性雌激素对乳腺癌的发生发展起着重要作用，经典的雌激素受体（ERα）对指导乳腺癌内分泌的选择及预后判定有重要作用。1996年Kuiper等[1]在大鼠前列腺和卵巢cDNA文库中克隆出一种新的雌激素受体，命名为雌激素受体亚型ERβ。本研究探讨了327例乳腺癌患者的ERβ的表达情况，并通过与ERα ，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和 c?erbB2表达情况的比较，并结合月经状况、肿瘤大小、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移等情况，分析其在乳腺癌发生发展中的作用。

    1 资料与方法

    1.1  临床资料  

    选择河北医科大学第四外一科2004年1月～2005年1月手术治疗的乳腺癌标本327例，所有患者均为女性，年龄23～78岁，中位年龄51岁，手术前均未进行任何治疗。标本均经病理证实（浸润性导管癌175例，浸润性小叶癌122例，增生癌变11例，其他19例）。

    1.2 方法

    免疫组织化学染色采用标准SP法，试剂盒购自北京中杉生物技术公司。

    所有组织均用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚4μm，依次脱蜡，水化，抗原热修复。3%H2O2室温孵育10 min，PBS冲洗，再以10%山羊血清封闭10 min，然后分别滴加一抗、二抗等，最后用DAB溶液显色，显色结束后以自来水充分冲洗，苏木素复染，中性树胶封片；VEGF以结肠癌组织作为阳性对照，ERα，ERβ及c?erbB2以乳腺癌作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

    1.3  结果判定

    ERα阳性表达于细胞核，ERβ，VEGF及c?erbB2均阳性表达于细胞浆，呈黄色颗粒状。免疫组织化学切片观察整张切片阳性细胞数的比例及着色强弱进行判定阴性（-），无阳性着色或着色颗粒细微浅黄，阳性细胞数<10%；弱阳性（+），浅黄色细颗粒，阳性细胞数10%～25%；中度阳性（++），黄色颗粒较粗，阳性细胞数25%～50%；强阳性（+++），棕黄色粗大颗粒，阳性细胞数>50%。

    1.4  统计学分析

    采用SPSS12.0统计软件包进行统计学分析，采用χ2检验进行率和构成比差别显著性的检验，相关性用Spearman检验。

    2  结果

    2.1  ERβ在原发性乳腺癌组织中的表达

    ERβ为核受体，主要表达于乳腺癌细胞的细胞核，327例乳腺癌中67例（20.49％）ERβ蛋白表达阳性。

    2.2  ERβ表达与临床病理指标之间的关系

    ERβ蛋白的表达与月经状况，肿瘤大小，TNM分期，组织学类型无关（P>0.05），在腋淋巴结转移状况不同各组中，ERβ表达阳性率不同，其差异有统计学意义（P=0.028）。其中转移大于3个组的阳性率，明显高于无转移组（χ2=4.436，P=0.035）和转移小于等于3个组（χ2=6.369，P=0.012）。后两组比较无统计学差异（χ2=0.744，P=0.388）,见表1。

    2.3  ERβ表达与ERα、VEGF及c?erbB2表达的关系

    327例乳腺癌中246例（75.24％）ERα蛋白表达阳性，ERβ与ERα的表达无相关性，141例（41.9％）VEGF蛋白表达阳性和175例（53.52％）c?erbB2蛋白表达阳性，ERβ与VEGF和c?erbB2的表达均呈正相关，见表2。表1  ERβ与临床病理指标之间的关系表2  ERβ与ERα，VEGF及c?erbB2表达的关系

    3 讨论

    研究发现ERα和ERβ在结构和功能上均存在一定差异，对ERβ所起的作用有着不一致的研究结果，如Speirs等[2]报道乳腺癌中ERβ高表达提示预后差和内分泌耐药，而Nakopoulou等[3]经Kaplan?Meier生存分析及COX比例风险模型分析显示ERβ是提示乳腺癌患者预后较好的重要因素之一。我们此次将ERβ与ERα，VEGF，c?erbB2等进行比较研究，进一步分析ERβ的临床意义。

    3.1  ERα与ERβ的关系

    ERα与ERβ在结构上存在一定差异，功能上不尽相同。试验发现雌激素拮抗剂经由ERα抑制基因转录，从而起到内分泌治疗作用，故一般认为ERα阳性者适宜内分泌治疗，但并非所有ERα阳性患者都能从内分泌治疗中获益。而ERβ在通过非雌激素反应原件参与雌激素拮抗剂抑制基因转录的过程中，在AP1位点起激活基因转录的作用[4]，有可能是ERβ的此项激活效应降低了内分泌治疗的效果。研究还认为ERβ在乳腺正常组织中高表达而在乳腺癌中低表达，并且ERβ在乳腺癌组织中的表达低于ERα水平的表达。本组资料中ERα的阳性表达率为75.24%，ERβ的阳性表达率仅为20.49%。ERα阳性者中ERβ的阳性表达率为23.6％，两者在乳腺癌组织中的表达无相关性（r=-0.051,P=0.137）。

    3.2  ERβ与c?erbB2的关系及意义

    c?erbB2是表皮生长因子家族成员，在乳腺癌中的扩增或过表达率为20％～40％，本组资料其阳性率为53.5％。研究认为乳腺癌的逐步过程中对激素的依赖性降低，对生长因子的依赖性增加。生长因子激活 的受体酪氨酸激酶RTK—Ras—Raf—Mek—MAPK传导通路与细胞的增殖关系密切，而且可以配体非依赖方式直接激活雌激素受体[5,6]。本研究结果显示ERβ与c?erbB2的表达呈正相关（r=0.288,P=0.001），与国外研究结果一致[7]。c?erbB2的过表达一般预示着肿瘤侵袭性较强，内分泌治疗的效果不佳且预后较差，而雌激素拮抗剂如三苯氧胺与ERβ结合后可能对乳腺癌起激活效应，从而影响内分泌治疗效果，故而两者的表达可能存在一定关联。

    3.3  ERβ与VEGF的关系及意义

    血管生成对原发肿瘤的生长、浸润乃至转移都是必需的，血管内皮生长因子是作用最强、最具特异性的血管内皮细胞有丝分裂原。雌激素可以诱导VEGFmRNA的表达而促进肿瘤血管生成，且这种促进作用依赖于雌激素受体的存在[8,9]。我们的研究发现乳腺癌组织中ERβ与VEGF 的表达呈明显正相关（r=0.564,P=0.000），而ERα与VEGF 的表达无相关性（r=0.017,P=0.626），与温险峰[10]的研究相似。我们进一步的分析显示不管ERα是阳性还是阴性，ERβ与VEGF 均呈正相关（r=0.561,P=0.0000;r=0.593,P=0.000）,且在ERα阴性，同时ERβ又阳性的9例患者中VEGF全部呈阳性表达，表明ERβ与VEGF 的关系更加密切，结合其与c?erbB2的正相关情况，表明ERβ表达增高可能是提示预后差的一个指标。

    3.4  ERβ与临床病例指标的关系及意义

    ERβ蛋白的表达与临床病理指标的关系国内外报道尚不一致，我们研究的结果显示ERβ蛋白的表达与月经状况、肿瘤大小、TNM分期、病理类型均无关联，但与腋窝淋巴结转移阳性数比较则有关联，其中转移大于3个组其ERβ阳性率（31.8%）明显高于无转移组（19.1%，χ2=4.436，P=0.035）和转移小于等于3个组（14.8％，χ2=6.369，P=0.012），而后两组比较无统计学差异（χ2=0.744，P=0.388），这也说明ERβ表达增高提示乳腺癌预后较差。

    本研究提示ERβ在乳腺癌组织中有一定程度的表达，其与VEGF、 c?erbB2的表达成正相关，与腋窝淋巴结转移的阳性数也有关联，表明其对乳腺癌的进展有一定作用，有可能促进乳腺癌的发展与转移，但其对预后的影响还需进一步随访研究。

【】
  ［1］ Kuiper GG,Enmark E,Pelto?Huikkom,et al.Cloning of a novel receptor expressed in rat prostate and ovary［J］.Proc Natl Acad Sci USA,1996,93（6）:5925?5930.

［2］ Speirs V,Kerin MJ.Prognostic significance of estrogen receptor beta in breast cancer［J］.Br J Surg,2000,87(4):405?409.

［３］ Nakopoulou L,Lazaris AC,Panayotopoulou EG,et al.The favourable prognostic value of oestrogen receptor beta immunohistochemical expression in breast cancer［J］.J Clin Pathol,2004,57(5):523?528.

［４］ Stolpe A,Slycke AJ,Reinders MO,et al.Estrogen receptor(ER)?mediated transcripitional regulation of the human corticotrophin?releasing hormone?binding protein promoter: differential effects of ERα and ERβ［J］.Mol Endocrinol,2004,18(12):2908?2923.

［５］ Martin LA，Farmer I，Johnston SRD，et al.Enhanced estrogen receptor (ER) α,ERBB2,and MAPK signal transduction pathways operate during the adaptation of MCF?7 cells to long term estrogen deprivation［J］.J Biol Chem,2003,278(33): 30458?30468.

［６］ Tremblay A,Tremblay GB,Labrie F,et al.Ligand?independent recruitment of SRC?1 to estrogen receptor beta through phosphorylation of activation function AF?1［J］.Mol Cell,1999,3(4):513?519.

［７］ Litwinink M，Filas V，Moczko R，et al.Expression of hormone receptors ERα ， ERβ and PgR in HER2?positive breast cancers［C］.ASCO Meeting Abstracts,2006,24(18):10525.

［８］ Ruohola JK,Valve EM,Karkkainen MJ,et al.Vascular endothelial growth factors are differentially regulated by steriod hormones and antiestrogens in breast cancer cells［J］.Mol Cell Endocrinol,1999,149(1?2):29?40.

［９］ Zaitseva M,Yue DS,Katzenellenbogen JA,et al.Estrogen receptor?alpha agonists promote angiogenesis in human mymonetrial microvascular endothelial cells［J］.J Soc Gynecol Investig,2004,11(8):529?535.

［１０］温险峰,沈赞,邵志敏,等.乳腺癌中雌激素受体亚型对血管内皮细胞生长因子表达的影响［J］.中华外科杂志,2002,40（3）:175?176.