犬单剂量口服血塞通片的血浆药动学研究

【摘要】  目的：研究血塞通片在犬血浆中的药动学。方法：6条犬单剂量口服血塞通片，采用高效液相色谱法测定血浆浓度。结果：达峰时间（tmax）,峰浓度（Cmax），半衰期（t1/2）和 曲线下面积（AUC）(0→4h)分别为56.7±5.2min，15.49±3.14ng/μl，55.66±13.64min和1543.93±157.07ng·min·μl-1。结论：本方法灵敏、简单、快速、专属性强，可满足临床药动学研究的要求。

【关键词】  三七总皂苷 高效液相色谱法 药动学

    Study on pharmacokinetics of xuesaitong tablet after a single oral  dose in dog plasma

    CHEN Xia, 1WU Feng， 1XU Jiliang， et al   （Department of Pharmacy, the Second Affliated Hospital of Nantong University,Nantong 226001; 1Medical College ,Nantong  University）

    [Abstract]   Objective：To study the pharmacokinetics of xuesaitong tablet in dog plasma. Methods：6 dogs received single-oral-dose xuesaitong  tablets and plasma concentrations were determined by HPLC. Results：The main pharmacokinetics  parameters  of  xuesaitong tablets were that tmax was （56.7±5.2）min， Cmax was （15.49±3.14）ng/μL，t1/2 was（55.66±13.64）min， and AUC(0→4h) was （1543.93±157.07）ng·min/μl. Conclusion：The method is highly sensitive, rapid, simple and specific enough to determine pharmacokinetics.

    [Key words]   Panax notoginsenosides；High-performance liquid chromatogaphy；Pharmacokinetics

    血塞通片为中药三七制成的片剂，三七总皂苷（Panax notoginsenosides，PNS）是血塞通片的主要活性成分，为多成分复杂体系[1]。要明确系统地控制血塞通片质量，必须选择有专属性的方法[2]，选择具有代表性的单体成分进行含量测定，建立与含量有比例关系的质量控制指标。单体成分人参皂苷Rg1是血塞通总皂苷中含量较高的组分[3]，本实验选用Rg1作为质量控制指标，以高效液相色谱法进行分析，采用非房室模型，其在犬血浆中的药动学参数，为该药的临床应用提供理论依据。

    1   材料与方法

    1.1   仪器与试剂   Agilent 1100 HPLC 仪系统（包括G1354A四元泵，G1322A在线真空脱气机，G1314A可变波长检测器，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1315B二极管阵列紫外检测器；Agilent 1100化学工作站）。vs-550全自动高速冷冻离心机（韩国）；XW-80A旋涡混合器（上海医大仪器厂）；AX205精密天平（上海梅特勒—托利多仪器有限公司）。人参皂苷Rg1对照品（药品生物制品检定所）；血塞通片（云南金泰得制药总公司，批号：041118）；乙腈：色谱纯；驯服家犬（体重8～10kg，南通大学实验动物中心提供）。

    1.2   方法

    1.2.1   色谱条件   色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C8（4.6mm×150mm,5μm）；柱温：30℃；流动相：A：80%纯化水，B：20%乙腈；流速：1ml/min；检测波长：203nm；对照波长：300nm。

    1.2.2   给药方案   驯服家犬6只，雌雄各半，体重为10±0.5kg，口服血塞通普通片，按20mg/kg计算给药量。给药前禁食12h，不禁水。

    1.2.3   标本采集   给药前采集空白血样，用药后10、20、30、40、50、60、75、90、120、150、180、240min从犬前肢隐静脉取血1.5ml，肝素抗凝，3500r/min离心分离出血浆后，于-20℃冻存。

    1.2.4   标本处理   取血浆0.5ml置5ml离心管中，加入乙腈1.25ml，旋涡混合器涡旋30s，10000r/min离心10min,取上清液10μl注入ＨPLC色谱仪，记录分析结果。

    1.2.5   血浆标准曲线的绘制   取离心管7只，分别加入犬空白血浆0.5ml，再加入Ｒg1对照品配成2.58、8.6、17.2、25.8、34.4、43.0、51.6ng/μl的标准浓度系列，按“1.2.4”操作，以待测物浓度C为横坐标，待测物的峰面积Y为纵坐标，进行线性回归分析。

    1.2.6   提取回收率及精密度实验   配制8.6、25.8、51.6ng/μl 3种浓度的Ｒg1血浆样品，按“1.2.4”项处理后经HPLC测定所得值与相应浓度的样品水溶液直接进样所得值的比值计算回收率，每个浓度重复5次。另于同一天内测定5次和连续测定5d，计算日内、日间精密度。

    1.2.7   方法专属性考察   取驯服家犬空白血浆样品、空白血浆添加Rg1标准品样品及实测血浆样品,按“1.2.4”项测定，记录其色谱图。

    1.2.8   稳定性试验   将三种浓度的Ｒg1血浆样品，置入-20℃，冷存7天后37℃水浴，再按血浆样品处理方法处理。结果其相对标准偏差分别为7.93%、5.75%、3.53%，RSD值均＜10%，表明Ｒg1血浆样品在上述条件下，至少在1周内稳定。

    1.3   药动学参数方法   将测得的血药浓度—时间数据以非室模型经计算机拟合，计算药代动力学参数。Cmax、Tmax 以实测值计算，AUC按梯形面积法计算。

2   结      果

    2.1   标准曲线回归方程及相关系数   Y=1.295667C-3，相关系数r=0.9969（n=7），线性范围2.58～51.6 ng·μl-1，最低定量浓度为2.58ng/μl。

    2.2   提取回收率及精密度实验结果   见表1，结果表明该分析方法准确度高、重现性好。

    2.3   方法专属性考察   在本实验条件下Rg1的保留时间约为11.8min,血浆内源性物质不干扰Rg1的含量测定，该分析方法专属性较好。HPLC色谱图见2.4   犬口服血塞通片后Ｒg1不同时间平均血药浓度   见表2。由表2可见血浆药物浓度达峰时间为50～75min。

    2.5   血药浓度用非房室模型计算药动学参数   犬口服血塞通肝后人参皂苷Rg1的主要药动学参数，Cmax为15.49±3.14ng/μl，tmax为56.70±5.20min，t1/2为55.66±13.64min，MRT为112.97±16.43min，AUC0-τ为1502.45±271.95ng·min·μl-1，AUC0-∞为1765.83±363.98ng·min·μl-1。

    3   讨      论

    本研究建立了血塞通片血浆内HPLC测定方法，流动相系统采用乙腈和纯化水，应用外标法进行分析，Rg1最低检出限为2.8ng/μl,分离效果良好，血浆中内源性物质无干扰，流动相简单，操作方便，选择性高，具有较高的灵敏度、重现性和专属性；本法一次测定所需血浆较少，适合动物试验取血量少、多次采血的特点。驯服家犬性情温和，可以按要求口服给药、在正常清醒状态下进行采血，较大鼠与家兔更接近于人的正常生理状况。

    本实验采用非房室模型进行药动学计算，非房室模型理论可以不考虑药物的房室模型特点而用较简易的公式直接计算各常用的参数与设计给药方案。可克服房室模型以下缺点[4]：同一药物患者不同、房室模型不同，同一患者实验数据应用多室模型特性还与采样频率有关，而且多室模型计算公式复杂，计算的参数较多，所取血样也多，有的参数临床价值不大，这也为实验工作造成一定困难。

【】
  [1] 甘烦远，郑光植. 三七化学成分研究概况 [J].药学杂志，1992，27（3）：138-141.

[2] 刘华刚，肖柳华，陆中海，等. 含人参皂苷的中药制剂含量测定研究进展[J]. 广西中医学院学报，2001，18（1）：106-109。

[3] 魏均娴，杜元冲.血塞通—研究及应用[M] .昆明：云南民族出版社，1996:121.

[4] 李焕德，程泽能.临床药学[M]. 北京：人民卫生出版社，2003：12.