重组人干扰素α?2a口含片剂的豚鼠毒性试验
作者：李芳 赵晓青 姜志恒 赵亚力 周捷 许彦国 程晓耕
【摘要】 目的 评价重组人干扰素α?2a（rIFNα?2a）口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官的毒性作用。方法 设试验组、赋形剂组及空白对照组，每组用6只豚鼠，试验组口含rIFNα?2a片剂(300 IU/片)，1片/d，含5~7min，连续含服6 d。赋形剂组口含乳糖颗粒片剂（0.15 g/片），方法同上。空白对照组未含任何物质。临床观察6 d 后全部活杀。剖检口腔黏膜、咽部黏膜及内脏等器官，10%甲醇液固定，常规病理制片，HE染色，光镜观察。结果 试验组与赋形剂组和空白对照组之间的组织病所见相似，均未见明显毒性病理损伤。结论 rIFNα?2a口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用，证实rIFNα?2a口含片剂安全可靠。
【关键词】 rIFNα?2a； 口含片；豚鼠；毒性试验
Abstract： Objective To evaluate the toxicity of recombinant interferonα?2a (rIFNα?2a) buccal tablets to the oral mucosae and internal organs of guinea pigs. Methods Eighteen guinea pigs were divided into trial group, parallel control group and blank control group (n=6/group). The animals in the trial group were given rIFNα?2a buccal tablets (300 IU/tablet) and those in the parallel control group given lactose tablets (0.15 g/tablet) once a day for six days. The animals in the blank control group were given no tablets. All the guinea pigs were killed, and then the oropharyngeal mucosae were taken out as well as the internal organs. The specimens were fixed with 10% formalin and prepared into pathological slices which were stained by HE staining and observed by optical microscopy. Results No significant histopathological changes were observed in the mucosae or the organs of the animals in the three groups.Conclusion It is indicated that rIFNα?2a buccal tablets show no significant toxicity to oral mucosa and internal organs of guinea pigs and prove safe.
Key words： recombinant interferonα?2a; buccal tablet; Guinea pig; toxicity
低剂量干扰素口含片经口腔黏膜给药后吸收快[1]，具有一定的抗流感病毒和免疫调节作用[2]。据报道临床已用于慢性病毒性肝炎、慢性复发性口腔溃疡及反复呼吸道感染等疾病，并对神经和肌肉疾患也有一定疗效[3~6]。为保证人类临床用药的安全性，应用豚鼠进行了rIFNα?2a口含片剂毒性试验，观察rIFNα?2a口含片剂经口腔黏膜途径给予豚鼠后可能产生的毒性作用，为rIFNα?2a口含片剂临床前安全性评价提供实验病理学资料。
1 材料与方法
1．1 材料
rIFNα?2a口含片剂：长春生物制品研究所研制，批号950103，效价300 IU/片，失效期2年。实验动物： 健康豚鼠18只，体重250~350g，雌雄各半，长春生物制品研究所实验动物室提供。
1.2 方法
试验分组与处理：18只豚鼠随机分成3组，每组6只，雌雄各3只。试验组口腔内含服rIFNα?2a片剂（300 IU/片），每只豚鼠每日口含1片，每次含5~7 min，共含6 d。赋形剂组口腔内含乳糖颗粒片剂（0.15 g/片），每只豚鼠每天口含1片，每次含5~7 min，共含服6 d。空白对照组口腔内未含服任何物质。观察上述3组豚鼠精神状态，饮食粪便、行为活动、被毛及口腔有无流涎等症状，共观察6 d。全部豚鼠于6 d 后活杀，解剖并肉眼检查口腔黏膜、咽部黏膜、喉部黏膜及内脏等器官，整个头部固定于Bouin氏液中，内脏等器官固定于10%甲醛液中。从颊、软腭、硬腭、舌根、舌背、口咽、喉咽、心、肝、脾、肺、肾、胃、食管和小肠等部位取材，常规脱水、浸蜡、包埋、切片，HE染色，OlympusAH?2光镜观察并拍照。
2 结果
2.1 临床表现
试验组、赋形剂组和空白对照组全部豚鼠精神状态良好，饮食粪便、行为活动、对外界刺激反应均正常，无被毛蓬松，无倦怠，无口腔流涎等症状。
2．2 大体剖检
空白对照组与赋形剂组：肉眼检查口腔黏膜、咽部黏膜、喉部黏膜及内脏各器官均未见异常；实验组：肉眼检查口腔黏膜、咽部黏膜、喉部黏膜及心、肝、脾等内脏各器官与对照组相似，均未见明显区别。
2．3 组织病变化
显微镜下观察，三组动物口腔颊黏膜、软腭黏膜、硬腭黏膜、舌根黏膜、舌背黏膜、口咽黏膜、喉咽黏膜、食管黏膜、胃、十二指肠及空肠黏膜，均未见异常改变，即黏膜未见充血、出血及水肿，未见细胞变性、坏死、炎症反应、溃疡、萎缩、肥大、化生及异常增生等病变。心、肝、脾、肺和肾也未见充血、出血、水肿、细胞变性、坏死、炎症反应及异常增生等病变。试验组、赋形剂组与对照组无明显差别。
3 讨论
本次试验临床观察结果显示，对照组、赋形剂组和空白对照组全部豚鼠临床表现均正常，未见差异；组织病理学结果证实，实验组豚鼠口腔黏膜、咽部黏膜、喉部黏膜及心、肝、脾等内脏各器官，均未见由rIFNα?2a口含片剂所引起的毒性病理损伤，与对照组和赋形剂组相比，大体剖检及组织病理学所见相同，未见明显差异。上述结果证实，rIFNα?2a口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏各器官未见明显毒性作用。
1990年初国外已有rIFN注射剂，主要用于肿瘤、慢性病毒性肝炎、其他病毒性感染性疾病及自身免疫机能紊乱等疾病的。但注射用rIFN大剂量使用时副反应也加大，如发烧、神经系统毒性等[2]。所以限制了rIFN注射剂的临床应用。低剂量干扰素口含片剂用于治疗乙肝、丙肝等病毒性疾病及对免疫反应的调节作用已有报道，其作用机制目前认为，经口腔黏膜途径含服干扰素，一方面干扰素可被口腔黏膜血管直接吸收，另一方面低剂量干扰素与口腔、腭咽部干扰素受体结合，激活口咽部淋巴和类淋巴组织，上述组织被干扰素激活后产生某些介质，并通过细胞间的直接接触释放介质，从而将信息放大传递到其他淋巴组织以及全身，产生系统性免疫激活效应[3]。
低剂量rIFNα?2a口含片剂，能起到预防病毒感染、调节机体免疫功能紊乱状态的作用，并且具有一定的稳定性和安全性[2~4]。经口腔黏膜途径给予豚鼠后，对豚鼠口腔黏膜及内脏均未见明显毒性作用，本次毒性试验病理结果进一步证实rIFNα?2a口含片剂是一种安全可靠的药物。
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