丹参对非酒精性脂肪肝大鼠血清MDA、SOD、TNF、Leptin的影响
【摘要】 ［目的］观察丹参对非酒精性脂肪肝大鼠血中丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子α(TNF?α)、瘦素（Leptin）的调节作用。［方法］59只大鼠随机分为5组，第1组为正常饮食对照组（正常组），11只，喂饲普通饲料；第2-5组为实验组，喂饲高脂饲料。其中第2组为高脂饮食组（模型组），16只；第3、4组为丹参注射液大、小剂量治疗组（治疗组），各11只；第5组为为还原型谷胱甘肽对照组（对照组），10只。治疗组大鼠每天丹参注射液3.3ml/Kg、1.65ml/Kg；对照组每天还原型谷胱甘肽溶液10ml/Kg；正常组和模型组腹腔注射等量生理盐水，连续8W，观察肝组织的病理改变，比色法测定血清MDA、SOD，放免法测定血清中TNF?α、Leptin含量。［结果］模型组大鼠肝脏脂肪沉着面积，沉着程度及纤维化程度积分均较正常组明显增多，血清中MDA、TNF?α含量均较正常组明显升高（P<0.01，P<0.05），而SOD、Leptin含量较正常组明显减低（P<0.05）。丹参大剂量治疗组大鼠肝脏脂肪沉着面积积分较模型组明显减少（P<0.05），血清中MDA含量较模型组明显降低（P<0.05），Leptin含量较模型组明显升高（P<0.05），而SOD、TNF?α的变化不明显（与模型组比P>0.05）。［结论］大剂量丹参可改善非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂肪变性情况，并能减少脂肪肝大鼠血中MDA含量，提高Leptin的表达。
【关键词】 丹参；脂肪肝；大鼠；MDA；SOD；TNF；Leptin
Abstract: ［Objective］ To observe the effect of Danshen on the non?alcoholic fatty liver rats MDA, SOD, TNF, Leptin in blood serum. ［Methods］ Fifty nine rats were randomly divided into five groups, the normal group had eleven, the model group had sixteen，the large dose Danshen treatment group had eleven, the low dose Danshen treatment group had eleven, and the control group had ten. The normal group rats were fed with common feedstuff. The rest groups rats were fed on the high fat diet .To last eight weeks,all rats were put to death, tested the contents of MDA, SOD, TNF, Leptin in blood serum and observed pathologic change in rats’ liver. ［Result］ The model group rats’ liver happened fat pigmentation obviously, and could be found the liver fibrous degeneration. The contents of MDA, TNF?α in fatty liver rats in blood serum increased ( P<0.01, P<0.05), and the contents of SOD,Leptin degraded（P<0.05）. The fat pigmentation of the large dose Danshen treatment group rats’ liver was decreased（P<0.05）. The contents of MDA in blood serum of the large dose Danshen treatment group were decreased obviously( to compare with the model group: P<0.05),and the contents of Leptin were increased obviously( to compare with the model group: P<0.05),but the contents of SOD,TNF?α didn’t change. ［Conclusion］ The large dose of Danshen can improve the fatty degeneration of the hepar of the non?alcoholic fatty liver rats, decrease the contents of MDA, and increase the level of Leptin in blood serum of the non?alcoholic fatty liver rats.
Key words： Danshen; fatty liver; rats; MDA; SOD; TNF; Leptin
肝脏是脂质和脂肪酸代谢的重要部位，且它们的合成、分解，酮体生成和脂蛋白代谢都在严密调控系统调节下保持相对平衡。脂肪肝的发病机制目前尚不明确，相关因素有［1］①肝脏脂肪代谢障碍；②胰岛素抵抗；③CYP2E1和CYP4A的作用；④氧应激及脂质过氧化损伤；⑤免疫反应；⑥肝筛改变；⑦游离脂肪酸的作用；⑧缺氧和肝微循环障碍；⑨遗传因素等。本研究旨在探讨中药丹参注射液对脂肪肝预防和治疗作用及可能机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SD大鼠59只，雄性，清洁级，体重180～220g。由浙江省实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（浙）2003-0001。饲养于浙江省实验动物中心，大鼠分笼喂养。
1.2 药物与主要试剂
胆固醇为河南郑州生物技术有限公司产品，胆盐为杭州微生物试剂厂产品。丹参注射液由正大青春宝药业有限公司提供，批号0503252，注射用还原型谷胱甘肽钠（古拉啶）由积华药业有限公司提供，批号4106；MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，SOD试剂盒购自上海放射免疫技术有限公司，TNF?α、leptin试剂盒购自北方生物技术研究所。
1.3 主要仪器
天平FA2004（上海精天天平厂），玻璃搅拌器（上海医用仪器厂），722紫外分光光度计（上海分析仪器厂制造），光学显微镜为日本Olympus株式会社产品，OlympusAU640生化分析仪为日本株式会社产品。XH?6010r计数仪（西安二六二厂），DL?8R冷冻离心机。
2 方法
2.1 分组与模型制备
大鼠正常喂养1周后随机分为5组，第1组为正常饮食对照组（正常组），11只，服普通饲料；第2～5组为脂肪肝组（服高脂饲料，即基础饲料77.5%,猪油8%,胆固醇4%,胆盐0.5%，蛋黄粉10%，饲料加工成粉末状有利于服用和吸收）。其中第2组为高脂饮食组（模型组），16只；第3、4组为丹参注射液治疗高、低剂量治疗组（治疗组），各11只；第5组为为还原型谷胱甘肽对照组（对照组）。
2.2 给药方法
组大鼠每天丹参注射液3.3ml/kg(用生理盐水稀释至5ml，按5ml/kg腹腔注射)、1.65ml/kg（用生理盐水稀释至5ml，按5ml/kg腹腔注射）；对照组每天还原型谷胱甘肽溶液10ml/kg（0.2g溶于5ml生理盐水，按5ml/kg腹腔注射）；正常组和模型组腹腔注射等量生理盐水。
2.3 观察指标及测定方法
2.3.1一般情况
实验期间每周称体重1次，观察食欲行为、粪便、毛发及动物死亡情况。第8周后各大鼠禁食不禁水约16h，腹腔动脉取血，按常规制备血清，处死大鼠，取出肝脏，观察肝脏外观，称湿重。取肝左叶，用10%的甲醛固定，观察病理变化。
2.3.2 比色法测定MDA、SOD，放射免疫法测定TNF?α、leptin，按试剂盒规范操作。
2.3.3 统计学处理方法
采用SPSS10.0软件包统计，计量资料用（x±s）表示，采用t检验。
3 结果
3.1 肝脏组织学变化
正常组肝组织红润，模型组肝表面有油腻感，肝组织呈黄色缺血状。光镜下显示正常组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，中央静脉大而壁薄，肝细胞排列成肝索，在中央静脉周围呈放射状分布，细胞呈多边形；模型组大鼠肝组织可见脂肪细胞大量沉着，并可见肝纤维化形成［2］。各治疗组大鼠肝组织也可见脂肪沉着，但沉着面积及程度较模型组减轻，尤其大剂量组明显。表1 肝组织病理变化（略）
3.2 血清中MDA、SOD、TNF?α、Leptin变化
模型组大鼠血清中MDA、TNF?α含量均较正常组明显升高（P<0.01，P<0.05），而SOD、Leptin含量较正常组明显减低（P<0.05）。丹参大剂量治疗组大鼠血清中MDA含量较模型组明显降低（P<0.05），Leptin含量较模型组明显升高（P<0.05），而SOD、TNF?α的变化不明显（与模型组比P>0.05）。丹参小剂量治疗组大鼠血清中MDA含量较模型组明显降低（P<0.05），SOD、TNF?α、Leptin的变化不明显。对照组各项指标与模型组比较均无显著性差异（与模型组比P>0.05）。表2 血清中MDA、SOD、TNF?α、Leptin变化（略）
4 讨论
中医没有脂肪肝相对应的病名,一般认为瘀血阻滞、痰浊内结是本病的主要原因。丹参有活血化瘀作用，丹参的主要成分是丹参素、丹参酮,丹参素可降低肝脏的MDA含量,使肝脏SOD活性明显升高,在一定程度上具有抗氧自由基及抗脂质过氧化的作用［3］，“同时还有降低肿瘤坏死因子(TNF)的作用,本研究也证实了丹参确可降低非酒精脂肪肝大鼠血中MDA含量。但对血中TNF?α、SOD的影响不大,可能与疗程及给药剂量和方式有关，而MDA是反映脂质过氧化的重要判断指标，氧应激及脂质过氧化损伤是导致脂肪肝的重要因素”。另外药认为丹参可降低肝脏脂类特别是甘油三酯含量,并能促进脂肪在肝内氧化,还可扩张血管，改善微循环，增加肝脏血流量以及降低血液黏稠度，能有效消减及逆转肝细胞脂肪变性,促进病情改善和恢复［4］”。此外，近年来的研究发现，人类的肥胖常伴有高Leptin水平，而本实验研究发现脂肪肝大鼠血中Leptin水平明显低于正常组，经丹参干预后尤其大剂量丹参对其有明显的升高作用，这与我们曾经的研究结果不太一致［5］,Leptin具有抑制摄食、降脂、降糖、减轻体重等作用，因此推断其可能通过调节肝脏脂肪代谢机制起作用，但还需进一步深入研究证实。
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［1］曾民德.脂肪肝发病机制及其“二次打击”假设［J］.中华消化杂志，2002,(22)3:167?168.
［2］Diehl AM,Goodman Z,Ishak KG.Alcohol like disease in nonalcoholics:A clinical and histologic with alcoholic induced liver injury［J］.Gastroenterol.1998,95:1056?1062.
［3］胡云,朱大龙,韩光晓,等.不同糖耐量者血浆肿瘤坏死因子2A与游离脂肪酸及胰岛素抵抗的关系［J］.江苏医药,2004,30:184?186.
［4］翁维良.降血脂中草药研究进展［J］.天津中医,1986,28(1):34.
［5］孙丽伟.高脂饮食脂肪肝大鼠血清TNF?α、IL?6、Leptin的变化［J］.浙江中医学院学报，2004，28（3）：41?42.
