关节炎丸对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的实验研究

【摘要】  目的：探讨关节炎丸类风湿性关节炎的作用机制。方法：制作实验性关节炎大鼠(Adjuvant Arthritis,AA)动物模型，观察关节炎丸对大鼠血浆TNF?α及IL?1β影响，并与雷公藤阳性对照组进行比较。结果：关节炎丸抑制炎症组织中TNF?α及IL?1β优于雷公藤组。结论:关节炎丸通过影响炎症介质的释放而产生抗炎镇痛和抗风湿作用。

【关键词】  关节炎丸；类风湿性关节炎；佐剂

     类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性全身性自身免疫性疾病，它具有表现复杂、反复发作、缠绵难愈，致残率高的特点，为临床疑难杂病之一。导师牟慧琴教授近十年来一直从事于张仲景经典著作《金匮要略》教学与内科临床，主攻疑难杂证，在风湿病、类风湿疾病、老年性腰腿病、面瘫、哮喘病、神经官能症、妇女更年期疾病、眩晕病、萎缩性胃炎等方面都有较为深刻的认识，尤其在诊治类风湿性关节炎方面积累了丰富的经验并颇具特色，导师通过对临床经验的研制出便于RA患者服用并可巩固疗效的中成药“关节炎丸”，在临床中疗效显著。经初步药效学研究表明，关节炎丸对实验性佐剂性关节炎有明显的抗炎镇痛作用，为进一步探讨关节炎丸治疗RA的作用机理,我们用Wistar大鼠制作AA模型,观察关节炎丸抗风湿的作用机理，现将实验资料报告如下：

    1  材料与方法

    1.1  实验动物与分组  Wistar大鼠50只，雌雄各半，年龄为45-50d，体重(200±20)g，购于甘肃中医学院动物科研实验中心(实验动物质量合格证编号和实验动物使用许可证号：SCXK(H)2004-0006-0000005)，动物饲料：由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。50只大鼠雌雄分开，于实验前驯养1周后，按体重编号，随机分为5组(每组雌雄各半)：正常对照组(正常组n=10);模型对照组(模型组,n=10)；关节炎丸高剂量治疗组(GJYWH组，n=10)；关节炎丸低剂量治疗组(GJYWL组,n=10)；雷公藤治疗组(雷公藤组,n=10)。

    1.2  药品与试剂  关节炎丸由制附片、制川乌、细辛、党参、黄芪、桂枝、白芍、甘草等配伍组成,其中制附片、制川乌、细辛应先煎30min后再把其余药放入一起水煎、过滤并加热浓缩致相应浓度。雷公藤片剂由湖南协力药业有限公司生产(批号:Z43020138，国药准字)，给药时临时研粉调制，将5mg的雷公藤片研末再加入50ml的水配成溶液。完全福氏佐剂(CFA)购于Sigma公司；TNF?α试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供(生产批号：20060725)，IL?1β由北京华英生物技术研究所提供。

    1.3  AA大鼠模型制备与检测方法  在实验第一天进行造模:用75%酒精对除正常对照组外大鼠右足跖进行消毒，将CFA0.1ml/只，注射于大鼠右足跖皮下(于后肢足跖皮内注射FCA0.1ml的量能明显提高 AA大鼠造模的成功率，较以前报道的FCA0.05ml注射量，背部多点注射法等有较大的改进［１］)。正常对照组大鼠则注射生理盐水0.lml/只。各组动物最后一次灌胃后，禁食不禁水24h后全部处死取材。血清标本的制备：股动脉采血5ml，37℃水中静置0.5h，以3000转/min,离心15min，取上清液放入尖底试管中，置于4℃冰箱内保存，送兰州解放军总院药物研究所待测TNF?α及IL?1β。

    1.4  给药方法  给药第3d起开始定时灌胃给药，每日1次,根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值，关节炎丸浓煎液GJYWH组每次3ml/只，GJYWL组每次1.5ml/只,灌胃前将药液静置到室温，摇匀给药；雷公藤多甙片溶液研制后给予每次2ml/只，摇匀给药；正常组、模型组给予等量生理盐水。

    1.5  统计学处理  对所有符合实验方案要求的数据均输入机,用SPSS11.0统计软件处理，实验数据以均数±标准差(±s)表示，根据方差齐性采用单因素方差分析(One?Way?ANOVN)P＜0.05有统计学意义。

    2  结果

    各组大鼠血清IL?1β、TNF?α含量的比较(见表1)注：与空白组比较#P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05。

    3  讨论

    　　RA的病因与发病机制目前尚未完全阐明,但随着细胞分子学和免疫学的深入研究,RA动物模型的建立,发现了细胞因子、TH1/TH2细胞平衡、性激素等在RA的发病中起重要作用。其中人们已证实TNF?α及IL?1β在RA进展中起着决定性作用［2］：TNF?α是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子,能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶,导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏,TNF?α既能刺激IL?1β,IL?6,IL?8的产生,又能刺激其自身的合成，在RA的细胞因子中起中心作用；IL?1分为IL?1α和IL?1β,主要由巨噬细胞分泌，内皮细胞和淋巴细胞也能产生，能诱导一系列全身的炎症反应，包括引起发热和消瘦,合成急性期蛋白，也可对软骨和骨基质代谢产生局部作用。TNF?α主要导致RA初期的关节肿胀,而软骨的侵蚀则由IL?1β介导且和免疫复合物有协同效应［3］。TNF?α是一个主要的炎性因子，IL?1是关节组织破坏的决定性细胞因子［3］。故在对RA的中，必须对IL?1，TNF?α实行双重阻断，才能阻止关节的破坏。我们在实验中发现，造模后第28d，关节红肿明显,TNF?α和IL?1β水平明显升高，提示这两种细胞因子在RA的病理过程中扮演了关键角色,与上述报道相符合。经雷公藤多甙片和关节炎丸治疗后，随着TNF?α和IL?1β水平下降，关节红肿现象也有不同程度的减轻，显示了抑制这两种细胞因子在RA治疗中的重要作用。

    关节炎丸是导师治疗RA活动期的经验方，具有温经散寒、益气通阳除湿、养阴清热、和营行痹、缓急止痛等功效，该方用于治疗RA活动期具良好临床效果，尤其是改善患者的晨僵、关节疼痛、关节肿胀、关节压痛等均较雷公藤多甙片为优，且起效较快。其方中黄芩、知母具有抗炎作用,对佐剂性大鼠的急慢性关节炎均有效；当归对T淋巴细胞有双向调节功能，起到双向免疫调节，并可促进巨噬细胞分泌细胞因子，增强免疫功能，其当归多糖可首先激活涉及非特异性免疫作用的巨噬细胞和NK细胞，并在T细胞的辅助下，可增加抗体的数量,进而协同增强免疫功能，近年来对当归多糖的大量研究证明其具有明显的免疫保护作用，对糖皮质激素引发的免疫抑制有一定的保护作用，同时有抗炎、镇痛作用；白芍亦有双向免疫调节作用，其白芍总甙能使AA大鼠滑膜过度分泌的IL－1、TNF和PGE2的功能恢复正常；黄芪也有双向调节免疫作用和抗炎作用；白术、生山药、制附片、鹿角霜、青蒿等具有抗炎、增强免疫力的功能;桂枝、防风有解热降温、镇静镇痛、抗炎作用。［4］故关节炎丸是通过调节全身免疫功能，抑制TNF?α的表达或者通过和TNF?α受体的特异性结合而阻断其生物学效应，阻断了炎症反应的核心环节从而打断细胞因子的“瀑布效应”，降低IL?1β水平,减轻关节炎症而达到治疗效果。

【】
  ［1］冯 芳,丁志建,刘 俊.佐剂性关节炎大鼠模型的实验研究［J］.天津药学,2004,4,16(2):1-3.

［2］Cvetkovic JT,Wallberg?Jonsson S,Stegmayr B,et al.Susceptibility for and clinical manifestations of RA are associated with polymorphisms of the TNF?α,IL?1βand IL?1Ra genes［J］.J Rheumatol,2002,29(2):212-219.

［3］Wim B,van den Berg WB.Anti-cytokine therapy in chronic destructive arthritis［J］.Arthritis Res,2001,3(1):18-26.

［4］胡荫奇,唐先平,常志隧主编.风湿病临床常用中药指南［M］.北京:技术文献出版社,2006,8(重印).