四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜血流量及血清SOD与MDA含量的影响

【摘要】  目的：研究四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎的作用及机理。方法：50只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、四君子汤高、中、低剂量治疗组，每组10只。将除空白组外的其余各组大鼠制成脾气虚型慢性萎缩性胃炎模型。灌胃后测定各组大鼠胃黏膜血流量（GMBF）和血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量。结果：与模型组比较，四君子汤中、高剂量组胃黏膜血流量明显增加（P＜0.05或 P＜0.01），四君子汤3个治疗组血清SOD含量明显升高，血清MDA的含量明显下降（P＜0.05或 P＜0.01）。结论：四君子汤可能通过显著改善胃黏膜血流量，升高血清SOD含量、降低血清MDA含量来实现对脾气虚型慢性萎缩性胃炎的治疗作用。

【关键词】  四君子汤 慢性萎缩性胃炎 胃黏膜血流量 超氧化物歧化酶 二醛

    Abstract   Objective：To study the effect and mechanism of Sijunzi decoction on chronic atrophic gastritis rats with Spleen-qi deficiency syndrome. Methods：50 Wistar rats were randomized into blank group，model group，Sijunzi decoction treatment group 1（high dosage），group 2（middle dosage），group 3（low dosage） （n=10）. Chronic atrophic gastritis model rats with Spleen-qi deficiency syndrome were established. After treated for 42 days，the gastric mucosa blood flow and contents of SOD and MDA in serum of each group were detected. Results：Compared with model group，the gastric mucosa blood flow was increased in Sijunzi decoction treatment group 2 and group 3（P＜0.05或P＜0.01），the content of serum SOD was increased and the content of serum MDA was decreased in 3 Sijunzi decoction treatment groups（P＜0.05或 P＜0.01）. Conclusions：Sijunzi Decoction can increase gastric mucosa blood flow and the content of serum SOD，decrease the content of serum MDA，which maybe contribute to treating on chronic atrophic gastritis rats with Spleen-qi deficiency syndrome.

    Key words   Sijunzi decoction；chronic atrophic gastritis；gastric mucosa blood flow；SOD；MDA四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，是健脾益气的经典方剂，由人参、白术、茯苓、甘草组成，主治各种气虚证，临床上多用于治疗慢性消化系统疾病。本实验观察四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜血流量（GMBF）及血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影响，研究四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎大鼠的治疗作用，并进一步探讨该方治疗该病的作用机理。

    1   材料与方法

    1.1   实验材料

    1.1.1   实验动物   清洁级12 w龄Wistar大鼠50只，体重（180~220）g，购自华中科技大学同济医学院实验动物学部（编号：TJLA-2003-168），雌雄各半，分笼饲养，每笼5只，常规喂养标准饲料。

    1.1.2   药品与试剂   丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号：050823；四君子汤的组成方药按照原方比例配制，水煎制成浓缩剂，每1 mL相当于生药1 g，由江汉大学医学与生命学院中医药实验室制备，用时分别配成2.0 g/mL、0.5 g/mL、0.25 g/mL的高、中、低剂量。

    1.1.3   实验仪器   激光多普勒血流计（BIOPAC公司，美国）和迷你型接触式TSD143型探头测定胃黏膜血流量。

    1.2   实验方法

    1.2.1   分组与造模   大鼠适应性喂养1 w后，随机分为空白组、模型组、四君子汤高、中、低剂量治疗组，每组10只。其中空白组雌雄各半，分笼饲养。正常喂饲，不做处理。其余动物参照［1］方法并略有改进进行造模：给0.2%去氧胆酸钠溶液代水自饮，45 d后加中药煎剂（厚朴、枳实、大黄以3∶3∶2比例制成）给大鼠灌胃，约45 d，同时隔日喂饲，日食不限量。在自饮去氧胆酸钠14 d后，足部皮内注射30%胃组织悬液与等量完全弗氏佐剂混合乳剂（0.1 mL/只），7 d后再腹腔注射30%胃组织悬液（0.1 mL/只）。

    1.2.2   造模后大鼠整体反应判断标准   精神倦怠，嗜卧，懒动，拱背，蜷缩、扎堆；舌淡苔少，眼眯，脸面被毛憔悴，耳尾色白、毛无光泽；严重时出现受惊动时无神，抓取时挣扎无力；软便，溏便，泄泻，受激排便率增高；食量减少，体重增长减慢或体重下降；体温不变或略有降低。如出现上述表现，则可确认造模成功。

    1.2.3   给药方法   造模成功后给各组大鼠灌胃，其中四君子汤各组灌服各浓度四君子汤药液，空白组不做任何处理，模型组灌服等量蒸馏水，每日1次，连续42 d，各组动物常规喂养，给药结束后进行有关指标检测。

    1.2.4   指标观察与检测方法

    1.2.4.1   胃黏膜血流量测定   治疗结束后，各组大鼠禁食不禁水12 h，按45 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠将大鼠麻醉，于剑突下沿正中线剖腹并游离出胃，于幽门前壁少血管处切一个5 mm小口，插入TSD143型探头，分别于胃窦、胃体部的大小弯处4点测GMBF，取其平均值，血流量单位以PU值表示。

    1.2.4.2   血清SOD和MDA含量测定［2］   将大鼠剖腹，腹主动脉采血6 mL，分别分离血清，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD，采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA，具体操作方法严格按说明书进行。

    1.3   统计学处理

    各组数据以表示，组间比较采用方差分析。所有数据输入SPSS13.0统计软件进行处理。

    2   结   果

    2.1   各组大鼠胃黏膜血流量比较

    检测结果见表1。

    由表1可见，与空白组相比，模型组大鼠胃黏膜血流量显著降低（P＜0.01）。经四君子汤后，3个治疗组大鼠的胃黏膜血流量明显增加，与模型组比较，中剂量组有显著差异（P＜0.05），高剂量组有极显著差异（P＜0.01），提示四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎有治疗作用。

    2.2   各组大鼠血清SOD和MDA比较

    检测结果见表2。

    由表2可见，与空白组比较各组大鼠血清SOD含量均有不同程度降低，MDA含量均有不同程度升高，其中，模型组大鼠变化极显著（P＜0.01），提示造模成功。经四君子汤治疗后，3个治疗组大鼠的血清SOD含量较模型组明显升高并接近正常值，MDA的含量较模型组明显下降并接近正常值；与模型组比较，四君子汤低、中剂量组有显著差异（P＜0.05），高剂量组有极显著差异（P＜0.01），提示四君子汤对脾气虚型慢性萎缩性胃炎有治疗作用，且疗效随剂量增加而增高。

    3   讨   论

    慢性胃炎是一种常见病、多发病，发病率在各种胃病中居首位，且随年龄增长逐渐增高。临床上通常将其分为浅表性、萎缩性和特殊类型3大类。慢性萎缩性胃炎属中医“胃脘痛”范畴，病机多为本虚标实，本虚以脾气虚弱为主，标实以瘀血阻络为主。慢性萎缩性胃炎发生时，胃黏膜萎缩而被肠上皮细胞取代即肠化生；炎症继续演变，则细胞生长不典型，即间变，甚至细胞增生而致癌变。慢性萎缩性胃炎的胃癌发生率约为10％左右，因此应高度重视慢性萎缩性胃炎的治疗，以防癌变。

    胃黏膜经常遭受胃内各种物质的损害，但仍然能够保持其机能完整，这是因为GMBF在黏膜防御中起重要作用。丰富的GMBF不仅为黏膜细胞供应营养物质和氧气，而且可带走组织中的H＋ 和向黏膜表面运送HCO3－，HCO3－可中和胃腔和反流入上皮细胞的H＋，达到保护胃黏膜的作用，胃、十二指肠黏膜血流量在溃疡形成和愈合过程中起着重要作用［3］。胃黏膜血液灌流减少将导致胃黏膜发生损伤或黏膜对损伤性物质的敏感性提高；胃黏膜组织充足的血液供应具有防止损伤性因子对黏膜组织的破坏作用［4］。

    自由基是机体正常代谢的必然产物，在生物体内发挥着一定的生理作用，但如果生成过多，超过机体的清除能力时，就会成为损害生物机体的毒素，导致组织损伤。超氧自由基对胃黏膜的损伤作用与胃黏膜血流有关。在充足的血液和氧供应下，正常的黏膜细胞线粒体内进行着有氧氧化过程，这是细胞内提供能源的主要方式。缺血时，黏膜细胞代谢过程中，从次黄嘌呤转变为黄嘌呤的反应容易产生超氧自由基，造成黏膜损伤和血管中蛋白质外漏［5］。SOD是自由基的清除防御系统最重要的标志酶之一，在胃壁细胞内活性很高，可在一定程度上反映机体清除自由基能力的大小。MDA是脂质过氧化作用的最终产物，故测定MDA水平可反映氧自由基的水平。研究认为脂质过氧化是氧自由基引起组织损伤的主要机理，氧自由基的代谢失衡在胃肠黏膜损伤中起着重要作用。慢性胃炎患者胃黏膜组织中的SOD活力降低已被公认［6］。有报道认为在慢性胃炎黏膜组织中氧自由基水平升高，造成对胃黏膜的损害，可能是慢性胃炎的重要发病机制［7］。

    四君子汤益气健脾，是治疗脾气虚证的代表方。方中人参补气健脾，人参皂苷可降低血中MDA含量，提高血中SOD活力；白术健脾燥湿，白术水煎液可显著提高老年小鼠全血GSH-PX活力，显著降低红细胞中MDA含量；茯苓渗湿健脾，茯苓多糖能不同程度增加血清SOD活性，降低MDA含量；炙甘草益气调中。诸药合用，具有增强抗氧化能力、延缓衰老的作用［8~11］。本研究表明模型鼠胃黏膜血流量下降，血清SOD水平明显降低， MDA水平均明显升高，表明过氧化脂质损害增强，而抗氧化能力减弱，胃黏膜受到损害，进一步证明了自由基代谢异常在慢性胃炎的发病中起着重要作用。经四君子汤治疗后，大鼠胃黏膜血流量显著增加，血清SOD的含量明显升高，MDA的含量明显下降并接近正常，提示四君子汤通过升高SOD的含量、降低MDA的含量来实现对本病的治疗作用，且与低剂量比较，高剂量有更好的疗效。

【】
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