太极丸的指纹鉴定研究
【摘要】 目的：建立太极丸的HPLC定量和TLC定性指纹特征图谱。方法：用TLC法对太极丸中的主要成分大黄、冰片进行定性鉴别；用HPLC法测定太极丸中大黄素的含量。结果：TLC特征图谱均能明显地检出大黄、冰片；HPLC法测得本品中的特征图谱可确定大黄素的含量，在0.01786～0.3572g的范围内，溶液的浓度与峰面积呈良好的线形关系，r = 0.9999，平均回收率为98.53%（n=5），RSD为1.12% 。结论：建立的指纹特征图谱能准确、快速地进行定性、定量检测，可用于该制剂的内在质量控制。
【关键词】 太极丸 薄层鉴别 HPLC法 大黄素
太极丸是由大黄、僵蚕（炒）、冰片、胆南星等八味中药组成。具有清热祛风，化痰通便之功效。临床用于乳食停滞，实火内热，痰盛抽搐，大便秘结等。为小儿常用药。原标准中只有显微和理化鉴别，不能很好控制产品质量。为有效地控制该品种质量，本文对方中主药冰片和大黄进行了TLC法的定性鉴别研究，选用大黄的有效成分大黄素做为定量指标，采用高效液相色谱法对其制剂中的主要有效成分大黄素进行了含量测定，获得了满意的HPLC定量和TLC定性指纹特征图谱，可有效地控制该产品的内在质量。其方法精密度高、重现性好，现报道如下。
1 实验材料
1.1 仪器
日本岛津LC-10ATVP 高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器，N2000浙大智达色谱工作站，BP211D德国塞多利斯天平。
1.2 试药、对照品与样品
硅胶G、H薄层板（青岛海洋化工厂）；大黄对照药材（药品生物制品检定所，供鉴别用，批号：120902-200609）大黄素、冰片对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110756-200110;110743-200504）；太极丸（吉林市双士药业有限公司提供，批号：071201、071202、071203）;甲醇为美国Fisher Scientific生产的色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 TLC定性鉴别
2.1.1 大黄的TLC鉴别
取本品6g，研细，加25％硫酸溶液10ml，置水浴中加热 1hr，加三氯甲烷15ml，加热回流30min，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加甲醇2ml 使溶解，滤过,取滤液作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.6g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIＢ）试验，吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个黄色斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。而大黄的阴性对照溶液在相应的位置上无干扰，结果见图1。
2.1.2 冰片的TLC鉴别
取本品6g，研匀，加乙酸乙酯5ml，超声处理15min，放冷，离心，取上清液作为供试品溶液。另取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIＢ）试验，吸取上述两种溶液各3l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而冰片的阴性对照溶液在相应的位置上无干扰，结果见图2。
3 含量测定
3.1 方法学考察
3.1.1测定波长的选择 取大黄素对照品适量，加甲醇使溶解，得对照品的甲醇溶液，于紫外可见分光光度计上，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果在254nm波长处有最大吸收，故选定检测波长为254 nm。
3.1.2 系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。色谱柱：VP-ODS 250L×4.6 柱号4042784；甲醇-0.1%磷酸（85：15）为流动相；检测波长为254nm。流速：1.0ml/min；柱温：室温（25℃）；进样量：对照品溶液和样品溶液各20μl；理论板数按大黄素峰应不低于2500。
3.1.3对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品10.03mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取大黄素溶液2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。（大黄素每1ml中含8l）。
3.1.4供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品1g，加硅藻土5g，研细，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次约8ml，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠脱水，三氯甲烷液移至100ml锥形瓶中，挥去三氯甲烷，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
3.1.5 阴性对照品溶液的制备及测定 为进一步考察实验设计及测定方法的可行性和专属性，取不含大黄的处方，按制备工艺及供试品溶液制备法依法制成的阴性对照品溶液。精密吸取10l注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明阴性对照品的色谱图在大黄素相应的保留时间附近无干扰峰（见图3），证明本法具有良好的专属性。
3.1.6 线性关系考察 分别精密吸取大黄素对照品溶液1、5、10、15、20l 注入液相色谱仪，以进样量（g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝3106860.415X－3690.757339、r＝0.9999，由此确定大黄素线性范围0.01786～0.3572g。
3.1.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各10l，每隔一定时间分别注入液相色谱仪，依法测定，以大黄素峰面积积分值为指标，测定其稳定性。稳定性考察结果，对照品和供试品RSD分别为0.20%、1.30%，表明大黄素的稳定性良好，8hr内测定结果可靠。
3.1.8 精密度实验 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10l，分别注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，计算，考察精密度。精密度考察结果，对照品和供试品的RSD分别为0.78%、0.65%，表明仪器、方法的精密度良好。
3.1.9 重现性实验 精密称取同一批样品（批号：071201 ）共5 份，按供试品溶液项下制备，依法独
立测定，计算样品含量，以考察本法的重现性，结果见表1。表1 重现性实验结果表明，本法测定大黄素含量的重现性良好，可以作为本品的质控指标。
3.1.10 回收率实验 精密称取同法测定的已知含量（0.2622mg·丸－1，批号：071201）样品共5份，分别精密加入对照品适量，依法测定，计算回收率。结果表明，本法平均回收率97.59%，RSD=1.44%，表明本法准确性较好，方法可行。
3.2 样品的测定
分别取批号071201、071202、071203的3批样品，照供试品制备方法制备供试液，依法测定，色谱图见图5。结果3批大黄素的含量（mg·丸－1）分别为0.264、0.256、0.260。
4 讨论
4.1 选择TLC法对制剂中的大黄、冰片进行定性鉴别，具有分离效果高、重现性好、简便、快速等特点。
4.2 采用HPLC法对其制剂中有效成分大黄素进行定量检测，结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以有效地控制该产品的内在质量。
【】
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