II类主要组织相容性复合物转录激活子（MHC2TA）-168A→G多态性与冠心病的相关性研究
作者：段成城 徐力辛 张怀勤 陶志华 杨炜宇
【摘要】 目的 研究II类主要组织相容性复合物转录激活子（MHC2TA）-168A→G多态性在汉族人群中的分布及与冠心病的相关性。方法 采用错配聚合酶链反应－限制性片段长度多态性技术（mpPCR-RFLP）,对汉族185例冠心病患者及149名正常人群MHC2TA基因-168A→G位点进行研究。结果 冠心病组与对照组均检出-168AA、-168AG和- 168GG基因型，MHC2TA -168A等位基因频率分别为0.724和0.802 , MHC2TA -168G 等位基因频率分别为0.276 和0. 198, 冠心病组MHC2TA -168G基因型频率(0.276) 明显高于对照组(0.198。OR:1.542 , 95 % CI：1.070～2.221；P＜0.05。结论 MHC2TA-168A→G多态性与冠心病有关,G等位基因可能是汉族人群冠心病的遗传危险因素。
【关键词】 冠状动脉粥样硬化性心脏病 II类主要组织相容性复合物转录激活子 基因多态性
【Abstract】 Objective To investigate the correlation between Major Histocompability Complex Class II Transactivator（MHC2TA）-168A→G polymorphism and CHD in Han Chinese population. Methods Using the methods of misparing polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (mpPCR-RFLP) , followed by DNA sequencing identification，185 CHD patients and 149 controls were analyzed for the polymorphism , genotype and allele distribution of MHC2TA-168A→G . Results Genetypes of -168AA、-168AG and - 168Gg were found both in patients of CHD and those in normal control .The MHC2TA -168A allele frequency in CHD patients and normal control was 0.724 and 0.802 respectively ,that in CHD group was much higher than that in control group(OR:1.542 , 95 % CI：1.070～2.221；P＜0.05) . Conclusions MHC2TA-168A→G polymorphism is associated with CHD risk of Han Chinese population , the G allele may serve as a genetic risk factor of coronary heart disease.
【Key words】 Coronary Heart Disease Major Histocompability Complex Class II Transactivator(MHC2TA) Gene Polymorphism
冠心病(coronary heart disease , CHD) 是指由冠状动脉粥样硬化使血管腔狭窄或阻塞, 导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病，是一种复杂的多因素致病的疾病，除了高血压、高血脂、糖尿病、吸烟、肥胖等传统的危险因素外，遗传因素在其发生中的作用已越来越受到重视。近年研究发现，炎症在冠状动脉粥样硬化板块的发生、发展和斑板块的破裂过程中起重要作用，动脉粥样硬化已被认为是一种慢性炎症的过程［1］。II类主要组织相容性复合物（MHC2TA）-168A→G 多态性(rs3087456)与MHC2TA基因的表达相关，并调控MHCII分子的表达，从而参与炎症的调节过程。MHC2TA-168A→G 多态性与心肌梗塞、类风湿性关节炎、多发性硬化相关［3］， 但其与冠心病发病是否有相关性,目前尚未见报道。本研究的主要目的是检测中国汉族人群中MHC2TA-168A→G多态性是否与冠心病的危险性相关。
1 对象与方法
1.1 对象
病例组为2005年12月至2006年12月本院住院的冠心病患者185 例(其中119 例为心肌梗塞患者) ,心肌梗塞的诊断符合WHO1999 年标准,非心肌梗塞冠心病患者均经冠状动脉造影,1支以上冠状动脉主干狭窄≥50 %；对照组149名(其中35 例经冠状动脉造影排除冠心病的同期住院患者,其余为同期体检的健康人)。两组基本情况见表1。表1 两组一般性临床资料比较（略）注：与对照组比较, P<0.05
1.2 方法
(1)基因组DNA 的提取：抽取约2ml 静脉全血。采用DNA提取试剂盒(上海晶美) 从300μl全血中，提取基因组DNA ,于- 70 ℃下保存。(2)MHC2TA基因5’非翻译区的错配聚合酶链反应扩：根据人MHC2TA基因5’非翻译区DNA 序列(GenBank GeneID: 4261)引物［3］。正向错配引物：5’-CATCGCTGATTCGCACATGTGAAA
TTAATTTCAGAGCTGT -3，反向引物5’- CTCAGCTTCCCCAAGGAT-3’,扩增产物总长度268bp。反应体系为10μl,包含两条引物各0.4μmol/L、0.2 mmol/L 的4 种dNTP ,1.5 mmol/L 的MgCl2 , 0.25 U Taq DAN聚合酶。扩增条件为:冷启动,94 ℃预变性3 min ,94 ℃变性30s ,52℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环,最后72℃延伸4min,4℃终止反应。(3)PCR扩增产物用限制性内切酶BfmI 37 ℃过夜（10～16h）酶切后，用3%的琼脂糖凝电泳判酶切。
1.3 统计学分析
采用SPSS 11. 5 软件。连续性变量采用t检验，频率采用χ2检验。基因型和等位基因与冠心病的相关性采用比数比较(odds ratio ,OR) 及其95 %可信区间(confidence intervals , CI) 来表示。并用多因素Logistic 回归来排除年龄、性别及其他危险因素的影响。
2 结果
2.1 两组MHC2TA-168A→G的基因多态性分布特点 两组AA、AG、GG、A、G频率分布见表2。检验结果:CHD组χ2=0.575,P>0.05,差异无显著性；对照组χ2=2.66,P＞0.05，差异无显著性。CHD组和对照组中多态位点不同基因型个体数的观察值和期望值差异无显著性，这表明等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性。MHC2TA-168A→G的分布差异有显著性，经χ２检验，G等位基因患冠心病的风险是A等位的1.54倍。表2 两组MHC2TA-168A→G基因多态性分布特点（略）
2.2 多因素Logistic 回归分析 见表3。除性别、年龄外，高血压等6项均为冠心病独立危险因素。表3 多因素Logistic 回归分析结果（略）
3 讨论
本研究结果显示，在中国人群中MHC2TA基因-168A→G位点多态性与冠心病有关,G等位基因可能是汉族人群冠心病的遗传危险因素，而A 等位基因可能具有保护作用。
MHC2TA最初是在MHCII类分子遗传缺陷疾病（裸淋巴细胞综合症）中克隆一个无意义突变基因时被发现的，人类的MHC基因定位于16p13染色体上，约43kb，它参与抗原呈递蛋白表达和加工处理。MHC2TA基因编码一种具有一个核酸转录激活区，4个富含亮氨酸重复区和一个GTP结合区的鹰架蛋白。该蛋白与GTP结合后转运至细胞核内，其自身并不与DNA结合而是聚集在MHC启动子上，参与几个转录调节因子的转录调节过程并起平台和陪伴分子的作用。MHC2TA基因是MHC II 基因表达的主要调控因子，正向调节MHCII基因转录的作用，在MHCII转录表达中起中枢作用，研究已经证明许多炎症和非炎症起始的疾病增加了MHCI和MHCII类分子的表达，尤其是MHCII基因影响了许多具有复杂病因学的慢性炎症性疾病，因此MHC2TA也被认为是许多具有炎症成分疾病的一个重要的候补基因［４］。国外的研究资料［５～7］均提示，MHC2TA基因在冠心病动脉粥样硬化的发生和中可能起重要作用。
MHC2TA-168A→G是人类MHC2TA基因Ⅲ型启动子的一个功能多态性，在转录水平上调节MHC Ⅱ分子的表达从而参与机体的炎症反应和免疫调节［8］。MHC2TA-168A→G多态性与类风湿性关节炎、多发性硬化和心梗这三类具有炎症成分的疾病显著相关，G等位基因显著增加了心梗和类风湿性关节炎的易感性［３，９，１０］。Yoessef等［11］研究证明他汀类降脂药通过降低MHC2TA的mRNA的水平改善自身免疫性疾病，因此，有人提出心血管疾病和自身免疫性疾病之间存在某种联系［１２］。
虽然大量的研究已经证明MHC2TA基因III型启动子基因多态性在MHCII分子表达和参与动脉粥样硬化炎症过程中起重要调节作用，但其G等位基因在致动脉粥样硬化的机制目前尚不明确。根据此前的研究，作者假设其可能的机制是： MHC2TA-168A→G变异影响了在炎症刺激下MHC2TA的转录，减弱了MHC2TA基因调节T淋巴细胞表面MHC分子的表达量和细胞分布的作用，降低了CD4+T细胞的抗动脉粥样硬化的作用；同时MHC2TA对MMPs的抑制作用降低了，而粥样斑块中MMP1和MMP9的高表达加快了动脉粥样硬化进程、加剧了粥样硬化斑块不稳定性；此外还可能通过调节其他的炎症介质如IL-1、影响他汀类降脂药的抗炎作用参与动脉粥样硬化的发生和发展。
本研究首次报道了汉族人MHC2TA 基因多态性与冠心病危险性相关，其中G等位基因可能是冠心病的一个危险因素。这有助于阐明冠心病的分子机制和发现新的预测评估冠心病危险的基因标志，对冠心病的高危人群的筛查、疾病的预防和以及进一步探求心血管疾病与炎症免疫性疾病间的关系有一定意义。但由于采用病例对照研究方法，且对象数量有限，尚须更大样本的对照实验和前瞻性实验，以进一步证实MHC2TA-168A-G多态性中G等位基因是否可作为我国汉族人冠心病发病的遗传学标志。
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