喉鳞状细胞癌中NF?κB p65和COX?2的表达及相关性分析?

             作者：武彦昭 熊晨 施惠晶 梁冰锋 王士杰 

【摘要】  目的 研究NF?κB p65和COX?2在喉鳞状细胞癌中的表达及其相关性。方法 切取手术切除的新鲜喉鳞状细胞癌组织及相应癌旁组织50例(距肿瘤边缘均≥0.5 cm)及 同期喉部其他疾病患者的喉粘膜组织20例。应用流式细胞技术(FCM)测定NF?κB p65和 C OX?2的表达情况。结果 NF?κB p65和COX?2在喉鳞状细胞癌组织中的 表达量(FI)分别为1.20和10.3；在癌旁组织中的表达量(FI)分别为1.26和1.04。结 论 NF?κB p65和COX?2在喉鳞状细胞癌组织中均呈现高表达，NF?κB p65和COX ?2参与了喉鳞状细胞癌的发生、，而且NF?κB p65促进了COX?2的表达。

【关键词】  喉鳞状细胞癌； 细胞核因子?κB p65(NF?κB p65)； 环氧化酶?2(COX?2)

  【Abstract】  Objective  To study the relationship and express ion of nuclear factor?κB p65(NF?κB p65)and cyclooxygenase?2(COX?2)in human  laryngeal carcinoma.Methods  The expressions of NF?κB p65 and  COX?2 were examined by FCM in paraffin embedded cancerous and adjacent noncanc erous tissue specimens of 50 laryngeal carcinoma and 20 normal laryngeal mucosa  samples. Results  The expressions of NF?κB p65 and COX?2 in l aryngeal carcinoma were 1.20 (FI) and 1.26 (FI) respectively, but the expression s in adjacent noncancerous tissues were 1.03 (FI) and 1.04 (FI). Conclus ion  Overexpressions of NF?κB p65 and COX?2 may play an important rol e in the occurrence and development of laryngeal carcinoma. NF?κB p65 may enha nce the expression of COX?2.

    【Key words】  Laryngeal carcinoma； Nuclear factor?κB p65；  Cyclooxygenase?2

    喉鳞状细胞癌约占全身恶性肿瘤的1%～5%［1］，其发病 与多种因素有关。细胞核因子?κB又称κ基因结合核因子(nuclear factor κ gene bindi ng ，NF?κB)，是一种广泛存在于细胞中的具有多向性调节作用的蛋白质分子，参与许多基因 的转录调控及细胞凋亡调控和转化。NF?κB p65是NF?κB的活化成分，在许多肿瘤中高度 表达，在肿瘤发生和发展中起重要作用［2］。环氧化酶?2(cyclooxygenase?2,COX ?2)在多种肿瘤中均有高表达，直接参与肿瘤细胞的增殖，在肿瘤发生和发展中也发挥重要 作用。一些研究证实在COX?2基因的启动子区含有能与NF?κB相结合的特异DNA序列，并且 NF?κB可调节COX?2的表达。本研究采用流式细胞技术(FCM)检测了NF?κB p65和COX?2 在喉鳞状细胞癌中的表达，旨在探讨二者在喉鳞状细胞癌的发生和发展中的作用和相关性。

    1  材料与方法

    1.1  材料  采用在我院住院的50例原发性喉鳞状细胞癌患者经手术切除 的新鲜癌组织及相应癌旁组织(距肿瘤边缘均≥0.5 cm)；同期采集喉部疾病患者20例的喉粘 膜组织。所有癌组织术后病理证实均为鳞状细胞癌，所有癌旁组织及喉部其他疾病患者喉粘 膜术后 病理证实均为正常粘膜或慢性炎症。全部原发性喉鳞状细胞癌患者术前均未行放、化疗。试 剂：一抗： 鼠抗人IgG型NF?κB p65抗体(F?6)sc?8008，鼠抗人IgG型COX?2抗体 (cox?229) sc?1 746，均为美国SANTA CRUZ公司的产品。二抗：羊抗鼠FITC?IgG抗体，为Jackson Immune R esearch公司产品。

    1.2  方法  所有组织取材后即用70%乙醇固定，4℃冷藏保存。应用流式 细胞技术进行NF?κB p65和 COX?2表达的蛋白定量分析。

    1.3  结果判定  以荧光指数(FI)表示两种蛋白表达的相对含量，公式如 下：FI=试验样品的均道值/对照样品的均道值=lg(X?Mode)×340。

    1.4  统计学方法  所有数据经Excel数据库整理，应用SAS 6.12 for wi ndows统计软件包进行方差分析、t检验、Dunnett?t检验、线性回归分析。以P≤0 .05为差异在统计学上有显著性意义，P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。

    2  结果

    2.1  NF?κB p65和COX?2在喉鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常喉粘 膜组织中均有表达。

    2.2  NF?κB p65在喉鳞状细胞癌组织中的表达量(FI=1.20)明显高于癌旁组织(FI=1.03) 和正常粘膜组织(FI=1.00)(P＜0.05)，见表1；癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差 异无统计学意义。表1  NF?κB p65和COX?2在喉鳞状细胞癌组织、 癌旁组织及正常喉粘膜组织中的表达情况（略 ）

    2.3  COX?2在喉鳞状细胞癌组织中的表达量(FI=1.26)明显高于癌旁组织(FI＝1.04)和正 常喉粘膜组织(FI＝1.00)(P＜0.01)，见表1；癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差异 无统计学意义。

    2.4  以NF?κB p65的表达为自变量，COX?2的表达为因变量，进行线性回归分析，二者 间呈正相关(r=0.238,P＜0.05)。

    3  讨论

    自从1986年Sen等［3］首次鉴定NF?κB为调节小鼠B淋巴细胞中κ轻链表达的转录 因子以来，对它的研究至今方兴未艾，十几年来取得了巨大的进展。近年来研究结果表明， NF?κB广泛存在于Go期细胞的细胞质中，当细胞受到诸如病毒或细菌感染、细胞因子、 蛋白激酶C激活剂、氧化剂、免疫刺激剂以及脂多糖、紫外线照射和感染前期细胞因子等作 用刺激后，NF?κB活化并进入细胞核内，广泛参与许多基因的转录调控及细胞的凋亡 调控和转化，p65和p50构成NF?κB因子具有代表性的异源二聚体。研究认为［3］， NF?κB在许多 恶性肿瘤的发生、、转移过程中起着重要作用，它的活化与过表达直接关系到肿瘤的预 后和转归。本研究显示，NF?κB p65在喉鳞状细胞癌组织中的表达显著增强，明显高于癌 旁组织和正常喉粘膜组织。

    Dufey等［4］用人类头颈部鳞癌(HNSCC)细胞系研究后得出结论：①由TNF?α诱导 的转录因子NF?κB持续激活的HNSCC细胞系对TNF?α表现为拮抗性。②NF?κB的抑制剂I κBαM可使HNSCC对TNF?α和Caspase介导的细胞毒作用敏感。Nakayama等［5］检测 发现NF?κB家族的p65和IκB激酶在口腔鳞癌标本中呈高表达。Mayo等的研究也证实［ 6 ］，抑制NF?κB的活化可有效地抑制鼻咽癌的转移。这些结果提示NF?κB在头颈部鳞状 细胞癌中有高水平的表达，参与了肿瘤的发生和发展。

    前列腺素内源性过氧化物合成酶，通常称为环氧化酶(COX)，是花生四烯酸转化为前列腺 素的关键酶。COX?2属于诱导同功型，在多种恶性肿瘤中有高表达，生长因子、细胞因子和 肿瘤促进剂可刺激其表达。高表达的COX?2具有许多生物学功能［7，8］，包括促进 肿瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡；促进肿瘤发生；降低上皮细胞钙粘蛋白表达；增加肿瘤侵袭 性和 转移能力。近年来，对于COX?2在肿瘤细胞生长、细胞凋亡、细胞运动和肿瘤血管生成方面 的研究取得了重大进展。本研究显示：COX?2在喉鳞状细胞癌组织中的表达量明显高于癌旁 组织和正常喉粘膜组织。有研究报道［9］，在下咽鳞状上皮细胞癌中有高表达的COX ? 2，而且COX?2的高表达在癌前病变、原位癌中即已存在，与正常组织相比其表达有显著差 异，说明COX?2的高表达为恶性肿瘤的早期事件，这与本研究结果相符。

    有研究证实［10］，COX?2启动子上含有2个NF?κB结合位点序列，当活化的NF? κ B进入细胞核与COX?2的启动子区域的NF?κB位点相结合，就会启动或调节COX?2的基因转 录。Lim等［11］发现NF?κB p50亚基的反义寡脱氧核苷酸能抑制NF?κB的活性和C OX?2的表达，显示NF?κB和COX?2有相关性，与本研究NF?κB和COX?2有显著相关性的 结果相符合。因此我们认为，NF?κB能调控且能促进COX?2的表达，其机制及对肿瘤 的意义有待进一步探讨。

【】
  1 韩德民，主编.喉癌——治疗与康复.北京：人民卫生出版社，2003.38.

2 Mayo MW，Baldwin AS.The transcription factor NF?kappa B: control of oncogenesis and cancer therapy resistance.Biochim Biophysics Acta，2000，1470(2 )：M55?M62.

3 Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immuno globulin enhancer sequences.Cell，1986，46(5)：705?716.

4 Duffey DC，Crowl?Bancroft CV，Chen Z，et al.Inhibition of trans cription factor nuclear factor?kappa B by a mutant inhibitor?kappa B alpha att enuates resistance of human head and neck squamous cell carcinoma to TNF?alpha caspase?mediated cell death.Br J Cancer，2000，83(10)：1367?1374.

5 Nakayama H，Ikebe T, Beppu M，et al.High expression levels of nu clear factor kappa B kinase alpha and Akt kinase in squamous cell carcinoma of t he oral cavity.Cancer，2001，92(12)：3037?3044.

6 Mayo MW，Wang CY，Cogswell PC，et al.Requirement of NF?kappa B activation to suppress p53?independent apoptosis induced by oncogenic Ras.Scie nce，1997，278(5344)：1812?1815.

7 Tsujii M，Dubios RN.Alterations in cellular adhesion and apoptosis i n epithelial cells overexpressing prostaglandin endoperoxide synthase 2.Cell，19 95，83(3)：493?501.

8 Jones MK，Wang H，Peskar BM，et al.Inhibition of angiogenesis by nonsteroidal anti?inflammatory drugs： insight into mechanisms and implication s for cancer growth and ulcer healing.Nat Med，1999，5(12)：1418?1423.

9 Daniel TO，Liu H，Morrow JD，et al.Thromboxane A2 is a mediator of cyclooxygenase?2?dependent endothelial migration and angiogenesis.Cancer Re s，1999，59(18)：4574?4577.

10 Reddy ST，Wadleigh DJ，Herschman HR，et al.Transcriptional regu lation of the cyclooxygenase?2 gene in activated mast cells.J Biol Chem，2000， 275(5)：3107?3113.

11 Lim JW，Kim H，Kim KH.Nuclear factor?kappa B regulates cyclooxygen ase?2 expression and cell proliferation in human gastric cancer cell.Lab Invest ，2001，81(3)：349?360.