Vimentin、CK34βE12在前列腺增生组织中表达的研究

                      作者：王艳宁，韩起鹏 ，王嘉伦   

【关键词】  前列腺增生;前列腺炎;CK34βE12;Vimentin

　　前列腺增生（benign prostatic hypertrophy，BPH）是男性常见的疾病之一，其发病原因多是以年龄及激素为主。但近年的一些研究发现，在前列腺增生症手术切除的标本中经常发现有炎症的浸润，但对于两者之间的关系目前报道的不多。我们利用免疫组织化学方法研究CK34βE12与Vimentin在BPH组织中的表达，旨在探讨炎症与BPH的关系。
    
　　1 材料和方法
    
　　1.1 研究对象 BPH组织标本为医科大学和解放军沈阳第2022005年4月至11月手术摘除（耻骨上经膀胱途径）的增生前列腺共55例，标本取自于膀胱颈至精阜尾端连线的中点处，均经病理检查诊断为BPH。患者年龄61～85岁，平均75.21岁;经腹B超测定前列腺体积为26.14～107.20cm 3 ，平均47.32cm 3 ;国际前列腺症状评分（IPSS）14～34分，平均22.50分。正常前列腺标本为2005年3月至2006年10月因意外死亡的青年男性尸检前列腺标本，共4例，年龄为26～32岁，平均29岁，均经组织学检查证实为无病理改变。
   
　　1.2 主要试剂和来源 一抗为鼠抗人CK34βE12单克隆抗体（1∶100）、鼠抗人Vimentin单克隆抗体（1∶100），均购于北京中杉生物试剂公司，二抗为兔抗鼠IgG（Zymed Laboratories Inc.）。S-P超敏免疫组织化学试剂盒（Kit-9706）购自福州迈新生物技术有限公司，DAB酶底物显色试剂盒（ZLI-9032）购于北京中杉生物技术有限公司。

　　1.3 实验方法
   
　　1.3.1 HE染色 石蜡标本4μm连续切片，60℃烤片2h。二甲苯脱蜡，经梯度酒精脱水，苏木素染色，清洗，盐酸酒精分化，返蓝，伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
   
　　1.3.2 免疫组织化学方法 检测采用链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（即S-P法）。染色方法:（1）脱蜡和水化;（2）微波抗原修复;（3）内源性过氧化物酶阻断溶液室温下孵育15min;（4）非免疫性动物血清室温下孵育15min;（5）第一抗体4℃下孵育过夜，一抗稀释比为:CK34βE12（1∶100）、Vimentin（1∶100）;（6）生物素标记的第二抗体室温下孵育20min;（7）链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液室温下孵育20min;（8）新配制的DAB溶液显色;（9）苏木素复染，中性树胶封片。以上各步骤间均用0.01M PBS缓冲液（pH=7.4）冲洗5min×3次。同时用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3.3 结果判定 每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞的百分比，以细胞胞浆出现棕色颗粒为阳性表达。按着色细胞百分数记分，小于20%为0分;20%～50%为1分;大于50%为2分。按着色强度记分，无着色为0分;浅棕色为1分;深棕色为2分。将着色细胞百分数记分与着色强度记分相乘，总记分0分为阴性（-）;1-2分为弱阳性（+）;4分为强阳性（++）。
   
　　1.3.4 统计学分析 采用SPSS for windows11.5统计分析软件进行分析。P<0.05有统计学意义。
    
　　2 实验结果
    
　　2.1 HE染色 在4例正常前列腺组织中未发现有炎细胞浸润，在55例BPH组织中发现有48例有炎细胞浸润，阳性率为87.2%。
    　　
　　2.2 CK34βE12的表达 CK34βE12定位于前列腺基底细胞的胞浆内，呈棕色颗粒。在正常前列腺组织，见呈单层连续环状的棕色颗粒围绕着腺周，2例为阳性。在BPH组织中呈不规则粗线形连续环状的棕色颗粒围绕腺周，可呈多层。55例BPH组织中有30例为阳性，阳性率为54.55%。CK34βE12在有无炎细胞浸润的BPH组织中的表达无显著性差异（表1）。
    
　　表1 CK34βE12在BPH组织中的表达与炎症的关系（略）

　　2.3 Vimentin的表达 Vimentin定位于前列腺间质细胞的胞浆内，呈棕色颗粒。2例正常前列腺组织为阳性。55例BPH组织中有48例为阳性，阳性率为87.2%。Vimentin在有无炎细胞浸润的BPH组 织中的表达有显著性差异（表2）。
    
　　表2 Vimentin在BPH组织中的表达与炎症的关系（略）

　　3 讨论
    
　　前列腺组织主要是由间质和腺体两种成分组成，大量的研究认为BPH是由于其中的某一种成分或是这两种成分混合增生所造成。Bartsch等 ［1］ 发现在正常的前列腺组织中，间质、上皮和腺腔分别占前列腺的45%、21%和34%，间质和上皮的比例为2∶1。在BPH组织中，李涛等 ［2］ 发现间质与上皮的比例由正常的（2.55±1.31）∶1上升为（5.30±3.78）∶1。这说明BPH主要是以间质细胞增生为主。而大量的研究发现，在BPH组织中经常会有炎症病灶的存在。

   
　　细胞骨架以不同的形式广泛存在于机体的多种细胞内，构成细胞有支持结构和胞质其他成分的依附支架蛋白，以此维持细胞的特定形状和细胞内多种成分的空间位置 ［3］ 。细胞角蛋白和波形蛋白是两种重要的细胞骨架蛋白。CK34βE12是高分子量角蛋白，其定位于前列腺基底膜细胞浆内。本研究发现正常前列腺组织中CK34βE12的表达为单层连续环状的棕色颗粒围绕着腺周，而在BPH组织中可见有多层不规则粗线形连续环状的棕色颗粒围绕腺周，此为部分病例表现了基底细胞的增生。波形蛋白主要存在于有间质细胞中，常密集环绕在核周，形成波形纤维网，并与核膜下的层粘连蛋白相连。本研究发现Vimentin定位于前列腺间质细胞的胞浆内，呈棕色颗粒。Collins ［4］ 在对31648例无前列腺癌的男性进行前列腺炎与BPH的关联研究时发现，在有BPH的患者中，曾患过前列腺炎的病例是未曾患过前列腺炎的病例的7.7倍。我们的研究也发现，在正常BPH组织中无炎细胞的浸润，但在55例BPH组织中炎细胞浸润的阳性率为87.2%，证实了在BPH组织中炎症的高阳性率，同时我们也发现Vimentin的表达情况与BPH组织中是否有炎细胞浸润明显有关。现已知炎症与大量慢性变性和增生性疾病有关，且炎症反应往往伴随成纤维细胞、血小板及能释放多种多肽生长因子的炎性细胞增殖。多肽生长因子对许多细胞是促细胞分裂剂并能在相关组织中诱导增殖改变。这些因子包括:（1）β-转化生长因子（TGF-β）:在BPH组织中其表达是升高的，其对上皮细胞或基质细胞的作用是不同的。其对上皮细胞是负调控作用，是上皮细胞生长的抑制物质;对间质的作用还不十分清楚，但已知的是它能刺激间质细胞的生长 ［5］ 。（2）成纤维细胞生长因子（FGF）:动物模型研究显示酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）仅在前列腺发育、生长过程中起作用，而碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）则主要调控成年前列腺生长，能起到促有丝分裂的作用 ［5］ 。Kramer等 ［6］ 认为前列腺慢性炎症能增加BPH中纤维肌性组织的生长。（3）血小板转化生长因子（PDGF）:是一种较强的促细胞有丝分裂因子。在BPH的炎性病灶中，有其表达并可发现其受体存在。体外实验表明这种受体与PDGF结合后，能刺激间质细胞的增殖 ［5］ 。此外，而在正常情况下，前列腺中细胞增殖与凋亡在相对的平衡下有控制的进行着，一旦细胞凋亡减少，则此平衡被打破，导致BPH。有学者在BPH组织的炎性病灶中发现了Bcl-2的高表达 ［7］ 。现已知Bcl-2是抑制细胞凋亡的基因，其高表达说明了细胞凋亡减少，这打破了前列腺细胞增殖与凋亡的平衡，造成了BPH。
   
　　综上所述，前列腺炎症可作为BPH的发病原因之一，且由炎症所造成的BPH主要是间质细胞的增生。

【】
  　　［1］ Bartsch G，Muller HR，Boerholzer M，et al.Light microscopic stere-ologic analysis of the normal human prostate and benign prostatic hy-perplasia ［J］.J Urol，1979，122（4）:487-491.

　　［2］李涛，徐月敏，金三宝，等.良性前列腺增生症组织形态学及临床相关因素分析［J］.临床泌尿外科杂志，2001，16:23-26.

　　［3］长田太郎，渡边纯夫.消化疾患と细胞骨架［J］.细胞Toky-o，1997，29（6）:211-215.

　　［4］ Collins MM，Meigs JB，Barrt MJ，et al.Prevalence and correlates of prostatits in the health professionals follow-up study cohort ［J］.J Urol，2002，167（3）:1363-1366.

　　［5］张玉海，邵强.前列腺外科［M］.北京:人民卫生出版社，2001.109-110.

　　［6］ Kramer G，Steiner GE，Handixurya A，et al.Increased expression of lymphocyte-derived cytokines in benign hyperplasia prostate tissue，i-dentification of the producing cell types，and effect of differentially ex-pressed cytokines on stromal cell proliferation ［J］.Prostate，2002，52（1）:43-58.

　　［7］ Gerstenbluth A，Seftel AD，Maclennan GT，et al.Distribution of chronic prostatitis in radical prostatectomy specimens with up-regula-tion of bcl-2in areas of inflammation ［J］.J Urol，2002，167（5）:2267-2270.