重叠感染SEN病毒对乙肝后肝硬化发展的影响
【摘要】 目的: 通过检测慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者SEN病毒(SENV)的感染情况，了解重叠感染SENV对乙肝后肝硬化的影响。方法: 采用巢式聚合酶链反应(nPCR)对148例慢性乙型肝炎患者、119例乙肝肝硬化患者和80例健康体检者进行SENV-D/H亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行测序。结果: SENV-H在乙肝肝硬化患者血清中的检出率(为37.8%)高于慢性乙型肝炎患者(为26.4%)，两者差异有显著性（P <0.05），而SENV-D的检出率分别为34.5%和30.4%，两者差异无显著性（P >0.05）；健康体检者血清中，SENV-H和D的检出率分别为13.8%和16.3%，与上述两组患者相比差异有显著性（P <0.05）；此外，在77例有输血史患者和190例无输血史患者血清中，SENV的总检出率分别为53.2%和55.8%，两者差异无显著性（P >0.05）。结论: 重叠SENV-H感染可能对乙肝后肝硬化发展具有一定的影响，并且SENV的主要传播方式除输血外可能还存在其他途径。
【关键词】 SEN病毒 肝炎 乙型 慢性 肝硬化 输血
Abstract: Objective: To investigate the influence of SEN virus infection on the incidence of liver cirrhosis in patients with chronic hepatitis B (CHB). Methods: SENV-D and SENV-H DNA were detected in 148 cirrhosis patients with CHB，119 CHB patients and 80 healthy blood donors with nested-PCR. Some PCR products were sequenced. Results: By sequencing，the specificity of genotypespecific PCR was confirmed. The positive rates of SENV-H were obviously higher in cirrhosis patients with CHB than that in CHB patients(37.8% vs 26.4%，P <0.05). The prevalence of SENV-D/H viremia was significantly higher in patients with liver cirrhosis and CHB than that in healthy blood donors (SENV-D: 34.5%，30.4% vs 16.3%；SENV-H: 37.8%，26.4% vs 13.8%；P <0.05). No significant difference was found for SENV-H between patients with transfusion and ones without transfusion (53.2% vs 55.8%，P >0.05). Conclusion: Coinfection with SENV-H may influence the incidence of liver cirrhosis in patients with chronic hepatitis B，and transfusion is not single route of transmission of SEN virus.
Key words: SEN virus；hepatitis B，chronic；liver cirrhosis；blood transfusion
SEN病毒（SENV）是2000年意大利学者Primi等[1]从1例人类免疫缺陷病毒（HIV）阳性的静脉注射毒品者血清中分离出的DNA病毒，以后在肝炎、HIV、血液透析患者，甚至于正常人群中都发现了它的流行。目前乙型肝炎患者重叠SENV感染在我国已比较常见，并且有多位学者[2-4]研究认为：SENV感染可能会影响肝炎肝组织病改变，与肝硬化的发生和发展有关。本研究通过检测分析慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者SENV的感染情况，探讨重叠SENV感染对乙肝后肝硬化发展的影响。
1 对象和方法
1.1 研究对象 所有血清标本采集时间为2005年9月至2006年6月。乙肝患者来自本院感染科，其中包括慢性乙型肝炎患者148例，男102例，女46例，年龄18～69岁；乙肝肝硬化患者119例，男91例，女28例，年龄30～77岁。诊断以2000年《病毒性肝炎防治方案》为依据，并排除了甲型(HAV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)、戊型(HEV)肝炎病毒及HIV的感染。上述患者中，有输血史的为77例，男56例，女21例，年龄27～74岁；无输血史的为190例，男137例，女53例，年龄18～77岁。80例健康体检者来自本院医疗保健中心，男53例，女27例，年龄26～70岁。血清放-70 ℃低温冰箱保存。
1.2 研究方法 采用巢式聚合酶链反应（nPCR）方法检测，对GenBank中所发表的SENV-D(AB059352)和SENV-H(AB059353)进行分析。用Primer5.0软件进行引物设计，由上海生工生物工程公司合成。SENV-D的外引物为S：5'GGAAGAATGGGAGAACGC3' A：5'GGCTGAATCTGACTGTGCTC3'，内引物为S：5'GGGTGGACTAGGAGACGGTA3'A：5' GGCTGAATCTGACTGTGCTC3'；SENV-H的外引物为S：5'CGACGACTAGACGGTACAAA3' A：5'TC
TTCATGCAATGCCTGGA3'，内引物为S：5'ACCCCCTAAC
ACTCACCC3'A：5'ACCTTACACAAGTCATGCTGG
C3'。 病毒核酸抽提试剂为TaKaRa公司的病毒RNA/DNA快速纯化试剂盒，并根据说明书进行操作。取第二次PCR反应产物10μl，用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色紫外灯观察，SENV-D亚型出现223 bp条带，SENV-H亚型出现162 bp条带。
1.3 统计学处理方法 组间数据比较采用SPSS软件的x2检验。
2 结果
2.1 SENV的检出率 由表1可见，SENV-D和H亚型在乙肝肝硬化和慢性乙型肝炎患者中的检出率均高于健康体检者，差异存在显著性（P <0.05）；并且SENV-H在乙肝肝硬化患者中的检出率高于慢性乙型肝炎患者，两者差异有显著性（P <0.05），而SENV-D在乙肝肝硬化和慢性乙型肝炎患者之间差异无显著性（P>0.05）。
由表2可见，SENV-D在无输血史的乙肝患者中的检出率高于有输血史的乙肝患者，差异存在显著性（P <0.05）；而SENV-H及总检出率在两者间的差异均无显著性（P >0.05）。
2.2 SENV部分核酸序列分析 取SENV-D和SENV-H PCR阳性产物各3份进行测序，与GenBank的序列比较，其核苷酸同源性分别为94%～97%(AY264849)和88%～91%(AY206683)。
3 讨论
SENV是近几年来发现的一种新的DNA病毒，其核苷酸序列变异频率较高，目前分为8个亚型(A～H)，而SENV-D和SENV-H被认为可能是输血后肝炎相关的病原体[5]，因此对SENV的研究多集中在这两个亚型方面。本研究检测显示SENV-D和H亚型在乙肝肝硬化和慢性乙型肝炎患者中的检出率均高于健康体检者，推测SENV和HBV可能存在相似的传播途径和协同的相互作用。Moriyama等[2]对473例HCV感染的慢性肝炎或肝硬化患者进行检测发现，与SENV DNA阴性患者相比，SENV DNA阳性患者的肝实质中有更多的炎性细胞浸润以及更强烈的炎症反应，其阶段进展程度与SENV DNA有关，故认为混合SENV感染可能会影响HCV相关的慢性肝炎或肝硬化的组织病改变。我国的几位学者[3, 4]也从部分非甲-非戊型肝炎患者身上检测到了SENV的感染，通过对肝组织检查发现有肝细胞损害、炎性细胞浸润以及纤维组织增生等一系列组织病理学的改变。而本研究结果显示SENV-H在乙肝肝硬化患者血清中的检出率高于慢性乙型肝炎患者，但SENV-D的检出率无明显差异，其可能的原因有：①重叠SENV-H的感染可能会加快慢性乙型肝炎患者为肝硬化。②肝硬化患者更容易感染SENV-H。③促使慢性乙型肝炎发展为肝硬化的并非SENV-H本身，而SENV的其他某种或几种亚型，而SENV-H是由致病性SENV通过病毒基因重组、突变而转变成的过渡状态；当然，也不排除两者间无直接关系的可能性。
此外，虽然有报道[5-8]显示SENV主要是通过输血传播的，但本研究检测发现有无输血史的乙肝患者，其SENV的检出率无明显差异，甚至对于SENV-D的检出率，无输血史的乙肝患者高于有输血史的乙肝患者，因此推测输血不是SENV唯一的传播途径，SENV可能还存在其他的传播方式，如消化道传播等，具体有待于进一步的研究。
【】
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