羟喜树碱对家兔毒性作用的研究
作者：严霞，王莉，孟广森，周永刚
【摘要】 目的 以健康家兔为实验对象研究抗癌药羟喜树碱的毒性作用与剂量的相关性，为进一步对羟喜树碱毒性作用的防治研究提供。方法 选择新西兰兔，经耳廓静脉连续推注羟喜树碱14 d，观察不同剂量（2.1 mg/kg 组，1?05 mg/kg 组，0?52 mg/kg 组）对家兔免疫功能、肾脏、肝脏和心脏的毒性作用及生化指标的变化。结果 三组WBC，RBC，IgG，IgM，AST，CK0?52 mg/kg 组，LDH2?1 mg/kg 组均较用药前明显下降（P<0?05和0?01）；ALT则显著增高（P<0?01）用药后21 d 时PLT与LDH1?5 mg/kg 组较用药前明显下降（P<0?05和0?01）。用药后14，21 d 时LDH0?52 mg/kg 组较用药前明显下降（P<0?05和0?01）。结论 羟喜树碱可引起家兔明显的肝组织、免疫功能、造血功能的损伤和轻度心脏毒性。但对其损伤机制有待进一步研究。
【关键词】 羟喜树碱；免疫抑制；肝毒性；肾毒性；心脏毒性
羟喜树碱(10?hydroxycamptothecine，HCPT)是临床上常用的广谱抗癌药，主要用于原发性肝癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、非小细胞肺癌及直肠癌的[1]。本文以新西兰兔为实验对象，采用三种剂量，观察剂量与疗效、毒性作用之间的关系，为临床控制HCPT的 毒性作用提供参考。
1 材料与方法
1．1 实验动物与分组
新西兰兔(南京金陵种兔厂提供)24只，雌雄各半，体质量1．9~2?2 kg，随机分为高、中、低三组，每组8只，即：2．1 mg/kg组、1．05 mg/kg 组、0．52 mg/kg 组，各组自由进水和饮食，环境温度为23 ℃。给药前，每组抽取耳廓静脉血，进行给药前生化指标检测，检测值作为空白对照，然后经兔耳廓静脉推注羟喜树碱注射液（长春天诚药业有限公司生产；批号：20031117），1次/d，连续14 d，分别于给药后7 d，14 d 抽取耳廓静脉血进行生化指标检测，并于停药后7 d 再次抽血进行检测，观察家兔恢复情况。
1．2 检测指标及方法
（1）血清IgG及IgM水平 采用美国An?360特定蛋白分析仪测定，试剂盒为BeeKman．coulter生产。（2）血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸激酸激酶(C K)、尿素(BUN)、肌酐(CRE)水平采用丁酮肟法和酶法。试剂盒分别为上海长征、威特曼、北京中生试剂厂提供。（3）白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PET)水平抽取家兔耳廓静脉血约0．5 ml 于抗凝管中，采用法国ABX血球计数仪测定。
1．3 统计学方法
采用3P87软件进行各组间均值的方差分析及组间的比较检验。
2 结果
2．1 不同剂量HCPT对家兔WBC，RBC，PLT的影响
从表1可见，2．1 mg/kg，1．05 mg/kg，0．52 mg/kg 组WBC数在用药后第7，14，21天均明显降低，与用药前比较有显著性差异（P均<0．01）；随着用药时间的延长RBC数亦逐渐减少，在用药后第7，14，21天时，与用药前比较有显著性差异(2．1 mg/kg 组：P<0．05和<0．01；1．05 mg/kg 组：P均<0．05；0．52 mg/kg 组：P<0．05和<0．01)；2．1 mg/kg，1．05 mg/kg，0．52 mg/kg 组PLT值在用药后第7，14天时无显著性差异，2．1 mg/kg，0．52 mg/kg 组在第21天时其值下降与用药前比较有显著性差异（P<0．01和<0．05）。表1 不同剂量HCPT对家兔RBC，WBC，PCT的影响（略）
2．2 不同剂量HCPT对家兔血清BUN，CRE的影响
从表2可见，2．1 mg/kg，1．05 mg/kg，0．52 mg/kg 组BUN，CRE水平无显著变化，与用药前比较无显著性差异（P均>0．05）。表2 不同剂量HCPT对家兔血清BUN，CRE的影响（略）
2．3 不同剂量HCPT对家兔血清ALT，AST的影响
从表3可见，血清ALT在用药后第7，14，21天时，2．1 mg/kg，1．05 mg/kg 组显著增加，与用药前比较有显著性差异(2?1 mg/kg 组：P均<0．01；1．05 mg/kg 组：P<0．05和<0．01)，0．52 mg/kg 组用药后第21天时，与用药前比较有显著性差异(P<0．01)。各组AST水平显著下降，第7，14，21天与用药前相比有显著性差异（2.1 mg/kg 组：P<0．05和<0．01；1．05 mg/kg 组：P<0．05和<0?01；0．52 mg/kg 组：P均<0．01)。表3 不同剂量HCPT对家兔血清ALT,AST的影响（略）
2．4 不同剂量HCPT对家兔血清LDH，CK的影响
从表4可见，用药后各组LDH值均显著下降，2．1 mg/kg 组在7，14，21 d 时与用药前比较均有显著性差异(P<0．05和<0．01)，1?05 mg/kg 组第21天时有显著性差异（P<0．01），0．52 mg/kg 组第14，21天时有显著性差异（P<0．05和<0．01）。0．52 mg/kg 组CK值较用药前显著下降(P<0．05和<0．01），2．1 mg/kg，1．05 mg/kg 组CK水平无显著变化（P>0．05）。表4 不同剂量HCPT对家兔血清LDH，CK的影响（略）
2．5 不同剂量HCPT对家兔血清lgG，IgM的影响
从表5可见，IgG水平较用药前下降，2．1 mg/kg，1?05 mg/kg，0．52 mg/kg 组第7，14，21天时与用药前比较均有显著性差异（P均<0．01），IgM值亦显著下降，2．1 mg/kg，1．05 mg/kg，0?52 mg/kg 组第7，14，21天时与用药前比较均有显著性差异（P均<0．01）。表5 不同剂量HCPT对家兔血清IgG，IgM的影响（略）
3 讨论
HCPT是从珙桐科植物喜树中提取出的一种生物碱，研究证实为DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，可通过抑制DNA的复制而抑制细胞增殖[2]。国外学者研究表明，HCPT可选择地抑制拓扑异构酶，直接作用于细胞DNA合成(S期)，阻止细胞进入有丝分裂期(M期)[3]。HCPT在体内代谢很快，T1/2只有5 min [4]，为了延长其T1/2，提高抗肿瘤作用，许多学者开始探讨HCPT新剂型的改造[5]HCPT与铂类、鬼臼类、嘧啶拮抗剂、阿霉素等联合应用，有增加疗效的协同作用而广泛应用于各种恶性肿瘤的化疗[6]。国外曾有HCPT致骨髓抑制、呕吐等报道[7]但国内以家兔为实验对象检测HCPT的毒性未见有报道。文献[8]报道，增加剂量及延长用药时间可提高抗癌效果。本实验结果表明，WBC，IgG，IgM与剂量呈显著依赖性，其他指标与用药时间呈显著依赖性，提示：增加用药剂量和延长用药时间，在提高疗效的同时，其毒性作用也不同程度增加，应在耐受剂量内使用，连续用药不宜超过2个疗程。因家兔缺少呕吐反应，故本实验未对上消化道毒性反应进行评价。对HCPT毒性损伤的机制还有待进一步研究。
【文献】
/[1/] 管忠震.羟喜树碱需进一步规范化临床研究/[J/].癌症,2001.20(12):1333-1334.
/[2/] 沈瑞耀,石炳毅,佟建秋,等.羟喜树碱对异基因大鼠心脏移植中细胞因子mRNA的影响/[J/].解放军医学杂志,2002,27(10):852-854.
/[3/] 蔡 明,石炳毅,莫春柏,等.10?羟喜树碱对异抗原刺激下大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用/[J/].解放军医学杂志,2002,27(10):860-861.
/[4/] 何 文,龚 纯,吴 莹.壳聚糖分子参数对羟喜树碱包衣脂质体体外性质的影响研究/[J/].药学杂志,2006,26(18):928-931.
/[5/] Williams J,Lansdown R,Sweitzer R,et al.Nanoparticle drug delivery system for intravenous delivery of topoisomerase inhibitors/[J/].Control release,2003,91(1-2):167-172.
/[6/] 吴 江,袁志敏,林运政,等.实验性艾氏腹水癌小鼠羟喜树碱(拓僖)时辰给药疗效观察/[J/].中国肿瘤临床,2004,31(21):1215-1217.
/[7/] Hatefi A,Amsden B.Camptothecin delivery methods/[J/].Pharma Res,2002,19(10):1389-1399.
/[8/] 张 力,李 苏,廖 海,等.羟喜树碱I期药代动力学及人体耐受性临床研究/[J/].癌症,2001,20(12):1391-1395.
