银杏叶提取物对大鼠急性胰腺炎保护作用的机制探讨
作者：牛万成，李玺，刘焰明，张云民，陈党英
【摘要】 目的 探讨银杏叶提取物（EGb）对大鼠急性胰腺炎的保护作用及机制。方法 SD大鼠48只，随机分为对照组、胰腺炎组和组，每组再分为4，8 h 亚组。对照组仅行开关手术，胰腺炎组以牛磺胆酸钠制模，治疗组以EGb干预，光镜观察胰腺组织病理改变，免疫组化法测胰腺组织肿瘤坏死因子（TNF?α）、干扰素（IL?1β）。结果 治疗组病理变化较胰腺炎组明显减轻，TNF?α，IL?1β含量显著低于胰腺炎组(P<0.01)。结论 EGb可能通过抑制TNF?α，IL?1β的产生减轻胰腺炎症。
【关键词】 胰腺炎；银杏叶提取物；肿瘤坏死因子；干扰素
Research on the Mechanism of EGb's Effects of Protection in Rat's Acute Pancreatitis
Abstract： Objective To investigate the protective effect of the extract of ginkgo biloba (EGb) on the acute pancreatitis in rats and its possible mechanism. Methods Forty?eight SD rats were divided into three groups at random, i.e. control group, pancreatitis group and EGb group. The pathologic changes of pancreatic tissue were observed by optic microscope. The expressions of tumor necrosis factor (TNF)?α and interleukin (IL)?1β in pancreatic tissue were determined. Results Histomorphological change of pancreas in the EGb group was much slighter than that in the pancreatitis group. The expressions of TNF?α and IL?1β were significantly lower in the EGb group than those in the pancreatitis group (P<0.01). Conclusion EGb has a protective effect against acute pancreatitis in rats.
Key words： pancreatitis; extract of ginkgo biloba; tumor necrosis factor?α; interleukin?1β
TNF?α，IL?1β具有广泛的生物活性，是引起组织细胞损伤的重要细胞因子，研究表明两者参与急性胰腺炎的发病机制。近年国外已有用银杏叶提取物（EGb）治疗实验性胰腺炎的成功报道[1]，但急性胰腺炎时应用EGb对胰腺组织TNF?α，IL?1β的表达有无影响尚未见报道。本实验旨在通过观察EGb对大鼠胰腺组织TNF?α，IL?1β表达的影响探讨EGb对大鼠急性胰腺炎的保护作用及机制。
1 材料与方法
1．1 动物模型与分组
将SD大鼠48只（体质量200~250 g，徐州医学院实验动物中心提供）随机分为对照组、胰腺炎组和治疗组，每组再分为4，8 h 亚组（每亚组8只）。对照组仅行开关手术，胰腺炎组经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠（2 ml/kg，美国Sigma公司）制作胰腺炎模型，治疗组在胰腺炎模型基础上予EGb干预。术前2 d，治疗组给予EGb（金纳多注射液20 mg/kg，德国威玛舒培博士药厂）腹腔内注射，每天2次，手术结束时，再给予EGb 1次；对照组、胰腺炎组同时间点给予等量生理盐水。术后按设计时间点处死大鼠，取胰腺标本分别送检。
1．2 组织病检查
切取胰腺标本制成石蜡切片后行HE染色，光镜下观察胰腺组织病理学变化。
1．3 TNF?α，IL?1β表达检测
免疫组化染色法（试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司）测胰腺组织TNF?α，IL?1β表达，结果应用机图像灰度分析，以积分光密度值（IOD）作计量分析，每张片选四个视野。
2 结果
2.1 组织病结果
对照组胰腺肉眼及镜下结构无明显异常。胰腺炎组4h时肉眼观胰腺明显肿胀，镜下间质血管扩张、淤血，灶状胰腺腺泡与脂肪坏死，较多炎性细胞浸润；8h时肉眼观胰腺出血坏死，镜下见大量炎性细胞浸润，红细胞渗出，胰腺细胞结构消失。组4h时肉眼观胰腺轻度肿胀，镜下见间质血管扩张，淤血，点状出血与坏死区，少量炎性细胞浸润；8h时肉眼观胰腺肿胀明显，无出血坏死，镜下见较多炎性细胞浸润，少量红细胞渗出，点状坏死。
2．2 免疫组化测定
TNF?α，IL?1β检测结果（IOD）值分别见表1，表2。表1 各组TNF?α的IOD值 （略）表2 各组IL?1β的IOD值（略）
3 讨论
急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞、血管内皮细胞、胰岛细胞均能产生TNF?α及IL?1β，两者均是重要的炎症介质，在急性胰腺炎的发病及其全身并发症发生过程中起着重要作用。因此被作为急性胰腺炎发病后反映其严重程度的重要的早期指标[2]。两者具有趋化性，能促进中性粒细胞的释放，诱导单核细胞和多核粒细胞趋化浸润到炎症局部，并且进一步促进TNF?α和IL?1β的释放，形成恶性循环。EGb主要有效成分24%为类黄酮和6%为萜内酯，前者有抗氧自由基的作用，后者有拮抗血小板活化因子(PAF)的作用，两类有效成分有交叉和协同作用。大量实验研究表明，EGb对心、脑、肝和肾等许多器官的缺血再灌注损伤均有良好的保护作用，也有研究表明EGb对重症胰腺炎胰腺细胞凋亡有抑制作用[3]，但胰腺炎时EGb对细胞因子的影响如何尚未见报道。本实验结果显示：胰腺炎组TNF?α，IL?1β表达较对照组明显增加（P<0.01），差异有统计学意义，说明TNF?α，IL?1β与急性胰腺炎发病有密切关系；治疗组胰腺组织病理学变化较胰腺炎组明显减轻，说明EGb对急性胰腺炎有治疗作用；同时治疗组TNF?α，IL?1β表达较胰腺炎组明显减少（P<0.01），说明EGb对急性胰腺炎的治疗作用可能与抑制TNF?α，IL?1β的产生有关，至于EGb抑制TNF?α、IL?1β的产生的具体过程有待进一步研究，同时EGb对急性胰腺炎的治疗作用的机制可能是多方面的。
【】
/[1/] Yamaguchi Y,Matsumura F,Liang J,et al.Platet?activating factor antagonist(TCV?309) attenuates the priming effects of bronchoalveolar macrophages in cerulean-induced Pancreatitis rats/[J/]. Pancreas,1999,18:355-363.
/[2/] 朱维铭,黎介寿. 重症急性胰腺炎与促炎细胞因子和炎性介质的关系/[J/].医学研究生学报, 2000,13(2):106-110.
/[3/] 许利剑,苗 毅,张 平.银杏叶提取物对重症胰腺炎胰腺细胞凋亡作用机制的探讨/[J/]. 江苏医药杂志,2002,29(7):502-504.
