芪蛭胶囊对四氯化碳致小鼠急性肝损伤保护作用的研究
【摘要】 目的 研究芪蛭胶囊对四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 采用0. 2% CCl4液体石蜡灌胃制作CCl4小鼠急性肝损伤模型。通过检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）水平，探讨芪蛭胶囊对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用。结果 模型组与空白组比较 , 血清ALT、AST明显增高（P<0.01）；芪蛭胶囊组与模型组比较，血清ALT、AST、TNF-α明显降低（P<0.01）。结论 芪蛭胶囊对CCl4所致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。 石自刚（1979～），男，汉族，河南籍，青海大学医学院2005级研究生
【关键词】 芪蛭胶囊 四氯化碳 急性肝损伤 实验研究
Abstract Objective To investigate the protective effects of Qizhi capsule against acute hepatic injury induced by CCl4 in mice. Methods Acute hepatic injury model was induced by intragastric administration of 0.2% CCl4 paroleine. To explore the roles of Qizhi capsule against acute hepatic injury induced by CCl4 in mice, by observe the change of blood serum alanine aminotransferase（ALT）、aspartate aminotransferase（AST）、tumor necrosis factor -α（TNF-α）、total protein（TP）and albumin（ALB） Results The serum ALT, AST, TNF-α in mice in model group were increased significantly compared with control group (P<0.01). The serum ALT, AST, TNF-α in Qizhi capsule group were decreased significantly compared with model group (P<0.01). Conclusion Qizhi capsule have an extended protection effect to the acute hepatic injury induced by CCl4 in mice.
Key words Qizhi capsule Carbon tetrachloride Acute hepatic injury Experimental study
本实验研究是在《芪蛭胶囊对大鼠脂质代谢紊乱的预干扰作用》研究的基础上进行的，其研究提示芪蛭胶囊对灌服高脂乳剂引起的脂质代谢紊乱有一定的预防和调节作用［１］。本文报告其对CCl4 所致小鼠急性肝损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1. 1. 1 实验动物
全雄性ICR小鼠 40只，体重 （25±5）g，由青海省实验动物中心提供。饲料为全价颗粒饲料，水为生活饮用水。
1. 1. 2 药物
芪蛭胶囊由本院中医系中药制剂实验室制备，4℃贮存备用。实验时去胶囊壳，加蒸馏水混溶，制成所需浓度的混悬液。联苯双酯滴丸由浙江万邦药业有限公司生产 （产品批号：070202），用时加蒸馏水混溶，制成所需浓度的混悬液。
1. 1. 3 主要仪器
AU2700全自动生化分析仪（日本奥林巴斯公司生产）由青海大学医学院附属提供；Elx800酶标仪（美国Bio-TEK公司生产）由青海大学医学院高原医学研究中心提供。
1.1. 4 主要试剂
TNF-α试剂盒由上海麦莎生物科技有限公司提供；四氯化碳(CCl4)，分析纯，由上海化学试剂供应站提供（批号：811208）。
1. 2 方法
1. 2. 1 分组与处理
雄性ICR小鼠40只，称重，随机分为4组，即空白组、造模组、联苯双酯组及芪蛭胶囊组。芪蛭胶囊组与联苯双酯组每日灌胃给药（联苯双酯组，0.20 g/ kg， 芪蛭胶囊组，12.8g/ kg），1 次/d，连续1W。空白对照组与模型组给予等量蒸馏水。除空白组外其他各组于第1、4、7d在给药或蒸馏水30min后用0.2% CCl4液体石蜡（10ml/kg）灌胃造模。末次造模6h后取材。
1.2.2 观察指标
用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TP、ALB。用酶联吸附法（ELISA）检测TNF-α，用Elx 800酶标仪在波长450 nm处检测吸光度值。
1.2. 3 统计学处理
数据采用 SPSS13. 0 软件分析。多组间均数进行单因素方差分析。
2 结果
2.1 芪蛭胶囊对急性肝脏损伤模型小鼠肝生化指标的影响（见表1）表1芪蛭胶囊对CCl4 所致肝损伤小鼠血清生化指标的影响( 注：**与造模组比较P<0.01；#与空白组比较P<0.01.
表 1显示，各组小鼠TP、ALB之间均无显著性差异，提示CCl4 所致急性肝损伤小鼠血清蛋白含量改变不明显。但是模型组小鼠血清 ALT、AST活性显著升高（P<0.01），说明小鼠急性肝损伤模型已建立。芪蛭胶囊组、联苯双酯组与模型组比较均能降低小鼠血清ALT、AST活性（P<0.01），表明芪蛭胶囊与联苯双酯均有保肝作用，而联苯双酯更明显。
2.2 芪蛭胶囊对急性肝损伤模型小鼠TNF-α的影响（见表2）
表2芪蛭胶囊对CCl4所致肝损伤模型小鼠TNF-α的影响( 表 2显示，造模组与空白组相比较，TNF-α显著升高（P<0.01），而给药组与造模组比较TNF-α明显下降（P<0.05，P<0.01），提示联苯双酯与芪蛭胶囊均有保肝作用，但芪蛭胶囊降低TNF-α的效果优于联苯双酯，可能与芪蛭胶囊具有减少致炎作用的细胞因子的释放有关。
3 讨论
祖国医学中没有肝损伤的病名，在临床的辨证论治中，多将其归于胁痛、黄疸、肝气郁结等病症中。其病因主要为湿热外侵或疫毒感染蕴结肝脾，肝失疏泄，不能调畅气机而气滞，木不疏土，影响脾胃运化，使气血生化失源，最终导致气滞血瘀，脉络失和。
“见肝之病，则知肝当传之与脾，故先实其脾气”（《难经·七十七难》）；“见肝之病，知肝传脾，当先实脾”（《金匮要略》）。芪蛭胶囊为自拟方, 具有益气健脾、活血化瘀之功效。黄芪为方中君药，能益气健脾，气旺则瘀血行，脾健则防肝病之传变，同时能升发脾胃之阳气。瘀血属阴邪，为有形之邪，赖阳气以化，黄芪之温而微微生火，使脾复健运，清浊升降有序，输化正常。水蛭为方中臣药，具有破血逐瘀之效，善于祛经络之瘀。黄芪配伍水蛭，奏益气活血之效。姜黄活血化瘀，兼有舒肝行气止痛之效，姜黄可加强水蛭活血化瘀之功效，善入肝，为方中佐药，具有行气及化肝郁脾虚所致的瘀血停滞之功效。该方补运结合，既能益气舒肝健脾，防肝病之传变，又能行气活血化瘀，使气机流畅，从而调节肝的疏泄功能。本方重在健脾益气，防病之传变，以去瘀血。
CCl4 进入肝脏后，可直接溶解肝细胞膜，同时生成活性较强的三氯甲基自由基和氯甲基自由基，这些自由基作用于细胞膜脂质，启动脂质过氧化反应，致肝细胞损伤。本实验中芪蛭胶囊组 ALT、AST的含量与造模组比较有不同程度的降低（P<0.01），提示芪蛭胶囊有一定的保肝作用，这种作用可能与黄芪中所含的黄芪多糖有关［２］，同时这种作用也可能与姜黄中的姜黄素对AST、ALT活性的抑制作用和姜黄苷促进胆汁分泌的作用有关［３］。
CCl4造成的肝损伤可刺激单核/巨噬细胞释放多种细胞因子，主要有TNF-α及IL-1等。细胞因子TNF-α是引起急性肝损伤的重要炎症介质之一，在肝细胞受损时产生，并对肝细胞造成继发性损伤，即“二次打击”，进一步加重肝脏炎症。有研究表明，TNF-α对肝脏具有明显的致毒作用，其含量与ALT含量及肝组织损害程度呈平行关系。本研究中芪蛭胶囊组与造模组相比TNF-α显著降低 (P<0.01)，提示芪蛭胶囊保肝作用的机制可能是通过减少TNF-α等致炎因子的释放而起作用，这与“肝病实脾”理论相吻合。其作用机制是否与芪蛭胶囊中所含的黄芪多糖、水蛭素、姜黄素有关，有待进一步研究证明［4～6］。
本实验显示，芪蛭胶囊对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。
【】
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