泽泻颗粒抗家兔动脉粥样硬化形成的实验研究

            作者：史俊玲 李凤娥 刘玉洁

【摘要】  目的 探讨泽泻颗粒抗新西兰兔动脉粥样硬化形成的作用及其机制。方法 将新西兰兔36只随机分空白对照组、模型对照组及泽泻颗粒低、高剂量组，各9只。模型对照组及泽泻颗粒低、高剂量组采用高脂饲料和一次性动脉注射牛血清白蛋白的方法复制动脉粥样硬化模型。泽泻颗粒低、高剂量组均予泽泻颗粒灌胃，浓度分别为7.6、15.2 g/kg，灌胃容量2 mL/kg；模型对照组、空白对照组予与泽泻颗粒低剂量组同容量的蒸馏水。从实验第36日开始，每日灌胃1次，共4周。检测实验前后总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、血清丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）的变化情况，并进行主动脉的病检查。结果 泽泻颗粒高、低剂量组TC、LDL、SOD给药前后差值与模型对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；泽泻颗粒低剂量组TG、HDL、MDA给药前后差值与模型对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。且泽泻颗粒低剂量组的主动脉内膜增厚程度及结缔组织成分均较模型对照组轻。结论 泽泻颗粒调节血脂和抗氧化作用可能是其抗动脉粥样硬化作用的主要机制。

【关键词】  泽泻；动脉硬化；脂类；过氧化脂质类；超氧化物歧化酶   
　　【Abstract】  Objective  To observe the effect of Zexie grain on decration of blood lipid,lipid peroxidation and atheromatous plaque in experimental atheromatous formation.Methods  32 rabbits were divided randomly into the control group,model group, low-dose group, high-dose group. To establish the rabbit model by feeding fat food and intravenous injection of ox seralbumin. The level of serum malondialdehyde (MDA) was determined with thiobarbituric acid(TBA) chromatoptometry, and the levels of serum superoxide dismutase (SOD), total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low-density lipoprotein (LDL) and high-density lipoprotein (HDL) were determined with hydroxylamine chromatoptometry in auto-biochemical analyzer of OLMPUS-AU600. At the same time the pathological examination was made on aorta artery.Results  Zexie grain decreased obviously the levels of serum TC, LDL and MDA, increased the activity of SOD, and decreased the area and thickness of athermanous plaque in experimental animals. Conclusion  The antiatherosis mechanism of Zexie grain maybe related to its blood lipid regulation and antioxidation.
   
　　【Key words】  Zexie grain; Atherosclerosis; Blood lipid; Lipid peroxidation; Superoxide dismutase

　　动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是危害人类健康最常见的一种疾病，累及冠状动脉、脑动脉及肢体动脉，后果严重。至今尚无十分满意的阻止AS进展的药物。泽泻颗粒是本院主任医师刘玉洁的经验方，临床应用疗效显著。我们通过喂饲高脂饲料和一次性动脉注射牛血清白蛋白的方法复制新西兰兔实验性AS模型，观察泽泻颗粒抗AS形成的作用及其机制。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物  健康普通级新西兰兔36只，雌雄各半，体质量1.5～2 kg，3～4个月龄，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2005-0002。

　　1.1.2  主要试剂  总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）检测试剂盒由上海名典生物工程有限公司提供；低密度脂蛋白（LDL ）检测试剂盒由维日康生物科技有限公司（温州）提供；高密度脂蛋白（HDL）检测试剂盒由波音特生物科技（南京）有限公司提供；血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

　　1.1.3  主要仪器  7170全自动生化分析仪（日立公司）。

　　1.1.4  泽泻颗粒组成及制备  药物组成：泽泻15 g，白术10 g，柴胡8 g，枳壳6 g，何首乌30 g，毛冬青20 g，莪术10 g，莱菔子10 g。制备方法：将中药煎煮2次，第1煎先以武火煎至沸，再以文火煮1 h，过滤；2次滤液浓缩至膏状放冷，加95%乙醇，沉淀24 h，上清液回收乙醇至无醇味加糊精淀粉制成颗粒，烘干分装即可，每g颗粒含生药12.5 g。用时根据需要用蒸馏水配成相应浓度的溶液。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  动物饲养环境  ①分笼开放饲养，室温18～27℃，相对湿度40%～70%，噪声<60分贝，昼夜明暗交替时间10/14 h；②普通兔料和高脂兔料（由1%胆固醇、8%猪油、7.5%蛋黄粉及83.5%普通饲料组成）均由北京科澳协力饲料有限公司提供，合格证号：SCXK（京）2005-0007。

　　1.2.2  动物分组及饲养  普通饲料适应性喂养1周后，随机分为4组，各9只。空白对照组予普通饲料加蒸馏水喂养；模型对照组予高脂饲料加蒸馏水喂养；泽泻颗粒低剂量组予高脂饮食加泽泻颗粒低剂量喂养；泽泻颗粒高剂量组予高脂饮食加泽泻颗粒高剂量喂养。

　　1.2.3  模型制备  除空白对照组外，其余各组予兔耳中动脉部一次性注射牛血清白蛋白（250 mg/kg），使动脉发生免疫损伤，5周后形成类似人AS的病变。

　　1.2.4  给药方法  泽泻颗粒低、高剂量组均予泽泻颗粒灌胃，浓度分别为7.6、15.2 g/kg，灌胃容量2 mL/kg；模型对照组、空白对照组予与泽泻颗粒低剂量组同容量的蒸馏水。从实验第36日开始，各组每日灌胃1次，共4周。每周测体质量1次，并根据所测体质量与所给药物比例相应调整灌胃给药剂量。

　　1.3  观测指标及方法

　　1.3.1  血脂检测  实验前（即实验第8日）及实验第36、65日各检测1次TC、TG、LDL、HDL，均在日立7170全自动生化分析仪上完成。

　　1.3.2  MDA、SOD检测  实验前及实验第36、65日各检测1次。血清MDA测定采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法，血清SOD测定采用羟胺比色法。

　　1.3.3  主动脉的病理学检查  实验最后1日抽血后以空气栓塞法处死实验动物，解剖后立即将主动脉至髂动脉分叉处离断取出，清除外膜附着组织，纵向剖开，平铺于滤纸上。用目镜测尺观察斑块厚度，并观察主动脉粥样硬化斑块的情况。

　　1.4  统计学方法  采用SPSS统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较用t检验，多组间比较用方差分析。

　　2  结果

　　2.1  一般情况  4组均有1只动物死亡。动物死亡原因为灌胃不当或腹泻。各组存活动物体质量比较差异无统计学意义（P＞0.05），各脏器切片中未见毒性反应。

　　2.2  4组TC、TG、LDL及HDL给药前后差值（即第65日与第36日差值）比较  见表1。

　　表1  4组给药前后TC、TG、LDL及HDL差值比较（略）

　　与空白对照组比较，?P＜0.05；与模型对照组比较，△P＜0.05

　　由表1可见，各组TC、TG、LDL及HDL实验前比较差异无统计学意义（P＞0.05）； 泽泻颗粒高、低剂量组TC、LDL给药前后差值与模型对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；泽泻颗粒低剂量组TG、HDL给药前后差值与模型对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

　　2.3  4组血清MDA、SOD给药前后差值比较  见表2。

　　表2  4组给药前后血清MDA、SOD差值比较（略）

　　与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型对照组比较，△P＜0.05

　　由表2可见，各组MDA、SOD实验前比较差异无统计学意义（P＞0.05）；泽泻颗粒低剂量组MDA、SOD给药前后差值与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；泽泻颗粒高剂量组SOD给药前后差值与模型对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

　　2.4  主动脉形态学变化  空白对照组主动脉内膜等结构完整，内皮下无脂质沉积或斑块形成；模型对照组内膜增厚，形成明显的粥样斑块，可见大量泡沫细胞，严重者泡沫细胞崩解，胆固醇结晶形成；泽泻颗粒低剂量组的内膜增厚程度及结缔组织成分均较模型对照组轻。表明泽泻颗粒低剂量组有减轻主动脉AS形成作用，而泽泻颗粒高剂量组减轻主动脉AS形成作用不明显。

　　3  讨论
   
　　泽泻味甘咸，性寒，利湿消痰，活血化瘀，为君。白术温阳，此乃仲景“病痰饮者，当以温药和之”之意，为臣。柴胡、枳壳疏肝理气，畅达气机；何首乌补肝益血，以防柴胡之燥；毛冬青、莪术活血化瘀；莱菔子降气化痰，共为佐使。诸药合用，共奏顺气化痰、降浊化瘀之功。临床一般用于气滞痰凝、 痰浊内蕴之证。
   
　　医学认为，高脂血症是AS病变的最主要原因，内膜中脂质沉积被认为是AS病变的早期表现。近年来的实验表明，降低TC、LDL水平能明显减缓肢体和冠状动脉粥样斑块的形成［1］。目前，用于AS的模型动物有家兔、大鼠、小鼠、鹌鹑、猴和小型猪。家兔对外源性胆固醇的吸收率高达75%～90%，对血脂的清除能力低，病变近似于人体，且便于采血和饲养管理，因此家兔被认为是喂饲胆固醇饲料引起高胆固醇血症和AS形成的敏感动物［2］。用喂饲富含胆固醇饲料引起AS的造模方法最常用，但时间较长，须10周左右才能形成，而在高胆固醇喂养的同时，一次性注射牛血清白蛋白，使动脉发生免疫损伤，约1个月后便可形成类似人的AS病变。因此，我们采用［3］方法复制AS模型。本实验结果表明，泽泻颗粒具有较好的降低TC、LDL作用，且泽泻颗粒组的脂质斑块面积较模型对照组小，病变程度较轻，主动脉脂质沉积较少，故泽泻颗粒调整血脂代谢是抗AS形成的基础之一。
   
　　高脂饲料喂养的动物血中和主动脉壁SOD等抗氧化物酶降低，而相应的过氧化脂质的降解物MDA却升高［4］。本实验结果表明，给新西兰兔喂高脂饲料后，血脂升高，血清MDA亦相应升高，SOD活力却明显降低。泽泻颗粒有明显地降低血清MDA的作用，同时还可提高SOD活力，而SOD活力的提高对MDA等的清除有较大的作用。可见降低MDA及升高SOD也是泽泻颗粒抗AS的作用机制之一。
   
　　中医学认为，AS的主要病机是本虚标实，本虚是气血亏虚，标实是痰瘀互结。泽泻颗粒疏肝健脾，脾气运则气机条畅，气血得以化生以治本；温阳化饮、祛痰排瘀化浊以治其标。顺气化痰，降浊化瘀，标本兼顾，体现了中医药防治AS及其相关疾病的主要治法，为本实验提供了坚实的中医理论基础。虽然，本实验结果表明泽泻颗粒具有调节血脂和抗氧化作用的功能，但我们认为泽泻颗粒防治AS的机制及临床应用还需进一步深入的研究。

【文献】
  　　［1］ O'Brien KD,Chait A.The Biology of the artery wall in artherogenesis［J］.Med Clin North Am,1994,78(1):41-67.

　　［2］ 中华人民共和国卫生部药政局.新药（西药）临床前研究指导原则汇编(药学,药,毒学)［M］.1993:69.

　　［3］ 汪谦.现代医学实验方法［M］.北京:人民卫生出版社,1998:955-966.

　　［4］ Lankin VZ, Vikhert AM, Kosykh VA, et al. Enzymatic detoxication of superoxide anion-radicals and lipoperoxides in intima and media of atherosclerotic aorta［J］.Biomed Biochim Acta,1984,43(6):797-802.