黄蛭口服液的制备工艺研究

【摘要】  目的：探讨黄蛭口服液的最佳制备工艺。方法：以总氮的含量为指标，采用L9（34）正交试验设计对提取纯化工艺进行优化，考察提取溶媒、提取时间、提取次数、醇沉浓度对总氮含量的影响。结果：黄蛭口服液的的最佳提取纯化工艺为：用水作为提取溶媒，煎煮2次，每次煎煮2 h，醇沉浓度为60%。药液经冷藏处理和调pH值为4.90~5.30，能使成品达到最佳澄明度与稳定性。结论：优选得到的工艺稳定可行，适合大生产要求。

【关键词】  黄蛭口服液 制备工艺 正交试验

    Abstract   Objective：  To establish the optimal preparation procedure of Huangzhi oral liquid. Methods： 3 levels from each of the amount of four factors extracting solvent, extracting time, extracting number and alcohol precipitation concentration were subjected to the orthogonal design with the content of total nitrogen as an index. Results：The most favorable extraction was as follows: adding water into Chinese medical materials, and boiling for 2 h each time, extracting 2 times in all, 60% alcohol precipitation concentration.  Conclusion： This technological process is stable, feasible, and suitable for the requirement of production on a large scale.

    Key words  Huangzhi oral liquid; preparation technological process；orthogonal design黄蛭口服液系广州中医药大学附属中山中研制的纯中药制剂，由大黄、水蛭、牛蒡子3味中药组成，具有活血化瘀、行气化浊的功效，能明显改善患者的血液黏稠度及左室肥厚 ［1］；也可明显改善高脂血症血瘀痰浊证候患者的血脂水平和临床症状，作用优于丹田降脂丸 ［2］。临床主要用于高脂血症、高血压、冠心病、脑血管意外等。

    为确保制剂产品质量，保证用药的安全有效，笔者按照中药新药研究规范，根据以上几味中药的理化性质，以水蛭中总氮的含量为指标，采用正交试验法优选了该口服液的提取与纯化工艺条件，并通过对药液进行冷藏处理和调节药液pH值的方法来研究其对成品药液澄明度与稳定性的影响，从而确定该口服液的最佳制备工艺。

    1   实验材料

    1.1   实验仪器

    半微量凯氏蒸馏装置（广州玻璃仪器厂）；DF-808A高精度数字pH/离子计（广州市登峰仪器厂）；JA1203天平（上海天平仪器厂）；电热恒温水浴锅（上海衡平仪器仪表厂）。

    1.2   药品与试剂

    大黄、水蛭、牛蒡子药材购自广州致信中药有限公司，水蛭经本院梅全喜教授鉴定为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman，其余药材均符合2005年版《药典》的要求。所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

    2   方法与结果

    2.1   提取与纯化工艺优选

    2.1.1   正交因素水平确定   根据处方中各药材理化性质及常规口服液制备工艺特点，选择提取溶媒（A）、提取时间（B）、提取次数（C）、醇沉浓度（D）4个因素，每个因素各取3个水平进行L9（34）正交试验，以总氮含量为考察指标。具体因素水平表见表1。

    2.1.2   总氮含量的测定 

    2.1.2.1   消解   按《中国药典》2005年版一部附录氮测定法中半微量法测定总氮含量 ［3］。精密量取样品溶液各0.2 mL，无损失地转入凯氏烧瓶中，加入0.3 g无水硫酸钠与30％的硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0 mL和数粒玻璃珠，充分混匀。将上述烧瓶置于通风橱内的电炉上加热，使溶液保持在沸点以下，不时振摇，炭化至泡沫消失，然后加大火力，沸腾至溶液变成澄明的绿色后，继续加热10 min。

    2.1.2.2   蒸馏   另取2％硼酸溶液10 mL，置于100 mL锥形瓶中，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端插入液面下。然后将凯氏烧瓶中的内容物经漏斗转入蒸馏瓶中，少量用水淋洗凯氏烧瓶和漏斗数次，再加入40％氢氧化钠溶液10 mL，用少量水洗涤漏斗数次，加热进行蒸汽蒸馏，使蒸汽通过冷凝管进入收集瓶内，至硼酸溶液开始由酒红色变为蓝绿色起，继续蒸馏约10 min后（馏出液容积约为70 mL），将冷凝管尖端提出液面，蒸汽继续冲洗约1 min，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

    2.1.2.3   滴定   馏出液用硫酸滴定液（0.005 mol·L-1）滴定至溶液由蓝绿色变成灰紫色，并将滴定结果用空白试验校正，记下所消耗硫酸滴定液的体积（V1）。

    2.1.2.4   空白试验   精密量取同等体积的蒸馏水代替试样，同前操作步骤进行空白测定，记下所消耗硫酸滴定液的体积（V2）。

    2.1.2.5   总氮含量   按所消耗每1 mL硫酸滴定液（0.005 mol·L-1）相当于0.140 1 mg的氮计算，计算公式如下。

    2.1.3   正交试验与结果分析

    2.1.3.1   正交试验   按处方比例准确称取大黄、水蛭、牛蒡子药材共18份（每次试验平行2次），分别按L9（34）正交表进行试验。用水作为溶媒时直接加水煎煮，用乙醇作为溶媒时分别加相应浓度乙醇回流即可。提取液醇沉后，回收乙醇，浸膏加蒸馏水溶解至规定容量，备用。精密量取上述溶液0.2 mL，按2.1.2方法测定总氮含量。平行试验2次，取平均值，测定结果见表2。再用SPSS10.0统计软件对测定结果进行方差分析，结果见表3。

    2.1.3.2   极差方差分析   由表2极差R值可知，RA>RB>RC> RD，影响因素大小顺序为A>B>C>D，即提取溶媒是影响浸出物量的重要因素，醇沉浓度影响最小。由表3也可看出，A、B、C因素都有显著性差异，而D因素对总氮含量的影响无显著差异。

    2.1.3.3   试验结果综合分析   通过直观分析和方差分析可以看出，A、B、C因素为主要影响因素，对试验结果具有显著影响，理论上应各取其好的水平，为A1、B3、C3。D因素即醇沉浓度为次要影响因素，对试验结果的影响无显著差异，结合生产实际情况，可选取其适当水平为D2；而C因素（提取次数）各水平虽有显著性差异，理论上应选择3次提取，但通过分析试验数据，可以看出，提取2次与提取3次总氮提取率相差不大，结合生产实际情况，从缩短生产工艺和降低成本方面考虑，把提取次数确定为2次，即C2。所以确定本方的提取纯化工艺条件为A1B3C2D2，即原方药材用水作为提取溶媒，煎煮2次，每次煎煮2 h，将药液滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20左右，加入乙醇使醇浓度达60％进行醇沉。

    2.1.4   验证试验   为进一步确定此工艺的合理性,按照正交试验优选的工艺条件A1B3C3D2进行验证试验，按前述方法测出总氮含量，其结果分别为：12.3 mg/mL，12.6 mg/mL，11.8 mg/mL。与正交试验各工艺结果比较总氮得率较高，表明本方水溶性有效成份基本提取完全，该工艺条件是可行的。由验证结果进一步确证此工艺为最佳提取纯化工艺。

    2.2   药液澄明度稳定性工艺研究

    2.2.1   药液的冷藏处理研究   取回收乙醇后的浸膏加足量蒸馏水溶解至规定量，将药液平均分为两份。一份直接过滤澄清，另一份置（4～8）℃冷库中放置24 h，取上清液过滤澄清，对比两种处理方式的药液稳定性，结果见表4。试验结果表明：药液经冷藏处理后，产生橡胶状的沉淀，上清液经过滤后澄明度稳定性得到提高。

    2.2.2   成品pH值与药液澄明度稳定性的研究   药液的pH值对成品的澄明度稳定性有较大的影响，通过调节药液的pH值并进行观察，从而确定成品较好的pH值范围，结果见表5。试验结果提示：随着药液pH值的升高，有利于药液的澄明度与稳定性，但同时加深了药液颜色并增加了药液的腥味，所以，较好的pH值范围是4.9～5.3。

    3   讨   论

    黄蛭口服液主要有活血化瘀的功效，方中水蛭为君药，其主要成分多为各种氨基酸和多肽，氨基酸在生物机体代谢中起着重要作用，直接参与合成各种酶、激素和调节人体内代谢的平衡。氨基酸在水蛭活血化瘀的功效中起着重要的作用，提取液中总氮含量的多少可以反映氨基酸提取效果的优劣。因此，采用凯氏定氮法测定总氮含量作为工艺研究的评价指标。实验表明，该方法操作简单、稳定、可行。

    黄蛭口服液是在汤剂基础上改进而成，其提取纯化工艺直接影响到制剂质量和临床应用效果。通过以上实验确定其提取纯化工艺为A1B3C2D2，即原方药材用水作为提取溶媒，药材加水煎煮2次，每次煎煮2 h，将药液滤过，合并2次滤液，浓缩至相对密度为1.20左右（50 ℃～60 ℃），加入乙醇使醇浓度达60％，置冰箱内放置24 h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，所得的浸膏加适量蒸馏水稀释至足量。

    澄明度是口服液质量的关键指标，本产品由于含生药量较高，并且含动物类药材，笔者通过对药液进行低温冷藏处理和调整pH值，使成品能够保持澄清稳定。

【】
  ［1］李雪山，缪灿铭，林凯旋，等. 黄蛭口服液对高血压病血液流变学及左室肥厚影响的临床研究［J］. 新中医，2004，36（7）：23.

［2］缪灿铭，何训昌，李燕林，等. 脑脂平高脂血症的临床观察［J］. 广州中医药大学学报，1999，16（4）：296.

［3］国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）［M］. 北京：化学出版社，2005：附录Ⅸ L.