桦褐孔菌乙醇提取物对急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用

【摘要】  ［目的］ 探讨桦褐孔菌乙醇提取物对肝脏的保护作用. ［方法］ 腹腔注射四氯化碳豆油溶液制作急性肝损伤小鼠模型，以肝脏及脾脏质量比、血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）为指标，观察桦褐孔菌乙醇提取物对小鼠肝脏的保护作用. ［结果］ 桦褐孔菌乙醇提取物组小鼠血清中ALT,AST值明显低于模型组. ［结论］ 桦褐孔菌乙醇提取物对小鼠肝脏具有保护作用.

【关键词】  肝疾病；植物，药用；小鼠

    ABSTRACT: OBJECTIVE To  study  the  effects  of  alcohol  extracts  of  the  Inonotus  obliquus  on  hepatic  iniury. METHODS The  acute  hepatic  injury  induced  by  CCl4，and  the  coefficient  of  liver  and  spleen,  aspartate amino transferase (ALT)  and  alanine aminotransferase (AST)  in  serum  of  mice  were  determined  to  study  the  effects  of  extractions  of  the Inonotus  obliquus. RESULTS serum ALT  and  AST  in  alcohol  extractions  group  was  lower  than  that  of  other  groups. CONCLUSION The  extracts  of  Inonotus  obliquus  could  obviously  increase  protective  effect  against  liver  injury.

    Key words:liver  diseases;plants, medicinal;mice

    桦褐孔菌(Fuscoporia  obiqua  (Pers:Fr.)  Aoshi  =  Inonotus  obiquus  (Fr.)  Pilat)属担子菌纲多孔菌科［1］,分布于东北地区，常寄生于桦树上，民间广泛用于预防及消化道疾病、肿瘤、心血管疾病及糖尿病等,亦具有抗病毒作用［2,3］.桦褐孔菌多糖在1.0～16.0 mg/L质量浓度范围内对肝癌SMMC 7721细胞株的增殖有抑制作用，并表现出浓度依赖性关系［4］.本研究探讨了桦褐孔菌乙醇提取物及其精制多糖对四氯化碳所诱导的急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用.

    1  材料与方法

    1.1  材料  实验动物取昆明种小鼠，雄性，体重为20～25 g，由延边大学医学部实验动物科提供.药材与试剂:桦褐孔菌子实体采集于吉林省长白山地区,由延边大学农学院傅伟杰教授鉴定为桦褐孔菌，药材除去外层黑色部分后室温阴干2周，粉碎备用;四氯化碳为北京化工厂产品,临用时配制成1.0 g/L四氯化碳豆油溶液.仪器:5308型全自动离心机为SIGMA公司产品；SP 4430型全自动生物化学分析仪为日本Arkray公司产品；BS 224型天平为北京赛多利斯公司产品；HH-W恒温水浴箱为恒丰仪器厂产品；RE-52型旋转蒸发仪为上海青浦仪器厂产品.

    1.2  方法

    1.2.1  桦褐孔菌提取物的制备  取桦褐孔菌干燥子实体的粗粉，用950 mL/L乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取物.向药渣内加入3倍量水煎煮提取，过滤，浓缩，得水提取物.将所得水提取液加乙醇至含乙醇浓度达800 mL/L，静置，抽滤，得粗多糖，反复乙醇沉淀后将沉淀物用丙酮洗涤3次，抽滤，得精制多糖.

    1.2.2  桦褐孔菌乙醇提取物对急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用  取48只小鼠,随机分成6个组，即正常组、模型组、桦褐孔菌乙醇提取物大(500 mg/kg)、中(300 mg/kg)、小剂量组(100 mg/kg)及桦褐孔菌乙醇精制多糖组，每组各为8只.每日灌胃给予正常组和模型组小鼠50 mL/kg生理盐水，灌胃给予各给药组小鼠相应剂量的桦褐孔菌乙醇提取物，连续10 d.第10日灌胃1 h后，给予除正常组外的各组小鼠腹腔注射1 g/L四氯化碳豆油溶液10 mL/kg，17 h后颈动脉取血，分离血清，定量稀释，测定血清中ALT,AST值.剖腹采集肝脏及脾脏，用4 ℃生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取质量，肝脏及脾脏的质量比.

    脏器质量比(％)=脏器质量(g)  体重(g)×100％

    1.2.3  统计学处理  实验数据应用Graphpad  prism  program统计软件进行统计学处理，测定值用均数±标准偏差(±SD)表示，用One-way  ANOVA  and  Turkey’s  multiple  comparison  tests进行多组数据间比较.

    与正常组比较，模型组小鼠肝脏质量比明显增加,相比较具有显著性差异(P＜0.05)，脾脏质量比亦增加，但差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组比较，桦褐孔菌醇提取物大、中、小剂量组小鼠肝脏及脾脏质量比均降低，但相比较无显著性差异(P＞0.05);与模型组比较，桦褐孔菌乙醇提取物大、中剂量组及精制多糖组小鼠血清中ALT,AST值均明显降低，相比较均有显著性差异( P＜0.01，  P＜0.001);见表1.表1  桦褐孔菌乙醇提取物对急性肝损伤小鼠肝脏及脾脏质量比、ALT及AST值的影响* 与正常组比较，P＜0.05；与模型组比较，** P＜0.01，***  P＜0.001

    3  讨论

    应用四氯化碳建立急性肝损伤模型是一种经典方法，模型的病表现为肝细胞弥漫性变性、坏死及大量炎性细胞浸润，与病毒性肝炎的肝组织病理变化极相似.目前公认的四氯化碳引起肝损伤的机制是四氯化碳在肝微粒体细胞色素P450作用下转化为自由基CCl3及Cl，这些自由基可与肝细胞内的大分子物质以共价的形式结合，也可攻击细胞膜下的不饱和脂质，引起脂质过氧化，损伤肝细胞，使细胞内ALT,AST进人血液，引起血清中GPT,GOT浓度升高［5］.本实验结果表明，桦褐孔菌乙醇提取物大、中剂量组及精制多糖组小鼠血清中ALT，AST值均明显低于模型组，提示桦褐孔菌乙醇提取物及其精制多糖对肝细胞具有保护作用，但其具体的保护作用机制尚有待于进一步研究.

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  ［1］ 戴芳澜.真菌总汇［M］.北京:出版社,1979.585.

［2］ 黄年来.俄罗斯神秘的民间药用真菌——桦褐孔菌［J］.中国食用菌，2002,21(4):728.

［3］ Park YM， Won JH， Kim YH, et al..In vivo and in vitro anti-inflammatory and anti-nociceptive effects of the methanol extract of Inonotus obliquus［J］.J Ethnopharmacol,2005,101(1-3):120.

［4］ 张慧丽,杨松,李玉,等.桦褐孔菌多糖的提取及对肝癌细胞SMMC 7721的抗增殖的研究［J］.中国食用菌,2006,25(2):31.

［5］ 刘克辛.肝疾患基础及其实验动物模型［M］.北京:中国医药科技出版社,2003.44.