血管紧张素转换酶基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性

            作者：任红，陈必良，刘淑娟，赵丽莎，柏璐        

【摘要】  目的: 探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性的关系. 方法: 运用多聚酶链反应技术检测60例HDCP患者及胎儿和54例正常妊娠妇女及胎儿血管紧张素转换酶基因多态. 结果: 妊娠妇女两组中DD型、ID型Ⅱ型基因频率分别比较,D型等位基因分别比较差异有统计学意义；胎儿两组中DD型、ID型Ⅱ型基因频率分别比较,D型等位基因分别比较均无统计学差异. 结论: HDCP患者ACE基因多态性与HDCP的发病有关；HDCP胎儿ACE基因多态性与HDCP的发病无关.

【关键词】  妊娠期高血压疾病; 血管紧张素转换酶;基因;多态性

　　【Abstract】 AIM: To study the relationship of the polymorphism of angiotensin converting enzyme (ACE) gene and  hypertensive disorder complicating pregnancy (HDCP). METHODS:  Polymorphism chain reaction was performed to show the polymorphism of ACE gene in 60 patients with HDCP and the fetus and 54 normal  pregnant women and the fetus. RESULTS:  The percen?tages of the ACE DD, ID and II genotypes in the HDCP pregnant women group were significantly different as compared with those in the control group respectively. The frequency of allele gene D type in the HDCP pregnant group was significantly higher as compared with that in the control group. The percentages of the ACE DD, ID and II genotypes in the HDCP fetus group were not significantly different as compared with those in the control group respectively. The frequency of allele gene D type in the HDCP fetus group was not significantly different as compared with that in the control group. CONCLUSION:  The polymorphism of ACE gene in the HDCP pregnant  group may has an association with the pathogenesis of HDCP. The polymorphism of ACE gene in the HDCP fetus group may have no association with the pathogenesis of HDCP.

　　【Keywords】 hypertensive disorder complicating pregnancy; angiotensin converting enzyme; gene; polymorphism

　　0引言

　　妊娠期高血压疾病（hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP）是妊娠晚期所特有的多因素、多系统疾病,发病率高,是导致孕产妇及围生期死亡的主要疾病之一［1］. 目前,其病因和发病机制不清楚. 近年来，研究发现血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE) 水平与ACE基因的缺失、插入多态性密切相关［2］. 胎儿与母体是两个独立的个体，胎儿通过脐带接受营养和排泄废物，脐带内含有丰富的胎儿血液，携带胎儿的多种信息. 临床上，HDCP在终止妊娠后病情好转，症状消失；即使胎死宫内也会使症状、体征迅速减轻至消失［3］. 因此,我们对孕妇及胎儿ACE基因多态性与HDCP的关系进行了初步探讨.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　收集2006?08/2007?02在第四军医大学附属西京妇产科住院的HDCP患者60例（HDCP组）. HDCP的诊断［1］. HDCP组孕妇平均孕周（36±3）wk，平均年龄（25±5）岁. 另选取同期住院分娩的正常妊娠妇女54例作为对照组，对照组孕妇平均孕周（39±3）wk，平均年龄（25±5）岁. HDCP组及对照组的年龄、产次、孕周及孕前体质量指数均无统计学差异. 两组孕妇均无高血压、心脏病、糖尿病、甲状腺功能亢进及肾病等病史. 两组孕妇产后随访3 mo以上未发现异常.

　　1.2方法

　　1.2.1标本采集与保存HDCP组患者在确诊后和对照组分别在剖宫产前或剖宫产后72 h采血,取肘静脉血5 mL；两组分别在剖宫产时取脐静脉血5 mL，血液分别置于EDTA抗凝试管中,- 20℃保存.

　　1.2.2基因组DNA提取用天根生化科技（北京）有限公司提供的全血DNA提取试剂盒, 提取外周血白细胞DNA.

　　1.2.3ACE基因型检测引物序列为  P1：5′?CTG GAG ACC ACT CCC ATC CCT  TCT?3′；P2：5′?GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T?3′. 由上海生工生物工程技术有限公司合成，PCR反应体系为30 μL，常规配置，预变性94℃ 3 min，循环条件为变性94℃ 60 s，退火52℃ 60 s，延伸72℃ 60 s，30个循环周期后补加72℃ 10 min结束反应. 取PCR产物5～10 μL, 加于内含0.5 mg/L溴化乙锭(EB)的20 g/L琼脂糖凝胶上,在含0.5 mg/L EB的0.5×TAE缓冲液(pH=8.0)中电泳. 条件为恒压100 V,室温. 约30～ 40 min电泳结束后, 将凝胶放入紫外透射分析仪内观察结果. PCR扩增的目的片段经回收、纯化,送北京奥科生物科技有限公司进行测序. 以ACE基因PCR扩增在190 bp和490 bp处出现亮带为阳性结果.

　　统计学处理: 采用SPSS 11.0 统计软件进行统计分析，表型频率和基因频率采用基因计数法. 经过Hardy?Weinberg遗传平衡定律检验. HDCP组和正常对照组间的比较采用χ2检验.

　　2结果

　　2.1ACE基因I/D多态性类型PCR扩增出2种DNA片段，分别为490 bp和190 bp，即插入型（I 型）和缺失型（D型）（图1）.

　　2.2两组结果对比两组ACE基因型和等位基因频率比较，母体HDCP组的DD基因型频率及D等位基因频率高于对照组的相应频率，差别有统计学意义(P<0.05,表1). 胎儿HDCP组的DD基因型频率及D等位基因频率与对照组的相应频率比较无统计学差异(表2).表1HDCP母体组与对照组ACE位点基因型频率与等位基因频率比较（略）表2HDCP胎儿组与对照组ACE位点基因型频率与等位基因频率比较（略）

　　3讨论

　　HDCP病因学不明,其相关的基因研究也尚无定论, HDCP的基本病理变化是全身小动脉痉挛. 肾素?血管紧张素系统(RAS)在维持机体水盐代谢平衡和调节心血管活动中起着十分重要的作用,ACE的主要作用是协助血管紧张素Ⅱ生成,是血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ的关键酶,血管紧张素Ⅱ具有强烈的血管收缩活性,可灭活舒血管物质缓激肽,进而影响血压. 正常妊娠期间血清ACE水平保持在较稳定状态. 脐带血液携带胎儿的多种信息，脐带血取样可以提供胎儿遗传和身体更全面的检查. 胎盘胎儿存在独立的RAS，对孕妇血流量和激素水平起着调节作用. ACE活性的改变也可能与胎盘胎儿系统的功能异常有关. 一般情况下,ACE浓度主要取决于ACE基因的缺失多态性［2］.

　　人类ACE基因位于17号染色体长臂2区3带（17q23），有26个外显子和25个内含子［4］，目前已发现多种ACE基因多态标志，其中对第16内含子中存在的287 bp研究最多，呈现ACE基因D/I多态性. 人类ACE基因有D, I两种等位基因和DD型（纯合子）、II型（纯合子）和D/I（杂合子）3种基因型［4］. 国内外对ACE基因D/I 多态性与HDCP发病的关系的研究结果不一 ［4-6］. 我们的实验中, ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常孕妇组和HDCP组之间有统计学差异.表明孕妇ACE基因的缺失多态性与HDCP组发病有关，这与国内外一些报道一致 ［5-8］. ACE位点基因型频率与等位基因频率比较，在正常脐血组和HDCP组之间无统计学差异,表明胎儿ACE 基因的缺失多态性与HDCP组发病无关.

　　孕妇ACE基因I/D多态性可能是HDCP遗传性分子生物学基础之一, 有学者推测抑制HDCP患者体内的ACE活性, 有可能逆转HDCP的病理过程, 为HDCP提供了一种可能的途径, 故了解ACE基因型与HDCP的关系, 有助于HDCP病因学的研究.

【】
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