一肾一夹肾血管性高血压动物模型的制作
作者：孙琪 黄荣桂 郑兴中 梁萌
【摘要】 目的 研究一肾一夹（1K1C）肾血管性高血压动物模型的制作。方法 选用200~220 g 体重的SD大鼠，制作1K1C高血压大鼠模型。随机分为正常对照组、单肾对照组(1K)、1K1C组、1K1C+BEA组。使用药物2?溴乙胺氢溴酸盐(BEA)破坏肾髓质。采用尾动脉袖套法测量各组大鼠血压的变化。结果 1K组大鼠血压4周后有明显升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），但是1K组大鼠与正常对照组大鼠4周后血压远未达到肾血管性高血压入选标准；1K1C组大鼠血压在1周后开始升高，2周时已达到本实验高血压入选标准；1K1C+BEA组血压升高更明显，4周时血压与1K1C组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本方法制作肾血管性高血压模型简单易行，成功率约80%。
【关键词】 一肾一夹；高血压；动物模型
Abstract： Objective To study the preparation of one?kidney and one?clip (1K1C) renovascular hypertension animal model. Methods The animal models of 1K1C renovascular hypertension were established with Sprague?Dawley rats (200-220g per rat). The rats were randomly divided into four groups, i.e. normal group, one?kidney (1K) group, 1K1C group and 1K1C+BEA group (BEA=2?bromoethylamine hydrobromide). The renal medulla was destroyed by BEA. Blood pressure was measured with tail?cuff method by rat blood pressure meter of type RBP?1. Results Compared with normal control group, the blood pressure in 1K group obviously increased (P<0.05), but four weeks later the blood pressure in both the groups did not achieved the standard of renovascular hypertension. The blood pressure in 1K1C group began to increase one week later and achieved the threshold standard of renovascular hypertension two weeks later. Compared with 1K1C group the blood pressure in 1K1C+BEA group increased more obviously after four weeks (P<0.05). Conclusion Our making method to rat model of renovascular hypertension is simple and easy to operate. The success rate is about 80%, similar with those in the previous reports.
Key words： one?kidney one clip; hypertension; animal model
肾血管性高血压(renovascular hypertension)是指单侧或双侧肾动脉的主干或其分支狭窄，使肾血流量减少，导致肾缺血引起的高血压，为继发性高血压最常见的病因。我国肾血管性高血压占高血压人群的5%~7%[1]，肾血管的损害尚可引起受累肾尿的生成及内分泌功能异常。研究方法常以大鼠为实验动物，其动物模型制作有两种类型：二肾一夹(2K1C)型(一侧肾动脉狭窄，保留对侧肾脏)，其高血压早期系“肾素依赖型”；一肾一夹(1K1C)型(一侧肾动脉狭窄，对侧肾切除)，其高血压系“容量依赖型”。钳夹肾动脉的方法有丝线结扎、U型银夹。但丝线结扎对于以后去夹不利，而银夹不易制得，其大小不易控制。本研究傅继华等[2]的方法加以改进制作“Ω”形小夹，小夹内径0.4 mm，制作简单，直径易控制，术后成功率较高，且高血压稳定。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
成年雄性SD大鼠，体重200~220 g，福建医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(闽)2004?0002。
1.1.2 动脉夹子制作
将铝制易拉罐刮掉外表油漆，剪成长2.0 cm，宽1.0 mm 的长条，将一个4号针头(直径0.4 mm)放入长条中央，用镊子小心压制成小环，小环内径与4号针头相同。(见图1)
1.2 实验分组
A：正常对照组(9只)，B：1K对照组(9只)，C：1K1C组(9只)，D：1K1C+BEA组(5只)。SD大鼠随机分为对照组与模型组，造模后再随机分为C、D组。B组只游离左肾动脉而不套钳夹，同时切除右肾，C组钳夹左肾动脉，同时切除右肾造模，1周后一次性腹腔注射（ip）生理盐水，D组同C组方法造模，1周后一次性ip药物BEA(100mg/kg)。
1.3 实验方法
大鼠分笼饲养于室温、12 h 日光照、45%~55%相对湿度的环境中，进食标准普通颗粒饲料，自由饮水。预饲养1周后，禁食12 h，不禁水，戊巴比妥钠30 mg/kg ip麻醉，仰卧固定于操作台上，腹部备皮，分别用1%碘酒和75%乙醇消毒皮肤，铺上无菌中间开孔的纱布，于剑突下1.5 cm 沿腹正中线依次切开皮肤、正中白色肌腱，剪开腹膜进入腹腔。用温热盐水无菌纱布包裹左侧内脏并翻向体外，暴露左肾后沿腹主动脉用无齿小弯镊与消毒棉签钝性向下分离，在左肾静脉下方游离出左肾动脉，将一内径0.4 mm 的铝质小夹呈水平方向套入左肾动脉起始处，左肾动脉落入铝质小夹顶部的小孔内，钳闭夹子两端造成狭窄，离小夹0.5 cm 处用丝线结扎，剪去小夹多余部分并将尾端朝上避免压迫左肾静脉。将左侧内脏仔细放回腹腔，再用同样方法暴露右肾，分离右肾周围脂肪组织，避免损伤右侧肾上腺，近肾脏侧结扎右肾蒂后将右肾切除，内脏仔细复位后逐层缝合切口，待动物清醒后放入单笼饲养。正常对照组仅游离左肾动脉，不予狭窄；单肾对照组游离左肾动脉，不予狭窄，同时切除右肾。
1.4 血压测量
采用RBP?1B型大鼠血压心率测量仪(北京中日友好临床医学研究所生产)，测定大鼠尾动脉血压，先将大鼠放入加热箱中加热5 min，待尾部温热时将大鼠取出固定测量。术前测1次基础值，术后每周测1次，每只大鼠测3次取平均值。
2 结果
2.1 各组大鼠血压值
由表1可见1K组大鼠血压4周后明显升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，但是1K组大鼠与正常对照组大鼠4周后血压远未达到肾血管性高血压入选标准；1K1C组大鼠血压在1周后开始升高，2周时已达到本实验高血压入选标准；lKlC+BEA组用药后血压升高更明显，4周时血压与1K1C组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。表1 各组大鼠血压值（略）
术前大鼠尾动脉血压平均值为（96.56+6.23）mmHg（1mmHg=0.133Kpa），1K1C组术后2周血压升高达到（159.78+10.46）mmHg，术后4周血压达到（185.68+14.68）mmHg。入选标准为4周后血压≥150 mmHg，且4周后去夹时肾脏无梗死瘢痕[6]。
由图2可见各组大鼠血压平均值随时间的变化趋势，1K组大鼠血压有升高趋势，1K1C组大鼠术后血压快速升高，1K1C+BEA组血压升高更明显。
2.2 剖检
术后4周去夹时打开腹腔，未见钳夹脱落，小夹与周围组织轻度粘连，肾脏呈浅红色轻度缺血状。
3 讨论
本方法制作肾血管性高血压模型简单易行，成功率约80%，与报道接近[3]。本方法的优势在于：经腹正中线切口，可以避开血管，减少动物术中失血；一次开腹将一侧肾动脉钳夹后同时切除对侧肾脏，避免两次麻醉，两次手术创伤。肾动脉钳夹缩窄环的内径在一定范围内与血压增高程度成反比，内径过小，阻断肾血流供应导致肾缺血梗死。关于钳夹内径，我们经预试验筛选，选择0.4 mm 比较合适。用金属环取代银夹，因金属环的直径易控制，制作简单，我们用4号针头(其直径0.4 mm)放在金属环的中央小心钳夹制成，小环的内径与4号针头直径相同。
我们体会手术成功的要点为：术前动物手术室应彻底清洁，经紫外线消毒，手术器械与敷料高压灭菌或器械在75%乙醇内浸泡30 min，临用时用煮沸生理盐水冲洗，用毕仍浸入75%乙醇内；术中严格无菌操作；操作时动作轻柔而迅速，仔细分离肾动脉，套动脉夹时避免将动脉上未分离干净的筋膜套入环形夹内造成肾缺血梗死。用温热盐水纱布保护内脏并仔细归位，防止胃肠扭转出现肠梗阻，术后动物清醒后应暂禁食1 d，避免肠道功能未恢复前过早进食。术后保持室温恒定，避免动物室闷热、气压突然改变或气温突然下降导致动物死亡。保持饲养笼具及垫料清洁干燥防止感染。术后动物恢复1周待手术切口愈合后再测量血压，避免测量血压时动物挣扎导致腹部切口裂开。初学模型制作时，术后出血是大鼠死亡最常见的原因[4]。由于肾动、静脉紧贴伴行，因此，钝性分离动静脉之间的筋膜时，需拨开静脉，避免损伤静脉，减少和避免术后出血是模型成功制作的关键[5]。可以肯定的是，高血压大鼠对温度、气压、通风条件等环境条件变化变得异常敏感。因此，摸索出一套饲养高血压大鼠的环境条件，对于成功制作高血压动物模型至关重要。
1K1C高血压大鼠模型相当于人类单肾动脉狭窄的高血压模型(肾移植后高血压)或者双侧肾动脉狭窄[6]，其形成机制尚未完全清楚，一般认为此种高血压模型的特点是水钠潴留和容量依赖性肾功能，高血压的维持是依赖水钠潴留与肾素?血管紧张素系统(RAS)激活之间的复杂相互关系[7]。然而，阻断RAS对1KlC高血压大鼠的血压只有很小的作用[8]，而且1K1C高血压动物以及肾移植后高血压患者若给予血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)通常会导致急性肾衰竭[8]，这种肾功能恶化在去除肾动脉钳夹后仍不能恢复。
【文献】
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