去卵巢大鼠端脑皮质和海马病理改变及氨基胍和补肾方药的防治效应

【摘要】  　　目的 探讨去卵巢大鼠端脑皮质和海马病理改变及氨基胍和补肾方药的防治效应，为阿尔茨海默病防治药物筛选提供。方法 将36只雌性SD大鼠随机分为假切除组、去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组，各9只。去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组行背部切口切除双侧卵巢，假切除组切除腹腔等体积的脂肪组织。切除卵巢4周后氨基胍防治组饮用1‰盐酸氨基胍水溶液，剂量为盐酸氨基胍50 mg/(kg·d)；补肾方药防治组予补肾方药灌胃，剂量为生药6.3 g/(kg·d)；去卵巢组和假切除组予与补肾方药防治组相应容积自来水灌胃。喂养16周后，取脑组织观察端脑皮质和海马的病理改变。结果 去卵巢组大鼠端脑皮质及海马组织出现神经元颗粒变性和神经原纤维缠结等，氨基胍防治组和补肾方药防治组神经元的变性现象及神经原纤维缠结明显改善，且在受损区周围有致密的神经纤维网出现。结论 去卵巢大鼠可出现阿尔茨海默病样脑病理改变，氨基胍和补肾方药均可防治上述病理改变且促进脑受损区周围致密神经纤维网形成。

【关键词】  阿尔茨海默病 补肾药 动物 实验 端脑 海马
   
　　【Abstract】  Objective  To explore the pathological changes of brain in ovariectomied rats and the preventive effects of both aminoguanidine and TKR, supply some experimental references for preventive drugs screening of AD. Methods  Thirty-six Sprague-Dawley female rats (nine months of age) were randomly divided into four groups: Sham group, OVX group, AG group and TKR group. After 16 weeks, we got the brain tissues of the rats and observed the pathological changes of both cerebral cortex and hippocampus. Results  There was neuronal granular degeneration and the tangles of nerve fiber in cerebral cortex and hippocampus of ovariectomized rats. AG and TKR could improve the neuronal granular degeneration, decrease the tangles of nerve fiber in cerebral cortex and hippocampus and increase the compliance of neuron synapse. Conclusion  There are some AD-like pathological changes in the brain of ovariectomized rats. Nerve fiber of cerebral cortex and hippocampus formation was thickened, and both AG and TKR have preventive effects  on the brain above mentioned, and can shape.
   
　　【Key words】  Alzheimer's disease (AD);  Tonifying kidney recipe (TKR); Telencephalon; Hippocampus

　　阿尔茨海默病（alzheimer's disease，AD）是一种中枢神经系统退行性病变，女性患病率为男性的1.5～3倍，且提示雌激素缺乏在女性AD发生中具有重要意义［1］。本实验采用摘除大鼠双侧卵巢模拟绝经后状态，通过对脑组织病理改变的研究，探讨AD的发病机制和筛选防治药物。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物  9个月龄SD雌性大鼠36只，体质量320～380 g，由河北省实验动物中心提供，动物合格证号：609068。普通大鼠饲料常规喂养。

　　1.1.2  药物及试剂  补肾方药由熟地黄、淫羊藿、肉苁蓉、川芎等组成，由石家庄乐仁堂医药集团股份有限公司中药饮片厂提供，经河北医科大学药用植物教研室鉴定为纯品。熟地黄、淫羊藿、肉苁蓉、川芎按3∶3∶2∶1比例配伍，水煎取汁，药物浓度为1 g生药/mL。盐酸氨基胍（aminoguanidine, AG）为Sigma公司产品。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  造模及给药方法  将SD雌性大鼠36只随机分为假切除组、去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组，每组9只。去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组行背部切口切除双侧卵巢，假切除组切除腹腔等体积的脂肪组织。切除卵巢4周后，氨基胍防治组饮用1‰盐酸氨基胍水溶液，剂量为50 mg/（kg·d）盐酸氨基胍［3］；补肾方药防治组中药灌胃，每日1次，剂量为6.3 g/kg体质量；去卵巢组和假切除组予补肾方药防治组相应容积自来水灌胃。

　　1.2.2  大鼠组织的灌注固定  给药16周后，将大鼠用4℃的4％多聚甲醛灌注液灌注固定，直到鼻尖变硬。取出灌注固定后的大脑，浸于4%多聚甲醛中备用。

　　1.2.3  脑组织形态学检查  将固定的脑组织经常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡，分别进行HE染色和嗜银（改良的Bielschow-sky法）染色，光镜下观察端脑皮质及海马各区的病理变化。

　　2  结果
   
　　假切除组大鼠端脑皮质和海马结构正常，神经元胞膜、核膜完整，海马锥体细胞排列整齐，层次清楚。去卵巢组端脑皮质、海马弥漫性萎缩，脑沟变宽，脑室扩大，神经元胞体出现大小不同的空泡，嗜银染色可见神经原纤维缠结。氨基胍防治组和补肾方药防治组端脑皮质、海马组织锥体细胞、颗粒细胞核仁清楚可见，胞膜、核膜完整，细胞排列比较整齐，颗粒变性细胞减少，且在受损区周围有致密的神经纤维网出现（见封3图1～3）。

　　3  讨论
   
　　AD是中枢神经系统进行性退变，通常以进行性记忆能力减退和丧失为首发症状，典型的病理特征是端脑皮质出现神经元细胞外老年斑，细胞内神经原纤维缠结和神经元颗粒空泡变性。AD妇女血浆中雌激素水平较同龄妇女低，手术绝经常伴有亚临床认知功能障碍等［1］，提示雌激素缺乏在AD的发病中具有重要意义［1,2］。
   
　　本实验研究显示，切除卵巢后，去卵巢组大鼠端脑皮质和海马神经细胞广泛变性，有大小不同的空泡，神经原纤维缠结，锥体细胞排列紊乱等，这些表现与AD的特征性病理改变有相似之处。氨基胍为高级糖化终末产物(AGEs)特异性抑制剂，经其干预后，端脑皮质和海马病理明显改善，颗粒变性细胞减少，在受损区周围有致密的神经纤维网出现，提示氨基胍可能抑制脑组织中高级糖化终末产物的形成，对维持脑组织正常蛋白更新和降低异常蛋白蓄积，增加神经元突触的可塑性具有重要作用［4］。据报道，在动物幼年过后，它们的大脑开始表现出与成年动物相似的结构，可塑性减少［5］。
   
　　中医学认为，肾主藏精和生殖。《医学心悟》曰“肾主智”，肾虚则智不足，说明脑髓有赖于肾精不断化生和充养，如果肾中精气不足，气血两亏则脑失滋养而枯萎，萎则神机失用，愚笨呆痴，遇事遗忘。因此，对于老年性痴呆患者，中医药多采用补肾壮阳、填补精血法。补肾方药方中熟地黄、淫羊藿益肾填精，为君；肉苁蓉温补肾阳，为臣；川芎既能辛通活血，同时可消除熟地黄滋腻之弊，为佐。诸药合用，共奏温肾壮阳、填补精血之功。药研究表明，熟地黄具有性激素样作用，能降低血清胆固醇和甘油三酯，并能改善脑灌流量，降低血清中过氧化脂质含量，具有清除自由基作用［6］；淫羊藿具有提高动物耐缺氧能力；肉苁蓉含有雌二醇类似物［6］；川芎具有清除自由基的作用［7］。补肾方药干预后，脑组织病理变化明显好转，提示补肾中药能抑制切除卵巢或绝经导致的脑退化，其机制可能与补肾中药能增加尿中可溶性AGE-肽的含量，降低脑组织AGEs积累，从而使脑组织β-淀粉样肽含量减少，改善学习记忆，改善神经元的变性和神经纤维的缠结有关［8］。

【】
  　　［1］ Yue Y,Hu L,Tian QJ,et al.Effects of long-term,low-dose sex hormone replacement therapy on hippocampus and cognition of postmenopausal women of different apoE genotypes［J］.Acta Pharmacol Sin,2007,28(8):1129-1135.

　　［2］ 郭蓉.绝经后雌激素水平与阿尔茨海默病的关系分析［J］.实用老年医学,2007,21(1):45-46.

　　［3］ Soulis-Liparota T,Cooper M,Papazoglou D,et al.Retardation by aminoguanidine of development of albuminuria, mesangial expansion, and tissue fluorescence in streptozocin-induced diabetic rat ［J］.Diabetes,1991,40(10)：1328-1334.

　　［4］ 王悦芬,李恩,薛智权,等.氨基胍对去卵巢大鼠大脑皮质、海马晚期糖化终末产物及β-淀粉样肽含量的影响［J］.基础医学与临床,2004,24(2):232-233.

　　［5］ He HY, Hodos W, Quinlan EM.Visual deprivation reactivates rapid ocular dominance plasticity in adult visual cortex［J］.J Neurosci,2006,26(11):2951-2955.
　　
　　［6］ 叶丽卡，陈济民.淫羊藿的药理研究进展［J］.中药杂志，2001，26(5):293-295.

　　［7］ 梁日欣,黄璐琦,刘菊福,等.药对川芎和赤芍对高脂血症大鼠降脂、抗氧化及血管内皮功能的实验观察［J］.中国实验方剂学杂志,2002,8(1):43-45.

　　［8］ 王悦芬,王彦刚,李恩,等.补肾方药对去卵巢大鼠端脑、海马晚期糖化终末产物及β-淀粉样肽含量的影响［J］.中国中西医结合杂志,2004,24(3):247-250.