补肾复方对胸腺细胞增殖周期、胸腺一氧化氮及抗氧化作用的影响
【摘要】 [目的]为了研究补肾阳复方右归饮和补肾阴复方左归饮在体内对小鼠胸腺细胞增殖周期,胸腺组织一氧化氮和抗氧化作用的影响。[方法]分别采用流式细胞术检测右归饮、左归饮对小鼠胸腺细胞增殖周期、SOD测定试剂盒,NO测定试剂盒检测SOD、NO的含量。[结果]小鼠灌服右归饮后,胸腺细胞的细胞周期较之对照组发生明显的改变,表现为G2/M期细胞的比例明显增加,而G0/G1期细胞的比例明显减少(P<0.01)。而左归饮组小鼠胸腺细胞的细胞周期无明显影响;右归饮组小鼠胸腺组织SOD的活力显著高于对照组,NO的含量则显著低于对照组,而左归饮组则均无显著差异。[结论]右归饮有延缓胸腺衰老的作用,其可能的机制之一是增强胸腺组织的抗氧化能力。
【关键词】 补肾;衰老;胸腺;细胞周期;NO;SOD
Abstract: [Objective] To study Yougui Decoction for warming and reinforce kidney yang and Zuogui Decoction for reinforcing kidney yin on the cycle of mouse thymocyte proliferation,the content of NO and SOD of mouse thymocyte. [Method] The cycle of mouse thymocyte proliferation was determined by flowing cell meter, the content of NO and SOD was determined by check reagent case. [Result] Yougui Decotion could markedly inrease the cells in the mouse thymus during the proliferative phase while Zuogui decoction had no such effect, Yougui Decotion could markedly increase the content of SOD of mouse thymocyte,at the same time,it could markedly decline the content of NO of mouse thymocyte while Zuogui decoction had no such effect. [Conclusion] Yougui decoction has the effect of delaying the aging of the thymus, possibly by increasing the thymus ability of resistant oxygenation.
Key words: nourishing the kidney; aging; thymus; cell cycle; NO; SOD
衰老免疫学说认为,衰老是由于自体免疫功能对机体自身组织破坏的结果,免疫组织和免疫器官的功能状态与衰老的发生与关系密切,胸腺的功能减退是与人体衰老进程平行进行的。笔者就补肾复方对小鼠胸腺细胞增殖周期、胸腺组织一氧化氮和抗氧化作用的影响进行研究,对补肾复方在延缓衰老方面进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 实验动物与试剂
健康ICR小鼠,清洁级,由上海实验中心提供,体重(30+2)g,5月龄,雌雄各半。中药复方按《景岳全书》所记载的左归饮、右归饮配方制成实验用药。中药材购买后经鉴定,按传统方法煎煮,经离心,过滤后浓缩为1.0g/ml浓度,高压灭菌,4储存备用。使用前用双蒸水稀释成为10%的使用液。荧光染料碘化丙啶(配成母液,浓度为500mg/L),核糖核酸酶(RNAase),由Sigma公司提供。SOD测定试剂盒,NO测定试剂盒:均由南京建成生物工程研究所提供。
1.2 实验方法
将实验动物随机分为对照组、左归饮、右归饮组,每组8只。左归饮组每只小鼠每日灌服相当于15.6的左归饮稀释液,右归饮组灌服17.1的右归饮,对照组每只灌服等量冷开水,每日1次。连续给药14d后,颈椎脱臼处死小鼠,取各组所有小鼠胸腺组织,称重后,取一部分,制备110胸腺细胞悬液,上Fascaluber流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞增殖周期;取另一部分,制备10%的组织匀浆,用于检测NO;最后取一部分,制备1%的组织匀浆,用于检测SOD。
2 结果
2.1 左归饮和右归饮对小鼠胸腺细胞增殖周期的影响
实验结果见表1。小鼠灌服右归饮后,胸腺细胞的细胞周期较之对照组发生明显的改变,表现为G2/M期细胞的比例明显增加,而G0/G1期细胞的比例明显减少(P<0.01)。而左归饮组小鼠胸腺细胞的细胞周期无明显影响。表1 左归饮和右归饮对小鼠胸腺细胞增殖周期的影响(略)
2.2 左归饮和右归饮对小鼠胸腺NO含量的影响
实验结果见表2。右归饮组与对照组比较有显著差异(P<0.01),而左归饮组则无显著差异(P>0.05)。
2.3 左归饮和右归饮对小鼠胸腺组织SOD水平的影响
实验结果见表2。右归饮组与对照组比较有显著差异(P<0.01),与左归饮组则无显著差异(P>0.05)。表2 左归饮和右归饮对小鼠胸腺组织NO、SOD的影响(略)
3 讨论
现有的资料已证明,衰老时免疫系统的主要变化是胸腺细胞数量减少与胸腺细胞功能的降低[1]。在人体内胸腺是一个与中医学“肾”关系特别密切的器官,胸腺的体积和重量与肾气的盛衰在时间上表现出惊人的一致。胸腺在出生后重量和体积不断增加到青春期前达到下降,以后逐渐衰退,到老年时基本萎缩。从胸腺细胞的增殖周期来看也是如此,7月龄的中老年小鼠胸腺外皮质细胞中S期的细胞要比1月龄的青年小鼠减少45%[2]。提示随着月龄的增加,肾气的衰微,细胞增殖周期明显减慢。中医学认为肺、脾、肾的强弱决定正气的盛衰,其中肾为根本,脾胃化源,肺起敷布和辅助的作用,衰老以肾虚为甚。全国名老中医周仲瑛认为,肾虚是人体衰老的主要徐卫东,内因,防老抗衰必须保肾养肾,防治老年病要重视补肾。从历代的抗衰老方药来看,绝大多数具有补肾作用。目前大量研究已经证明,补肾复方在临床和动物实验中都具有明显的抗衰老的作用,现有研究已表明补肾复方(右归饮)能够抑制胸腺细胞的调亡[3]。左归饮与右归饮同来源于《景岳全书》,都是用来肾虚证的,只不过是补肾阴与肾阳的不同,既然右归饮能影响胸腺细胞,那么左归饮又如何呢?是不是也能影响胸腺细胞。本研究就是以胸腺细胞的细胞周期的变化作为观察指标之一,探索补肾阳复方与补肾阴复方延缓衰老的不同作用机制。实验表明,右归饮能明显增加小鼠胸腺中处于增殖期的细胞,提示右归饮具有延缓胸腺衰老的作用;实验结果还证明右归饮能够增强胸腺组织SOD的活性,降低MDA、NO的含量,说明右归饮延缓衰老的可能机理之一是增强胸腺组织的抗氧化能力[4]。而左归饮对胸腺组织则基本上没有影响,这和目前报道基本是一致的,补肾阴复方对体液免疫功能的影响要远大于对细胞免疫的影响,其中具体的机制还需进一步的探讨!
【文献】
[1]吴伟康.衰老的病理生理.病理生补充教材[M].北京:人民卫生出版社,1998.97?98.
[2]Finche,et al:Handbook of the biology of aging,edl.Ner year: [J] Van Nostrand Reinhold company,1977,3?28.
[3]郑振,沈自伊.补肾与活血复方调节老年鼠T细胞凋亡的对比研究[J].中西医结合杂志,1999,19:610?612.
[4]王晓建.NO与细胞凋亡[J].国外医学理病理与临床分册,2001,21(2):97?99.